基于环保型样本释放剂联合超声波在病理组织切片制备中的应用价值

【目的】探讨环保型样本释放剂联合超声波在病理组织切片制备中的应用价值。【方法】选取2013年2月至2022年12月期间,佛山市中医院送检的2518病理标本为研究对象,同一标本取材两块,随机分成两组,环保快速组:采用环保型样本释放剂联合超声波的快速模式制作病理组织切片;传统组:采用甲醛、乙醇、二甲苯,按照常规的模式制作切片。比较两组切片的苏木素(HE)染色效果、免疫组织化学(IHC)染色效果和非典型性脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤(ALT/WDL)组织切片的MDM2基因检测结果的差异。【结果】①两组病理组织的蜡块脱水良好、组织硬度适中。两组切片HE染色后,组织切面完整,无裂隙及颤痕、细胞核与细胞质染色对比恰当、透明度佳、染色均匀、无组织掉片。环保快速组的HE染色优良率和HE染色评分均高于传统组,但是差异均无统计学意义(χ^(2)=3.125,P_(1)=0.070;t=0.965,P_(2)=0.334)。②两组切片IHC染色后,细胞阳性定位准确、呈特异性着色、染色均匀染色强度适中、染色敏感度好、无组织掉片。环保快速组的IHC染色优良率和IHC染色阳性率均低于传统组,但是差异均无统计学意义(χ_(1)^(2)=2.769,P_(1)=0.092;χ_(2)^(2)=0.800,P_(2)=0.375)。③两组WDL组织切片的背景清晰,轮廓分明,染色均匀,细胞清晰可见,细胞核界限清楚,杂交信号在背景荧光下清晰、明亮,无杂信号。两组切片均杂交成功,MDM2均呈阳性扩增。环保快速组杂交成功细胞数低于传统组,但是差异无统计学意义(t=1.414,P=0.230)。【结论】使用环保型样本释放剂联合超声波的组织处理模式,能保障病理组织切片HE染色、IHC染色和MDM2基因检测效果,且更为高效和环保,适合在各级医院中推广使用。

黏蛋白乳化剂在1418例细胞蜡块制备技术中的应用研究

目的探讨黏蛋白乳化剂制备的1418例非妇科细胞蜡块的苏木素伊红(HE)染色、免疫组织化学(IHC)染色的效果和诊断价值。方法收集2018年7月至2022年1月该院送检的1418例细胞学标本,离心,弃上清液,加入甲醛-乙醇(AF)液5 mL,黏蛋白乳化剂250μL,混匀,离心,弃上清液,取出沉淀细胞块放入包埋盒,按照常规石蜡切片制备程序进行固定、脱水、透明、包埋、切片和HE染色,对细胞块病理诊断为恶性的285例标本,切2138张片进行IHC染色检测,观察黏蛋白乳化剂制备的细胞块及切片的外观大体情况;探讨细胞块切片HE染色和IHC染色的显微镜下情况和切片优良率;以患者术后病理诊断结果为金标准,综合评估黏蛋白乳化剂制备的细胞块的诊断效能。结果(1)黏蛋白乳化剂制备的细胞块制作成功率是100.00%,细胞块外观呈圆形果冻样胶体的结构、细胞聚集成团、硬度适中。细胞块切片外观完整、呈规则的圆形结构、疏松度适中。(2)细胞块可连续均匀切片,HE染色背景清晰,核浆着色鲜艳,红蓝分明,对比清晰,细胞均匀分布于圆形区域内,细胞形态呈现立体感,细胞块切片厚薄均一,IHC染色背景干净,结构和细胞均呈特异性染色。(3)细胞块的HE染色切片优良率为98.94%;IHC染色切片优良率为99.30%。(4)细胞块诊断的灵敏度、特异度、符合率和约登指数分别是96.94%、100.00%、99.37%、0.9694。结论黏蛋白乳化剂制备细胞块的技术操作便捷,成本低,富集率高,形态好,细胞块石蜡切片可长期保存,其HE染色和IHC染色优良率高,具有良好的诊断效能,应用前景广阔。

Leica自动染色盖片机应用于苏木素-伊红染色的体会

随着病理技术的发展，我科近年来引进德国LeicaST5020自动染色机和CV5030自动盖片机，应用于苏木素一伊红（HE）染色代替手工染色及手工封片，染色效率、染色质量及盖片质量明显提高，染色取得良好的效果。

尖锐湿疣高危自检人群HPV–DNA分型与定量检测分析

目的:分析尖锐湿疣高危自检人群全型人乳头瘤病毒(HPV)–DNA分型与定量检测结果。方法:选取2017年10月至2019年10月于佛山市中医院进行全型HPV–DNA分型与定量检测的1980例尖锐湿疣及无症状高危自检者,利用流式荧光杂交法全分型与定量检测HPV–DNA并进行分析。结果:女性HPV–DNA阳性检出率53.48 %高于男性患者39.45 %,差异具有统计学意义(P<0.05),其中6/11型、16型、16+16/11型、18型、18+6/11型阳性检出率分别为24.19 %、6.01 %、3.94 %、3.38 %、3.33 %;不同人群HPV–DNA检测结果显示HPV–DNA阳性检出率由高至低依次为尖锐湿疣者74.02 %、尖锐湿疣病史者47.34 %、性伴侣及配偶有尖锐湿疣者43.43 %、高危性行为史自检者32.49 %、其他性病者21.38 %;HPV–DNA阳性患者患者焦虑人群占69.12 %,抑郁人群占55.65 %。结论:尖锐湿疣、无症状高危自检人群女性HPV–DNA阳性率高于男性,且以6/11型感染为主,患者均存在焦虑、抑郁症状,对于无症状高危人群应加强性病知识宣传、给予心理干预、提高HPV–DNA检测,促进患者早期接受治疗。

LBP液基细胞学沉降式制片技术在痰脱落细胞诊断中的应用

目的探讨LBP液基细胞学薄层沉降技术在痰细胞学检查中的应用及肿瘤诊断价值。方法病人从肺部深处用力咳出晨痰至LBP细胞保存基液专用采样瓶内,加2～5ml1,4-二硫代苏糖醇化痰液,置振荡器上振荡20～30min,低速离心机上离心5～10min,沉渣用缓冲液稀释后入染色舱。结果全部105例标本均与传统涂片方法对比,LBP液基细胞学沉降法阳性率24.7%,传统涂片方法阳性率14.3%,LBP液基细胞学薄层沉降法较传统涂片法高出10.4%。结论LBP液基细胞学沉降法在痰液中的应用操作简便、成本低、制片非常清晰。对恶性肿瘤的检出率高。

新型超声组织处理仪在骨组织快速脱钙及制片技术中的应用

目的探讨新型超声组织处理仪（JYCL-2）在骨组织快速脱钙及快速石蜡制片技术中的应用。方法用10％～15％甲酸甲醛脱钙液配合该仪器的超声波技术结合水浴加温．加快骨组织脱钙；用BT生物组织处理剂和BT生物环保透明剂加快组织脱水、透明、浸蜡速度。结果本方法能够使骨组织快速脱钙并快速制出石蜡切片，用这些切片制作常规HE、免疫组化及组织化学染色，细胞组织结构完好，质量优良，与常规骨组织脱钙制作切片的质量无明显差别。结论用JYCL-2超声波对骨组织脱钙及脱水时间明显缩短，脱钙及染色效果良好、

乳腺癌组织中EZH2、SOX4蛋白表达变化及其意义

目的探讨乳腺癌组织中果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(EZH2)、Y染色体性别决定区相关高迁移率盒蛋白4(SOX4)蛋白表达变化及其临床意义。方法选择97例乳腺癌患者的乳腺癌组织标本为观察组,癌旁正常组织标本为对照组,采用免疫组化SP法检测两组标本中的EZH2、SOX4蛋白,分析乳腺癌组织EZH2、SOX4蛋白表达与乳腺癌患者临床病理参数的关系。用Kaplan-Meier法绘制患者生存曲线,比较EZH2蛋白阳性、阴性表达者及SOX4蛋白阳性、阴性表达者的累积生存率和总生存时间。结果观察组、对照组EZH2蛋白表达阳性率分别为80.41%(78/97)、48.45%(47/97),两组相比,P<0.05;SOX4蛋白阳性表达率分别为82.47%(80/97)、57.73%(56/97),两组相比,P<0.05。乳腺癌组织中EZH2蛋白表达与患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期均无关(P均>0.05),与淋巴结转移和分化程度相关(P均<0.05);乳腺癌组织中SOX4蛋白表达与患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期、分化程度均无关(P均>0.05),与淋巴结转移相关(P<0.05)。Spearman秩相关检验结果显示乳腺癌组织EZH2、SOX4蛋白表达呈显著正相关(γs=0.251,P=0.013)。患者随访13~71个月,中位随访时间44个月。EZH2蛋白表达阴性、阳性者累积生存率分别为89.47%(17/19)、65.38%(51/78),总生存时间分别为(67.14±2.62)、(54.30±2.30)个月,EZH2蛋白表达阴性、阳性者累积生存率和总生存时间相比,P均<0.05。SOX4蛋白表达阴性、阳性者累积生存率分别为94.41%(16/17)、65.00%(52/80),总生存时间分别为(68.75±2.15)、(54.35±2.27)个月,SOX4蛋白表达阴性、阳性者累积生存率和总生存时间相比,P均<0.05。结论乳腺癌组织EZH2、SOX4蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织。检测乳腺癌组织EZH2、SOX4蛋白有助于判断患者病情和预后。

小汗腺汗管纤维腺瘤1例

患者女性,50岁。背部疣状斑块8年。8年前无明显诱因背部出现一孤立性疣状斑块,无自觉不适,近1年来斑块渐增大,自行到医院要求行斑块切除术。发病前局部无外伤史,既往体健,家族中无类似疾病患者。查体：背部可见一大小为5.5 cm×3 cm×1 cm的灰红色丘疹样疣状斑块,表面粗糙,多结节状,无明显压痛,部分疣状突起可推动,质中。初诊为皮肤疣，予根治性切除术。

骨组织甲酸脱钙浓度探讨

骨组织是一种坚硬的结缔组织，它由细胞、基质、纤维组成。基质中含有大量的固定无机酸盐，骨盐主要是羟基磷灰石的结晶．即磷酸钙和碳酸钙，其中大部分为水合磷酸钙^[1]，组织质硬，不能直接制片，必须经过脱钙处理后，才能进行常规苏木素-伊红（HE）制片、特殊染色及免疫组织化学检查。以往病理科常用的脱钙液有硝酸和盐酸的配方，但由于酸性过强，容易导致过度脱钙，组织结构被破坏而影响诊断；在病理技术实践中，发现甲酸可以作为一种温和的脱钙剂，但在我们的实践中发现，不同的甲酸浓度对制片及后续的染色均有影响。为保证制片的质量，本实验比较了不同浓度的甲酸溶液的脱钙效果，以确定既能完全脱钙又不影响病理诊断的甲酸脱钙液浓度，现报告如下。

甲酸脱钙液的浓度对骨组织脱钙后切片染色效果的研究

目的探讨骨组织经不同浓度的甲酸脱钙液24小时脱钙后切片染色效果，选择最佳甲酸脱钙工作液。方法350例骨组织标本每例取材3份，分别用40％、30％、20％的甲酸脱钙液常温下脱钙24小时，观察三种不同浓度的甲酸脱钙液脱钙后骨组织的切片和HE染色情况。结果骨组织经40％甲酸脱钙液脱钙后，切片完整，但HE染色核质偏浅，胞浆偏红；30％甲酸脱钙液脱钙后，切片完整，HE染色核质清晰，胞浆鲜艳；20％甲酸脱钙液脱钙后，切片不够完整，HE染色核质偏浅，胞浆偏浅。结论脱钙液脱钙后应保持组织切片完整，染色效果良好，且30％的甲酸脱钙液是较理想的工作液。

甲状腺冰对蜡块与冰剩蜡块免疫组织化学染色效果比较

目的通过对甲状腺冰对蜡块与冰剩蜡块免疫组织化学染色效果进行对照观察,发现冰对蜡块与冰剩蜡块对免疫组织化学染色效果的差异,为选择冰对蜡块与冰剩蜡块做免疫组织化学提供理论实践依据。方法 3冰对蜡块与冰剩蜡块分别切片用EnVision法做TTF-1,CK19,Gal-3,HBME-1,TPO,TG免疫组织化学染色。结果对TTF-1,CK19,Gal-3,HBME-1,TPO,TG免疫组织化学染色结果的背景,定位进行分析,冰对蜡块与冰剩蜡块免疫组织化学染色各项指标阳性率完全一致。结论冰对蜡块与冰剩蜡块分别做免疫组织化学染色结果无明显差别,在没有冰剩蜡块或冰剩蜡块不符合要求时选择冰对蜡块做免疫组化,结果对诊断无影响。

伴有淋巴样间质的微结节型胸腺瘤2例并文献复习

2例伴有淋巴样间质的微结节型胸腺瘤(micronodular thymoma with lymphoid stroma,MNT)发病年龄52,63岁,均为女性,分别为纵隔囊实性肿物和胸骨上窝实性肿物,无重症肌无力及自身免疫疾病等。瘤组织以丰富淋巴细胞间质分隔的散在上皮性结节为特征,上皮性结节的细胞呈梭形或卵圆形,形态温和,未见病理性核分裂及坏死,淋巴细胞间质可见具生发中心的滤泡。免疫组织化学上皮细胞CK,CK5/6,p63(+),CD99散在(+),EMA囊性变区域(+),CD117(-);淋巴细胞间质包含B和T细胞,以CD20(+)的B细胞为主,成熟T细胞CD3,CD5(+),而Td T,CD1α,CD99阳性的未成熟T细胞分布在上皮结节周围,少数散在分布在上皮结节内。MNT非常罕见,具有恶性潜能,恶性MNT具有低度恶性生物学行为,极少数病例可出现死亡,其上皮细胞成分和淋巴细胞间质都有恶变的可能。恶性的MNT很可能是一个连续有移行的过程。MNT的治疗中,完整切除肿物并保证肿物切缘未受肿瘤累及是至关重要的。

510例股骨头标本常规脱水与超声波快速脱水对切片效果的比较研究

目的通过510例股骨头标本HE制片结果的分析，比较常规脱水与超声波快速脱水的效果。方法股骨头标本用锯锯成2cm×2cm×0.3cm的薄片二份，用30％的甲酸脱钙液进行脱钙16～18小时，分别用常规脱水的方法及超声波快速脱水的方法脱水处理后，经石蜡包埋、切片、染色制成HE切片，观察染色后的组织结构的清晰度及完整性。结果股骨头标本经二种脱水方法处理后制成的HE切片，阅片比较发现超声波快速脱水法优良率略高于常规脱水法，两种方法比较，P〉0．05，差异无统计学意义。但超声波组织处理仪能明显缩短病理制片工作时间。结论骨组织脱钙后采用超声波快速脱水的方法可以代替常规脱水，HE切片效果良好，缩短了病理检验报告时间，更好地满足了临床工作的需求。

端粒酶、MUC1和STAT6在不典型子宫内膜增生癌变过程中的表达

目的探讨不典型子宫内膜增生癌变过程中端粒酶、黏蛋白(MUCl)和信号转导、转录活化因子6(signal transducers and activators of transcription,STATs)免疫组化的表达规律及临床意义。方法收集手术及刮宫标本220例,其中正常子宫内膜40例,子宫内膜轻、中、重度不典型增生各40例,子宫内膜样腺癌60例。应用免疫组化检测方法,检测上述标本中端粒酶、MUC1和STAT6的表达情况,总结各组的表达规律及特点。结果端粒酶、MUC1和STAT6三者在子宫内膜样腺癌及重度不典型增生的表达均明显高于正常子宫内膜,差异有统计学意义(P<0.05);端粒酶和MUC1在子宫内膜样腺癌的表达明显高于轻度、中度不典型增生,差异有统计学意义(P<0.05);端粒酶在重度和轻度不典型增生两者之间表达差异具有统计学意义(P<0.05);但不同程度不典型增生及子宫内膜样腺癌中STAT6的表达两两对比差异无统计学意义(P>0.05);端粒酶、MUC1和STAT6在重度不典型增生和子宫内膜样腺癌中的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在同等程度的子宫内膜不典型增生中,端粒酶、MUC1和STAT6三者联合检测,表达阳性或者阳性程度进行性加强的病例可能提示其进展为更重的不典型增生乃至癌变的潜能更大,对临床早期诊断及预后判断有一定的指导意义。

P504s/P63/34βE12一次性标记在前列腺癌穿刺标本中的诊断价值

目的通过一次性标记的方法,探讨混合型抗体P504s/P63/34βE12在前列腺癌穿刺标本中的诊断价值。方法选择前列腺穿刺标本50例,包括前列腺癌40例,良性前列腺增生10例。同时采用双酶标记法检测混合型抗体P504s/P63/34βE12及单酶标记法分别检测单标抗体P504s、P63及34βE12,观察两种方法的标记结果。结果在40例前列腺癌中,用P504s/P63/34βE12双酶标记法有37例(92.50%)P504s阳性表达,P63、34βE12全部阴性表达;用单酶标记法有36例(90%)P504s阳性表达,P63、34βE12全部阴性表达;10例良性前列腺增生中,两种方法结果完全一致,P504s全部病例阴性表达,P63、34βE12全部病例阳性表达。两种方法在前列腺穿刺标本中表达的一致率为98%。结论通过对两种染色方法的比较,混合型抗体P504s/P63/34βE12双酶标记法较单标抗体单酶标记法更易于观察分辨,尤其对前列腺穿刺标本,前列腺癌的检出率更高,但差异无显著性。

冷冻式细胞学制片技术

巴氏涂片技术细胞收集不全,涂片细胞重叠,着色不良。液基薄层细胞检测（TCT）、液基细胞学检查（LCT）等技术,避免传统巴氏涂片的缺陷,但这些技术操作复杂,需要具备特殊设备及专用耗材,成本高昂,难于普遍推广,本文报告一种冷冻式细胞学制片技术,具体操作如下。

结直肠黏膜平滑肌瘤28例临床病理学特征

目的探讨结直肠黏膜平滑肌瘤的临床病理特征、免疫表型、病理诊断和鉴别诊断。方法回顾性复习28例结直肠黏膜平滑肌瘤的临床病理学资料,行形态学观察、免疫组化EnVison两步法染色,并复习相关文献。结果28例患者中男性17例,女性11例,发病年龄28~74岁,中位年龄54岁。临床上多为无症状结肠镜下偶然发现的表面黏膜光滑的小息肉,息肉直径2~12 mm,平均4.5 mm。镜下见肿瘤均起源于黏膜肌层,境界清楚,由形态学温和的梭形细胞组成,胞核细长,呈雪茄状,常可见核旁空泡,其胞质呈明显的嗜酸性,部分病例可见玻璃样变。细胞密度较低,呈交叉束状排列,未见核分裂象及坏死。免疫表型:瘤细胞SMA、Calponin、h-Caldesmon均阳性;desmin阳性率86%(24/28);EMA、S-100、SOX10、CD34、CD117、DOG1、ALK均阴性;Ki-67增殖指数远低于1%。18例患者获得随访资料,随访时间10~56个月(平均26.5个月),均无复发。结论结直肠黏膜平滑肌瘤为少见的良性肿瘤,确诊需结合形态学及免疫组化标记,应与结直肠的其它梭形细胞病变鉴别。

6例恶性孤立性纤维性肿瘤的临床病理特征

回顾性分析6例恶性孤立性纤维性肿瘤(malignant solitar y f ibrous tumor,MSFT)的临床病理特征,其中男5例,女1例;年龄25~69(中位数42.17)岁,分别发生在前额、膝部、大腿、锁骨上及胸腹壁,肿瘤直径1.8~24.5 cm。组织学特点:瘤细胞丰富密集,其间可见绳索样、玻璃样变胶原纤维分隔,瘤细胞呈短梭形、梭形,异型性明显,核分裂易见(≥4/10 HPF),瘤细胞呈束状、漩涡状排列,部分区域可见血管外皮瘤样结构,局灶可见出血或肿瘤性坏死。肿瘤部分区域可见浸润性边缘。免疫组织化学特点:6例均弥漫表达波形蛋白(Vimentin),STAT6,CD34,Bcl-2和CD99,1例的孕激素受体(progesterone receptor,PR)局灶阳性,6例的Ki-67为2%~60%(+)。S100,AE1/AE3,EMA,CD117,SOX10,Desmin,平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA),雌激素受体(estrogen receptor,ER)均阴性。MSFT的确诊主要依赖组织学的形态特征和免疫组织化学染色。形态学非常温和良善的SFT也可能有侵袭性生物学行为,临床上应尽早完整切除肿物并对孤立性纤维性肿瘤(solitar y fibrous tumor,SFT)长期随访,注意恶变的可能性。手术切除的完整性以及必要的放/化疗、靶向药物治疗等对预后非常重要。

掌纤维瘤病9例临床病理特征

共纳入9例掌纤维瘤患者,其中男5例,女4例,发病年龄17~68岁,发病部位以掌尺侧多见。肿瘤大体均为单结节状,大小0.8~2.2(平均1.3)cm,切面实性灰白灰黄色。镜下病变由增生的梭形纤维母细胞和不等量的胶原纤维组成,呈束状排列,浸润筋膜组织,核分裂罕见。免疫组织化学显示梭形细胞均表达Vimentin及SMA,Calponin,MSA等肌源性标志物,β-catenin有5例核阳性、4例阴性(核阳性率56%),而Desmin,S-100,CD34,EMA均阴性,Ki-67增殖指数小于2%。7例获得随访2~40个月,1例复发。掌纤维瘤病是一种较少见的特殊类型的纤维瘤病,诊断及鉴别诊断需靠临床症状、组织学形态及免疫表型特点,合适的外科手术治疗具有较低的复发率。

EWSR1/FUS-TFCP2融合的上皮/梭形细胞横纹肌肉瘤临床病理学研究

目的:探讨EWSR1/FUS-TFCP2融合的上皮/梭形细胞横纹肌肉瘤临床病理及分子遗传学特征。方法:收集佛山市中医院病理科2019年1月至2022年12月明确诊断为EWSR1/FUS-TFCP2融合的上皮/梭形细胞横纹肌肉瘤会诊病例14例,对其临床、病理形态学、免疫组织化学特点进行回顾性分析,利用荧光原位杂交及二代测序技术分析其分子遗传学特征,并复习相关文献。结果:14例患者中男性5例,女性9例,年龄6~36岁(平均22岁),发生部位分别为头颈部9例,骨盆2例,膀胱1例,左耻骨1例,腹壁、肱骨及耻骨多发1例。临床表现多为伴有疼痛的占位性病变,影像学表现多为侵袭性的放射学特征伴有软组织累及。肿瘤平均直径6.6 cm(最大径2~23 cm),瘤组织界限不清,镜下主要由比例不等的梭形细胞及上皮样细胞构成。瘤组织分化不一,分化差的瘤组织异型性明显,核分裂象活跃,肿瘤性坏死明显;分化好的瘤组织,梭形细胞和/或上皮样细胞胞质中等或丰富,核轻度异型性,排列呈束状或席纹状。免疫组织化学显示瘤组织表达MyoD1、Myogenin及结蛋白,程度不等地表达间变性淋巴瘤激酶、上皮细胞膜抗原、广谱细胞角蛋白。本组14例病例,其中9例通过国内4家不同的分子平台进行二代测序检测,同时加做荧光原位杂交(FISH)获得验证,另外5例采用FISH技术显示有TFCP2的断裂(同时加做FISH检测显示有EWSR1或FUS的断裂)。14例病例中,6例为EWSR1-TFCP2融合,8例为FUS-TFCP2融合。13例获得随访资料,随访时间5~37个月,7例因肿瘤转移死亡,其余6例存活(2例复发并转移、2例复发、1例转移、1例无复发转移)。结论:EWSR1/FUS-TFCP2融合的上皮/梭形细胞横纹肌肉瘤是一种具有上皮样和梭形细胞形态特征且伴有特征性融合分子的高度侵袭性恶性肿瘤,好发于骨,尤其是颌面部。发病年龄较广。分子特征为EWSR1/FUS-TFCP2的融合,熟悉其临床病理学特征有利于诊断及鉴别诊断,避免误诊。