肉鸭感染呼肠孤病毒与鸭疫里默氏菌病例的诊治体会

呼肠孤病毒(Reovirus)在家禽和其他禽类中非常普遍,容易分离到病毒及检测到血清抗体,但主要关注其对鸡的危害,因为从其他禽类分离的病毒大多是不致病的[1]。近年来,雏番鸭呼肠孤病毒感染导致严重发病、死亡的病例较多,也有文献报道肉雏鸭感染该病毒导致以脾脏坏死为主要病变特征的疾病。鸭疫里默氏菌的血清型复杂且缺乏交叉免疫保护,极易产生耐药性,在临床中存在严重的多重耐药性,难以筛选到有效抗菌药物。该细菌主要感染1~8周龄鸭,也可以感染鹅、鸡及野鸟,以纤维素性渗出性炎症为主要病变特征。

金黄色葡萄球菌噬菌体的生物学特性分析及其对小鼠乳腺炎的治疗效果评估

噬菌体作为一种天然裂解细菌的病毒,可用于细菌疾病治疗。旨在筛选出有效治疗小鼠乳腺炎的噬菌体,为奶牛乳腺炎防治提供参考。以实验室保存的金黄色葡萄球菌AA292菌株为宿主菌,分别从污水样、粪样中分离纯化出2株噬菌体,命名为φFJ04、φAH12。对2株噬菌体的生物学特性进行了分析,结果表明,φFJ04最佳感染复数为1,裂解量为149,温度耐受范围在40~50℃,pH耐受范围在3~10,宿主谱为63/90株;φAH12最佳感染复数为1,裂解量为448,耐受温度在40℃,pH耐受范围在4~12,宿主谱为28/90株。通过全基因组测序分析,发现φFJ04全长38 540 bp,(G+C)%=33.79%,含有48个ORF;φAH12全长264 664 bp,(G+C)%=24.7%,含有282个ORF。φFJ04、φAH12基因组内均不含整合元件、毒力基因和耐药基因,可用于体内治疗。对噬菌体杀菌效果进行评估,发现由φFJ04、φAH12组成的噬菌体鸡尾酒在6 h可以将10^(4) CFU/mL的金黄色葡萄球菌全部杀灭。施用10^(8) PFU/mL噬菌体鸡尾酒对10^(8) CFU/mLAA292所致的小鼠乳腺炎有明显改善作用,能使治疗组乳腺组织细菌载量下降2.8 log10CFU/g,杀菌效果约为99.84%。通过观察HE染色切片发现,治疗组乳腺腺泡结构较为完整,乳腺上皮细胞脱落显著减少,为奶牛乳腺炎防治提供了参考。

噬菌体裂解酶Lysin1902原核表达及其与ε-聚赖氨酸联用效果评价

【目的】研究裂解酶Lysin1902与ε-聚赖氨酸(ε-PL)对大肠杆菌O157:H7的协同抗菌作用。【方法】通过Mega构建进化树、使用在线工具等分析大肠杆菌噬菌体裂解酶Lysin1902氨基酸序列组成和结构等;原核表达并纯化Lysin1902;通过平板裂解实验检测Lysin1902对大肠杆菌O157:H7灭活菌株的裂解活性;用96孔板法检测Lysin1902或ε-PL的活菌裂解能力;棋盘法验证Lysin1902和ε-PL联用效果。【结果】体外成功表达并纯化了Lysin1902。Lysin1902对大肠杆菌O157:H7灭活菌株具有裂解活性,但不能有效裂解活的大肠杆菌。噬菌体裂解酶与ε-PL联用结果表明,加入Lysin1902后,ε-PL能够完全控制大肠杆菌O157:H7增殖的使用浓度由0.7mg/mL降低到0.1 mg/mL。【结论】体外原核表达并纯化Lysin1902,其单独使用对活的大肠杆菌O157:H7无裂解活性,但与ε-PL联用可显著提高ε-PL对大肠杆菌O157:H7的裂解能力。