Tubacin增敏在胱氨酸剥夺条件下三阴型乳腺癌铁死亡

目的:Tubacin可以转变恶性肿瘤的胱氨酸不敏感的状态,我们研究主要目的是验证Tubacin在胱氨酸剥夺条件下处理三阴型乳腺癌细胞HCC38的实际效果,并验证细胞死亡类型是否为铁死亡。方法:将细胞株HCC38在DMSO、Tubacin、Erastin、及Tubacin联合Erastin四组条件下培养,通过7-AAD、LDH、ROS及脂质过氧化物检测细胞死亡及类型。结果:1) 在胱氨酸剥夺处理条件下加入Tubacin,HCC38细胞死亡增加;2) Tubacin联合Erastin处理HCC38,细胞死亡显著增加;3) Tubacin联合Erastin处理的HCC38,细胞脂质过氧化物显著和盘状结构域受体2增多。结论:Tubacin增敏在胱氨酸剥夺条件下三阴型乳腺癌铁死亡。

Erastin联合Tubacin促进乳腺癌HCC38细胞死亡

目的:根据表观遗传特征,可以对恶性肿瘤进行分型,并针对分子异常代谢给予精准打击,实现抗肿瘤目的,这是一种新兴治疗策略。在多数细胞恶变过程中,胱氨酸的成瘾是常见的异常代谢。随后,Erastin被研究者发现,它能抑制胱氨酸谷氨酸转运体(Xc-system),从而诱导细胞死亡。对大多数乳腺癌效果显著。然而,三阴型乳腺癌细胞是非间充质的,对Erastin治疗无反应。为了克服这种耐药性,我们筛选并鉴定出Tubacin,它可以转变恶性肿瘤的胱氨酸不敏感的状态。为了验证Tubacin实际效果,我们尝试在Tubacin、Erastin条件下处理三阴型乳腺癌细胞,对比观察细胞死亡实际情况。方法:本研究的三阴型乳腺癌细胞株HCC38购自ATCC公司,在DMSO、Tubacin、Erastin、及Erastin联合Tubacin条件下进行处理,以流式细胞学等方式检测细胞死亡。结果:1) 单独使用Tubaicn、Erastin处理HCC38细胞,细胞死亡幅度无明显变化。2) Erastin联合Tubacin处理癌细胞可以显著诱导死亡。3) 与DMSO、Tub、Era相比,Era + Tub组别细胞死亡明显增多。4) 与DMSO相比,Tub、Era、Era + Tub组别细胞的活性氧均不同程度增高,后两者显著增高。结论:Erastin联合Tubacin可促进乳腺癌HCC38细胞死亡。

circMTO1调控Wnt/β-catenin抑制乳腺癌细胞增殖和转移能力的机制研究

目的研究环状RNA MTO1(circMTO1)对乳腺癌细胞增殖和转移的影响及其可能机制。方法收集102例浸润性乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织,选用乳腺癌细胞系MDA-MB-231、HCC-70、MCF-7和人乳腺正常细胞系MCF-10A,采用荧光定量PCR(qPCR)检测circMTO1在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平。分别构建circMTO1过表达和circMTO1敲减质粒转染乳腺癌细胞系,分为NC组、oe-circMTO1组和sh-circMTO1组,qPCR检测转染效果。MTS实验检测各组细胞增殖能力,Transwell实验检测各组细胞转移能力。TOP/FOP荧光素酶实验检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路活性,Western blot检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-catenin、cMyc、Cyclin D1和基质金属蛋白酶7(MMP7)的表达。结果与癌旁组织和人正常乳腺细胞系相比,circMTO1在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的相对表达量降低(P<0.05)。有淋巴结转移和TNM分期为Ⅲ期的乳腺癌患者组织中circMTO1的相对表达水平较低(P<0.05)。与NC组相比,oe-circMTO1组circMTO1相对表达量增加,细胞的增殖、转移能力以及Wnt/β-catenin信号通路活性减弱,Wnt3a、β-catenin、cMyc、Cyclin D1和MMP7蛋白表达水平降低(P<0.05);shcircMTO1组circMTO1相对表达量降低,细胞的增殖、转移能力以及Wnt/β-catenin信号通路活性增强,Wnt3a、β-catenin、cMyc、Cyclin D1和MMP7蛋白表达水平增加(P<0.05)。结论circMTO1在乳腺癌细胞中呈低表达,circMTO1通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活性,从而抑制乳腺癌细胞的增殖和转移能力。

基于TCGA数据库分析乳腺癌中TERT相关分子网络机制

目的通过TCGA数据库中的数据分析TERT基因在乳腺恶性肿瘤中的表达及生物学作用。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载乳腺癌的基因表达数据与临床资料。利用R软件包进行TERT表达差异分析及其与患者预后相关性;通过共表达网络及LinkedOmics在线数据库分析共表达基因及潜在调控mRNA分子。使用Spearman和CIBERSORT算法,分析TERT与肿瘤微环境的相关性。使用GDSC在线数据库分析TERT基因与常见化疗药物的敏感性。通过GSEA富集分析TERT可能参与的信号通路。结果 TERT在乳腺癌样本中的表达水平显著上调,差异有统计学意义(P<0.05),其表达量与患者的stage分期呈显著正相关(P<0.05)。通过单、多因素Cox分析表明TERT基因可作为乳腺癌的独立预后因子[P<0.05,HR=1.474 (1.138~1.909)]。通过共表达及LinkedOmics数据库分析结果表明TERT表达与ALKAL1、CNPY1、FSD1、GF1B、HMGB1P1等5个基因正相关及与DERA、MCM5、AC004858.1、SLCTA14、CACNA1G-AS1等5个基因呈负相关,与mir-1245、mir-337、mir-10b、mir-199a-1、mir-377等5个miRNA呈正相关。CIBERSORT算法和Spearman相关系数分析表明TERT与T cells CD4 memory activated、Macrophages M0、Macrophages M1显著正相关,与Mast cells resting、T cells CD4 memory resting显著负相关。通过GDSC数据库分析表明TERT的表达与达沙替尼、吉西他滨、埃罗替尼以及伊马替尼、吉非替尼、顺铂等药物的敏感性相关(P<0.05)。TERT可富集在核糖核酸聚合酶、错配修复、原发性免疫缺陷信号通路。结论 TERT基因在乳腺癌样本中高表达及其与患者预后较差有关,表明TERT基因是乳腺癌的发病机制、诊断及治疗的靶点。