Zn^(2+)对PPR蛋白锌指结构域原核表达的影响

目的研究Zn^(2+)对PPR蛋白锌指结构域的原核表达、纯化过程的影响,并对Zn^(2+)的作用机制进行了初步探索。方法采用分子克隆的方法构建PPR蛋白锌指结构域及其突变体的His-SUMO融合蛋白表达质粒,研究Zn^(2+)对其原核表达及Ni-柱亲和纯化过程的影响,并利用快速诱导法对Zn^(2+)的作用机制进行了初步探索。结果培养基中添加1 mmol/L Zn^(2+)可明显提高融合蛋白的稳定性;亲和纯化时在上清中添加10 mmol/L EDTA可明显提高亲和纯化效率;Zn^(2+)作用机制的初探实验表明只有Zn^(2+)可作用于锌指结构位点,并帮助稳定锌指结构域。结论 Zn^(2+)可作用于PPR蛋白的锌指结构位点,并使锌指结构变得稳定;在蛋白原核表达时添加一定浓度的Zn^(2+)可明显提高蛋白稳定性。

咳喘顺丸治疗慢性支气管炎患者的疗效观察及对血清及痰中炎症介质水平的影响

目的:探讨咳喘顺丸治疗慢性支气管炎患者的疗效观察及对血清及痰中炎症介质水平的影响。方法:回顾性收集2014年6月至2016年12月期间我院门诊及住院的90例慢性支气管炎急性发作患者的临床资料,中医诊断辨证属痰热郁肺证,按治疗方法不同分为对照组(常规西药治疗,n=45)和观察组(对照组基础上加服咳喘顺丸治疗,n=45)。判定治疗疗效,治疗前后分别检测血清、痰标本中细胞炎症介质水平。结果:观察组临床总有效率为93.33%,明显高于对照组的77.78%。两组治疗前血清、痰中炎症介质水平比较无统计学意义,治疗后各项血清、痰中炎症介质水平均较治疗前降低,但观察组治疗后血清、痰中白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)C反应蛋白(CRP)水平降低幅度均明显高于对照组。观察组咳嗽、咳痰、喘息消失时间均较对照组短。两组患者在治疗观察期间均未见明显的不良反应。结论:常规治疗基础上加用咳喘顺丸可通过有效降低血清及痰中炎症介质水平来提高慢性支气管炎的临床治疗疗效,并有效促进患者症状缓解,安全可靠。

RNA编辑蛋白OTP82的表达与纯化

目的:利用原核系统表达RNA编辑蛋白OTP82,通过蛋白变复性的方法得到全长蛋白,并优化实验条件提高OTP82的收率。方法:利用原核表达系统表达OTP82全长融合蛋白(HSO),表达后的菌体用高压细胞破碎仪匀浆后收集包涵体并用包涵体洗涤液重复洗涤两遍,然后用含有8 M尿素的变性缓冲液将包涵体搅拌溶解得到蛋白原始液。将蛋白原始液复性后采用镍柱亲和纯化,通过SDS-PAGE和Western-blot检测等方法对HSO的变复性结果进行筛选。结果:通过对复性缓冲液中盐浓度、谷胱甘肽的浓度和比例以及小分子添加剂的探索,得到了OTP82融合蛋白适合的变复性条件(pH 8.5100 mM Tris,400 mM NaCl,200 mM精氨酸,5 mM GSH,0.5 mM GSSG,6 mMβ-环糊精,2 mM EDTA,1 mM PMSF)复性率达到2.73%(获得蛋白0.42 mg/L)。结论:通过变复性的方式能够在体外得到OTP82的粗蛋白,为揭示RNA编辑蛋白作用机制提供基础实验依据,为后续利用PPR蛋白进行工程蛋白设计奠定了基础。