基于TCGA数据库建立乳腺癌自噬相关基因预后预测模型及其应用

目的:基于自噬相关基因构建乳腺癌患者的预后风险模型。方法:TCGA数据库中下载乳腺癌及正常乳腺组织的转录组数据和临床信息,首先筛选出差异表达的基因,然后从中选取自噬相关基因,利用LASSO回归分析等构建预后风险模型,并应用ROC曲线评估模型的预测能力;收集中山大学附属第三医院甲乳外科2022年9月~2022年11月乳腺癌手术标本26例,采用免疫组织化学法和RT-qPCR法检测临床样本中乳腺癌自噬相关基因IL-24和PPP1R15A在肿瘤组织和癌旁组织中的表达情况,RT-qPCR法检测乳腺癌临床样本中ESR1、PGR和ERBB2的表达量,进行IL-24和PPP1R15A与病理特征的相关性分析。结果:分析得到的29个基因的表达谱数据,采用LASSO Cox回归分析构建预后风险模型。经过回归分析,得到了预测乳腺癌预后最优的基因及其相关系数,自噬基因的预后风险模型公式为:−Exp(IL-24)×0.5328−Exp(PPP1R15A)×0.3985。根据模型计算每个乳腺癌患者的风险值,根据中位数将患者分为高风险组和低风险组。为增强模型验证的可靠性,将患者随机分为测试组和验证组分别验证。测试组Kaplan-Meier生存分析中P<0.01,高风险组的5年生存率为76.3%,低风险组的5年生存率为84.5%;验证组Kaplan-Meier生存分析中P=0.022,高风险组的5年生存率为77.9%,低风险组的5年生存率为89.3%。ROC曲线分析显示,在测试组中预后风险模型对乳腺癌患者1、3、5年总生存期预测的AUC值分别为0.746、0.706和0.615;在验证组中预后风险模型对乳腺癌患者1、3、5年总生存期预测的AUC值分别为0.594、0.553和0.592。分析了风险因素与临床变量[雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER2)]之间的关系。结果显示,ER组阴性的风险评分高于阳性(t=8.521,P<0.05),PR组阴性的风险评分高于阳性(t=7.714,P<0.05),HER2组0、1+、2+之间风险评分无显著统计学差异,但是3+的风险评分高于1+(t=3.264,P<0.05)和2+(t=3.772,P<0.05)。单因素Cox回归和多因素Cox回归分析显示,风险评分均是是乳腺癌患者的独立预后因素。在收集的临床样本中,IL-24在乳腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),而PPP1R15A在癌旁组织中的表达水平显著高于乳腺癌组织(P<0.01)。乳腺癌组织中IL-24与ESR1(P=0.0499)和PGR(P=0.0006)的表达呈正相关,PPP1R15A与ESR1(P=0.0379)和PGR(P=0.0367)的表达呈正相关,但IL-24和PPP1R15A与ERBB2的表达相关性分析无显著差异。结论:基于自噬相关基因构建的预后风险模型是一个独立预后因素,可有效预测乳腺癌患者的预后。

DLL1基因在乳腺癌及三阴性乳腺癌中的表达及其临床意义

目的研究DLL1基因在乳腺癌及三阴性乳腺癌中的表达情况,并探讨其表达差异与临床资料及预后的关系。方法从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库收集乳腺癌数据集,下载DLL1基因表达谱资料,取中位数分为高表达组与低表达组,分析其与临床资料及病例特征的关系;利用Kaplan-Meier Plotter分析DLL1与乳腺癌患者预后的相关性。结果 DLL1在乳腺癌及三阴性乳腺癌中的表达均明显低于正常乳腺组织,在乳腺癌中,DLL1在不同雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)状态、年龄、病理组织类型的表达差异有统计学意义(P <0.01);在不同人表皮生长因子2(HER2)状态,是否绝经、不同种族、有无远处转移、有无淋巴结转移的表达差异无统计学意义(P> 0.05)。在三阴性乳腺癌中,DLL1在年龄、病理组织、绝经、种族、远处转移、淋巴结转移各参数不同状态下的表达差异无统计学意义(P> 0.05)。DLL1表达越低,乳腺癌患者总生存时间和无病生存时间更短,但是在三阴性乳腺癌患者中,DLL1表达越低,乳腺癌患者无病生存时间更长。结论在乳腺癌和三阴性乳腺癌中,DLL1低表达并且与患者的预后相关,DLL1的表达与乳腺癌ER、PR、年龄、病理组织类型相关性差异有统计学意义,DLL1在乳腺癌的发生中可能起着重要作用。

SCNM1在乙肝相关性肝癌中的表达及临床意义

目的:研究钠离子通道调节蛋白1(SCNM1)在乙肝相关性肝癌中的表达情况,并探讨其表达差异与临床病理特征及预后的关系。方法:标本来源于2013年1月～2015年12月在中山大学附属第三医院接收治疗的108例乙肝相关性肝癌患者,所有患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。结合公共数据库中的肝癌资料,分析SCNM1的m RNA表达水平;应用RT-qPCR检测乙肝相关性肝癌组织及癌旁组织中SCNM1的m RNA表达水平,并分析SCNM1的表达水平与乙肝相关性肝癌临床病理特征的关系;利用Kaplan-Meier plotter分析SCNM1与肝癌患者预后的相关性。结果:TCGA数据库、Human Protein Atlas数据库和Oncomine数据库的分析结果显示,SCNM1在肝癌组织中的表达量明显高于正常肝组织(P <0. 01)。SCNM1主要分布于细胞核中。RT-qPCR检测结果显示,乙肝相关性肝癌组织中SCNM1的m RNA中位表达水平明显高于其配对癌旁组织(t=8. 082,P <0. 01)。乙肝相关性肝癌患者中SCNM1的表达水平与肝硬化、丙氨酸转氨酶和肿瘤大小具有相关性(P <0. 05),而与患者的性别、年龄和肿瘤包膜等临床病理特征无相关,SCNM1高表达的肝癌患者总生存时间较低表的患者达短(HR=1. 53,P=0. 016),SCNM1高表达的乙肝相关性肝癌患者总生存时间更短(HR=2. 41,P=0. 015)。结论:在乙肝相关性肝癌中,SCNM1高表达并且和患者的预后相关。SCNM1在乙肝相关性肝癌的发生中可能起着重要作用。

SIAH2在鼻咽癌及癌旁组织中的表达及意义

目的观察人鼻咽癌及癌旁组织中SIAH2表达的变化,探讨SIAH2在鼻咽癌及癌旁组织中差异表达的临床意义。方法应用免疫组织化学检测120例鼻咽癌及癌旁石蜡包埋组织中SIAH2的表达情况,Westernblot检测40例鼻咽癌及癌旁组织中SIAH2的蛋白表达情况,Real time PCR检测上述标本中SIAH2 mRNA的表达并比较3种方法检测结果的差异。结果鼻咽癌组织中SIAH2蛋白表达量明显高于癌旁正常鼻咽组织中SIAH2蛋白表达量(P<0.05);鼻咽癌组织中SIAH2 mRNA表达量明显高于癌旁鼻咽组织中SIAH2 mRNA蛋白表达量(P<0.05)。结论 SIAH2过表达与鼻咽癌的发生发展有密切关系。通过将SIAH2作为靶点可为防控鼻咽癌的发生和发展提供新的思路。

SIAH2在乳腺癌发生、发展过程中的作用

目的探讨SIAH2对乳腺癌细胞生长、侵袭和迁移等生物学行为的影响,揭示乳腺癌发生的分子机制。方法:检测乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MDA-MB-435s,MDA-MB-468,MCF-7中SIAH2的表达情况,将SIAH2高表达的MDA-MB-435s细胞通过RNA干扰的方法敲除SIAH2基因,通过MTT试验、划痕试验、Transwell小室侵袭试验检测细胞生物学行为的变化。结果:SIAH2被敲除后MDA-MB-435s细胞的增殖、侵袭和迁移运动能力下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:SIAH2参与调控乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移运动,可能是乳腺癌分子诊断和靶向治疗的有效靶点。

β-catenin与cyclin D1在乳腺癌中的表达及与其他临床病理指标的相关性分析

目的:检测乳腺癌组织中β-catenin、cyclin D1的表达,分析其相关性及与ER、PR、HER-2表达及临床分期和腋窝淋巴结状况的关系。方法:采用简单随机抽样的方法选择中山大学附属第三医院1980年1月至2010年6月收治的女性乳腺癌患者外科手术切除标本110例,分别检测乳腺癌组织的β-catenin、cyclin D1、ER、PR、HER-2的表达水平,分析其相互关系及与肿瘤临床分期、腋窝淋巴结转移等临床指标的相关性。结果:110例乳腺癌标本中,61.82%癌组织β-catenin正常表达,38.18%异位表达;60%呈cyclin D1过度表达。乳腺癌β-catenin的异常表达与cyclin D1过度表达有显著的正相关性。β-catenin的表达与乳腺癌TNM分期、淋巴结转移正相关,与ER、PR的表达负相关,而与Her-2表达无相关。cyclin D1的表达与乳腺癌TNM分期、淋巴结转移正相关,与ER、PR的表达负相关,而与Her-2表达无相关。结论:β-catenin的异常表达激活cyclin D1的过度表达,引起细胞增殖和分化失控,在乳腺癌的发生中可能起着重要作用。可成为临床判断乳腺癌预后的指标之一。

SIAH2在乳腺癌及癌旁组织中的差异表达及其临床意义

目的观察人乳腺癌及癌旁组织中SIAH(seven in absentia homologues)2的表达情况,探讨SIAH2在乳腺癌及癌旁组织差异表达的临床意义。方法应用免疫组织化学检测110例乳腺癌及癌旁石蜡包埋组织中SIAH2,Western blotting和Realtime PCR检测35例乳腺癌及癌旁组织中SIAH2的蛋白表达情况。结果乳腺癌组织中SIAH2蛋白表达量明显高于癌旁乳腺组织中SIAH2蛋白表达量(P<0.05);乳腺癌组织中SIAH2mRNA表达量明显高于癌旁乳腺组织中SIAH2mRNA蛋白表达量(P<0.05)。结论 SIAH2过表达与乳腺癌密切关系。SIAH2可能成为防控乳腺癌的靶点。

KIF4A在乳腺癌中的功能分析及临床意义

目的研究KIF4A基因在乳腺癌中的表达情况,并探讨其可能的作用机制及表达差异与预后的关系。方法从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库收集乳腺癌数据集,下载KIF4A基因表达谱资料,相对表达量的中位数为5.77,以5.77为节点将乳腺癌患者分为KIF4A高表达组与KIF4A低表达组,分析其与病例特征的关系;利用Kaplan-Meier Plotter分析KIF4A与乳腺癌患者预后的相关性。结果KIF4A在乳腺癌组织中的表达明显高于正常乳腺组织及乳腺细胞(P<0.01),KIF4A主要分布于细胞核和细胞骨架中,KEGG通路分析和GO功能分析显示KIF4A与细胞周期、RNA转运、P53信号通路、细胞分裂、端粒维持重组等功能有关。KIF4A与Ki67的表达高度正相关(P<0.001),预后分析表明KIF4A表达越高,乳腺癌患者总生存时间和无复发生存时间更短(P<0.001)。KIF4A的表达与淋巴结阴性乳腺癌的总生存率具有负相关性(P<0.001),而与淋巴结阳性乳腺癌的总生存率则不相关。结论在乳腺癌中,KIF4A高表达并且和患者的预后相关,KIF4A在乳腺癌的发生中可能起着重要作用。

显露喉返神经技术在困难甲状腺手术中的应用

喉返神经（recurrent laryngeal nerve,RLN）损伤是甲状腺手术中严重的并发症之一,轻则影响患者生活质量,重则危及患者生命。目前,大部分研究^[1]认为在甲状腺手术中解剖显露RLN可以降低RLN损伤的发生率。但是,对于困难甲状腺手术,

甲基硒酸对人三阴性乳腺癌细胞化疗增敏作用的机制探讨

目的:观察甲基硒酸(methylseleninic acid,MSA)对人三阴性乳腺癌细胞的化疗增敏作用及其机制。方法:采用MSA联合紫杉醇、阿霉素与三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株共培养,分别应用CCK-8实验检测化疗药物单药和联合MSA用药时细胞增殖抑制率,并通过计算合用指数,探讨MSA对化疗药物疗效的影响;用流式细胞术检测细胞周期的分布情况;应用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡变化。结果:不同浓度化疗药物联合MSA后细胞增殖率较单用化疗药物组均下降,呈明显的量-效关系,提示MSA与化疗药物具协同作用;紫杉醇联合MSA时G2/M期细胞较单药明显增多(P<0.05),阿霉素联合MSA时S期细胞较单药明显增多(P<0.05),提示MSA增强了抗肿瘤药物诱导的肿瘤细胞周期阻滞效应;与单用同一浓度的同一化疗药物相比,10nmol/L紫杉醇联合3.5μmol/L MSA后细胞凋亡率由41.1%上升至59.3%(P<0.05),0.5μmol/L阿霉素联合3.5μmol/L MSA后细胞凋亡率由30.2%上升至51.9%(P<0.01),提示MSA增强了抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞凋亡的效应。结论:MSA能增强化疗药物阿霉素和紫杉醇对三阴乳腺癌细胞的抗肿瘤效果,其机制之一可能是增强了抗肿瘤药物诱导的肿瘤细胞凋亡和周期阻滞效应。

乙醛脱氢酶1在浸润性乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrog enase 1,ALDH1)在浸润性乳腺癌患者中的表达情况及临床意义。方法:采用免疫组织化学染色方法检测浸润性乳腺癌组织(n=100)及正常乳腺组织(n=10)中ALDH1的表达情况;收集乳腺癌患者的临床病理资料,分析ALDH1表达情况与乳腺癌患者临床病理特征、预后的关系。结果:100例浸润性乳腺癌组织中ALDH1的阳性表达率为59%,显著高于正常乳腺组织(χ2=4.130,P=0.042),乳腺癌中ALDH1的表达与肿瘤分级、激素受体状况、分子分型显著相关(P<0.05);生存分析结果显示:ALDH1-组乳腺癌患者5年生存率较ALDH1+组高,差异有统计学意义(χ2=5.350,P=0.032);单因素分析发现临床分期、淋巴结转移情况、ALDH1与患者5年生存率之间存在关联,并具有统计学意义(P<0.05);COX回归模型显示:ALDH1、淋巴结转移情况及临床分期是影响乳腺癌患者生存的独立预后因素。结论:低分化、激素受体阴性乳腺癌组织高表达ALDH1;ALDH1阳性表达的乳腺癌患者预后较差,ALDH1可作为判断乳腺癌患者预后的指标。

经单鼻孔-蝶窦显微切除垂体腺瘤的方法与技巧

目的总结经单鼻孔-蝶窦显微切除垂体腺瘤的手术体会与疗效。方法回顾性分析92例经单鼻孔-蝶窦入路显微手术切除鞍区病变患者，晦床资料。垂体微腺瘤12例，大型垂体腺瘤47例，巨大型及复发性垂体腺瘤24例，垂体囊肿5例，垂体脓肿2例，颅咽管瘤2例。结果术后早期（1周内）复查的CT或MR，垂体微腺瘤、垂体囊肿、垂体脓肿、颅咽管瘤全切除率达98％，大型垂体腺瘤全切除率达80．9％，巨大或复发性腺瘤全切除率达62．5％。术后短暂尿崩5例，脑脊液漏2例，经治疗全部治愈。无颅内感染、视神经损伤等。术后月经恢复，性功能改善占82％，8例要求生育者有6例术后1～9个月怀孕；视力改善占90％；60％垂体内分泌激素恢复正常。结论经单鼻孔-蝶窦显微切除垂体腺瘤（必要时辅以内窥镜）是一种理想的治疗方法，对于中小型腺瘤，可根据术者的经验及习惯采用内窥镜手术或者显微手术，对于巨、大伴有广泛侵袭扩展、质地坚韧，血供丰富的肿瘤应以显微手术方法为主，这样可以充分发挥神经外科医生的显微手术技巧。具有损伤少、肿瘤全切除率高，术后恢复快。合并症少，生活质量高的优点。

局部肿胀麻醉下小切口腺体切除术治疗中重度男性乳腺发育症

目的观察局部肿胀麻醉下施行小切口乳腺腺体切除治疗男性乳腺发育症效果。方法将45例中重度男性乳腺发育患者按手术方法分为两组,A组30例局部肿胀麻醉下施行脂肪抽吸联合小切口腺体切除手术,B组15例局部肿胀麻醉下行小切口腺体切除手术,比较两组患者手术时间、术中出血量、每侧切除乳腺重量和术后引流量等指标。结果两组患者术中出血量、术后伤口引流量和切除腺体重量等指标比较差异均无统计学意义(P>0.05),但B组患者手术时间明显短于A组(P<0.05)。两组患者随访均无复发。结论应用局部肿胀麻醉技术乳晕小切口乳腺腺体切除术治疗中重度男性乳房发育症能够顺利游离腺体,手术出血少,是切除男性增生乳腺的理想术式。

吉西他滨联合长春瑞滨用于乳腺癌二线新辅助化学治疗的观察

目的:评价GN方案(吉西他滨联合长春瑞滨)作为二线新辅助化学治疗方案,用于TAC治疗方案(多西他赛、多柔比星和环磷酰胺)耐药的局部晚期乳腺癌(LABC)的疗效和安全性。方法:26例经2～4周期TAC方案化学治疗反应不佳的LABC患者,采用GN方案治疗;吉西他滨1 000 mg/m2静脉滴注,第1、8日;长春瑞滨25 mg/m2静脉滴注,第1、8日。每21日为1周期,2周期后评定疗效,同时记录不良事件。病情稳定或进展的患者停止化学治疗,缓解的患者继续行化学治疗至最多6周期,所有患者化学治疗结束2周后行手术切除。结果:26例患者共完成83周期化学治疗,平均3.2周期。其中完全缓解2例(8%),部分缓解10例(38%),病情稳定9例(35%),进展4例(15%),其中1例(4%)患者获得病理完全缓解。总反应率46%(12/26)。4例(15%)患者成功实施保乳手术,无1例患者需植皮。主要毒副反应为Ⅰ～Ⅱ度骨髓抑制、胃肠道反应、黏膜炎和周围神经毒性。结论:GN方案可作为二线新辅助化学治疗方案,用于蒽环类和紫杉类耐药的LABC患者,临床反应率较好,耐受性尚可。

保留单侧腺体上极甲状腺次全切除术治疗Graves′病的对比分析

【目的】评估改良后保留单侧腺体上极的甲状腺次全切除术术式的可行性。【方法】本研究比较了两种甲状腺次全切除术:改良后保留单侧腺体上极术式(Ⅰ组59例)和传统的保留双侧甲状腺背侧组织术式(Ⅱ组54例)的手术时间、出血量、复发率和术后并发症发生率。【结果】两组患者的初次手术时间基本相同,但Ⅰ组患者的失血量、二次手术时间、喉返神经损伤率和复发率均明显低于Ⅱ组。此外,Ⅰ组无术后血肿,Ⅱ组出现3例(5.56%)术后血肿。Ⅰ组2例(3.39%)和Ⅱ组4例(7.40%)出现短暂的低钙血症。【结论】在失血量、二次手术时间、术后并发症发生率、复发率等方面,甲状腺次全切除术中保留单侧腺体上极的术式比保留双侧甲状腺背侧组织术式效果更好。

STAT5a在乳腺癌组织中的低表达与患者不良预后相关

目的:检测信号转导和转录活化蛋白5a(signal transducer and activator of transcription 5a,STAT5a)在浸润性乳腺癌组织中的表达情况,探索STAT5a在乳腺癌患者中潜在的临床意义。方法:采用免疫组织化学染色的方法检测100例浸润性乳腺癌组织及10例正常乳腺组织标本中STAT5a的表达情况;收集入组乳腺癌患者的临床病理资料,并对所有入组乳腺癌患者进行至少5年的随访;分析STAT5a表达情况与乳腺癌患者临床病理特征、预后的关系。结果:(1)100例浸润性乳腺癌中STAT5a的阳性表达率为46%,显著高于正常乳腺组织(P<0.05),乳腺癌中STAT5a的表达与肿瘤分级、激素受体状况显著相关(P<0.05)。(2)生存分析显示,STAT5a阳性组乳腺癌患者5年生存率较STAT5a阴性组高,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(3)单因素分析发现临床分期、淋巴结转移情况、STAT5a与患者5年生存率之间存在关联,并有统计学意义(P<0.05)。(4)Cox回归模型显示:STAT5a、淋巴结转移情况及临床分期是影响乳腺癌患者生存的独立预后因素。结论:高分化、激素受体阳性乳腺癌组织高表达STAT5a。STAT5a阴性表达的乳腺癌患者预后较差,STAT5a可作为判断乳腺癌患者预后的指标。

KDM5B基因在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究KDM5B基因在乳腺癌组织中的表达情况,并探讨其表达差异与患者临床病理资料和预后的关系。方法:从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中收集113例正常乳腺组织和1 090例乳腺癌数据集,下载KDM5B mRNA表达谱资料;收集中山大学附属第三医院甲乳外科2015年～2016年乳腺癌切除标本共90例,采用real-time PCR的方法检测乳腺癌及其癌旁组织中KDM5B mRNA的表达量,取中位数分为高表达组与低表达组,分析其与临床资料及病例特征的关系;利用Kaplan-Meier plotter分析KDM5B mRNA表达与乳腺癌患者预后的相关性。结果:KDM5B在乳腺癌中的表达均显著高于正常乳腺组织(P <0. 01)。在TCGA的乳腺癌数据中,KDM5B的表达与人表皮生长因子受体2(HER2)、雌激素受体(ER)、年龄、病理组织类型及淋巴结转移显著相关(P <0. 01),与孕激素受体(PR)、绝经及远处转移无显著相关。在我们收集的乳腺癌样本中,KDM5B的表达与HER2、年龄及淋巴结转移显著相关(P <0. 05),而与ER、PR、绝经、病理组织类型和远处转移无显著相关。KDM5B表达越高,乳腺癌患者总生存时间(HR=1. 39,P=0. 005)和无病生存时间(HR=1. 32,P <0. 001)越短。结论:在乳腺癌组织中KDM5B高表达,且与患者的预后相关; KDM5B的表达与乳腺癌患者HER2表达、年龄和淋巴结转移显著相关。

半边旗提取物5F对乳腺癌细胞内活性氧水平的影响

目的观察中草药半边旗提取物5F(Ent-11a-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid,5F)对乳腺癌细胞的抑制作用及其对乳腺癌细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法不同浓度(0、5、10、20、40μg/m L)的5F分别处理3种不同乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231以及SK-BR-3),用CCK-8法检测5F对不同乳腺癌细胞株增殖的影响;流式细胞仪检测5F处理后的各乳腺癌细胞株的凋亡率;检测不同浓度的5F处理后的乳腺癌细胞内ROS的水平。结果 5F可抑制MDA-MB-231、MCF-7、SK-BR-3三种乳腺癌细胞的增殖,其抑制效果与5F的浓度及作用时间呈显著正相关(P<0.05);经5F作用24 h后,MDA-MB-231细胞、MCF-7细胞及SK-BR-3细胞的凋亡率较阴性对照组明显增加(P<0.05);5F作用于乳腺癌细胞株,ROS相对含量均较未处理组降低,且随5F浓度升高ROS水平降低越明显(P<0.05)。结论 5F可抑制乳腺癌细胞的增殖,其抑制效果与5F浓度和作用时间相关;5F能降低细胞内ROS的生成水平,并呈现剂量依赖性。

半边旗提取物5F对三阴型乳腺癌细胞的抑制作用及其机制

目的 观察中草药半边旗提取物5F对三阴型乳腺癌细胞株增殖、凋亡的影响及探讨其机制.方法 不同浓度的5F（0、5、10、20、40 mg/L）分别处理MDA-MB-231乳腺癌细胞,采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测5F对乳腺癌细胞株增殖的影响;荧光显微镜下观察5F处理后细胞形态的变化;流式细胞仪检测5F处理后乳腺癌细胞株的凋亡率;收集5F处理后的乳腺癌细胞株,采用Western blot方法检测细胞凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、bel-2相关X蛋白（bax）、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3]表达水平.结果 5F可抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖,其抑制效果与5F的浓度及作用时间呈正相关（P＜0.05）;流式细胞仪检测显示,经5F作用24 h后,MDA-MB-231细胞的凋亡率为40.13％,较阴性对照组明显增加（P＜0.05）;Western blot检测发现,经5F处理后,参与细胞凋亡线粒体途径的抗凋亡蛋白bcl-2表达减弱,促细胞凋亡蛋白bax表达增强,凋亡执行分子Caspase-3表达增强,且上述蛋白表达水平与5F呈明显的剂量依赖性（P＜0.05）.结论 5F可抑制三阴型乳腺癌细胞的增殖,抑制效果与5F浓度和作用时间相关;其作用机制之一可能是通过诱导细胞凋亡实现的.

沉默Apollon对乳腺癌MCF-7／顺铂细胞的顺铂耐药性影响

目的观察Apollon对乳腺癌耐药细胞株MCF-7／顺铂（DDP）的顺铂耐药性影响。方法采用小干扰RNA（siRNA）瞬时转染技术沉默Apollon；噻唑蓝（MTF）法检测不同浓度顺铂（10、20、40、80、100μmol／L）对转染后细胞24h的增殖抑制作用；实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测转染后MCF-7／DDP细胞中相关基因mRNA的水平变化；Western blot检测转染后细胞中蛋白水平的变化。结果在乳腺癌耐药细胞株MCF-7／DDP中Apollon mRNA和蛋白表达水平分别为MCF-7细胞的（1．70±0．21）倍（P=0．007）和（2．23±0．33）倍（P=0．003）；转染Apollon siRNA后的MCF-7／DDP与未转染组比较，对顺铂的敏感性增强，顺铂半数抑制浓度（IC50）由（81．39±3．67）μmol／L，下降到（33．24±2．01）μmol／L（P=0．002）；转染后细胞中Apollon、β-连环蛋白（β-catenin）在mRNA及蛋白水平相较于未转染细胞均出现明显下降，分别为未转染细胞的（0．43±0．16）倍（P=0．005）、（0．54-t-0．10）倍（P：0．006）和（0．23±0．08）倍（P=0．003）、（0．44±0.20）倍（P=0．005）；采用1μmol／L WAY-262611处理转染后的细胞，Apollon mRNA及蛋白水平无明显改变（P=0．890、0．730），β-catenin mRNA[（1．91±0．23）倍（P=0．004）]及蛋白水平[（2．21±0．31）倍（P=0．002）]显著升高。结论沉默Apollon能增加乳腺癌耐药细胞MCF-7／DDP对顺铂的敏感性，其作用机制可能与降低β-catenin表达水平有关。