猪红斑丹毒丝菌制苗用菌株的筛选

为筛选出致病力强、抗原性优良、遗传性状相对纯一稳定的猪红斑丹毒丝菌制苗用菌株,对42株临床分离的猪红斑丹毒丝菌进行筛选,通过小鼠致死性试验确定4株受试菌株,编号为AEr9、AEr21、AEr31和AEr32。采用改良寇氏法测定受试菌株的半数致死量(LD50),通过微量平板凝集和琼脂扩散试验测定反应原性,基于小鼠免疫攻毒试验测定免疫原性,并通过连续传代培养,分别对第10、20、30代受试菌株进行LD50、沉淀抗体滴度和免疫保护率检测,以确定稳定性。结果显示,AEr9、AEr21、AEr31、AEr32的LD50分别为845、50.3、35.5和10.1 cfu·m L-1,微量平板凝集试验和琼脂扩散试验进一步筛选出反应原性高的菌株AEr21和AEr31。灭活全菌体免疫小鼠,均产生免疫保护力,以AEr31免疫保护力最好。细菌传10代后,两株菌毒力均出现致病力减弱的情况,第10、20、30代菌株致病力趋向于稳定,AEr21引起的兔抗猪丹毒血清沉淀抗体滴度水平更稳定。说明菌株AEr21、AEr31具备毒力强、抗原性好、遗传稳定的特性,可作为猪红斑丹毒丝菌制灭活苗用的候选菌株。

猪丹毒丝菌灭活疫苗制备及其对小鼠免疫效力的评价

为制备猪丹毒丝菌灭活疫苗并评价其对小鼠的免疫效力,将3株受试菌株(AEr21、AEr31和AEr32)培养至稳定期,经终质量浓度为2mg/L甲醛灭活后,用矿物油佐剂ISA201VG制备成猪丹毒丝菌灭活疫苗,并与商品化疫苗分别免疫小鼠。应用ELISA方法检测小鼠血清中IgG抗体水平和细胞因子含量(IL-4、IL-10、MCP-1、TNF-β、IFN-γ),流式细胞术测定CD4^+/CD3^+、CD8+/CD3^+T细胞亚群百分比,采用灌胃和腹腔注射方式测定免疫保护率,并采集小鼠脏器(肺脏、肝脏、脾脏、肾脏)制备病理组织切片,观察病理变化。结果显示,AEr21、AEr31、AEr32全菌体灭活疫苗组和商品化弱毒疫苗组、灭活疫苗组二次免疫小鼠后的血清IgG抗体效价分别为1∶3200、1∶6400、1∶1600、1∶6400、1∶3200(以全菌体超声裂解物为包被抗原)和1∶3200、1∶6400、1∶3200、1∶25600、1∶6400(以重组SpaA为包被抗原);商品化弱毒疫苗组诱导小鼠产生的细胞因子水平和CD4^+/CD3^+、CD8+/CD3^+T细胞比例最高,与灭活疫苗组差异显著,各灭活疫苗组间差异均不显著;AEr21、AEr31、AEr32全菌体灭活疫苗组和商品化弱毒疫苗组、灭活疫苗组对灌胃和腹腔注射攻毒小鼠的免疫保护率分别为80%、100%、100%、100%、100%和80%、100%、60%、100%、100%;AEr21和AEr32全菌体灭活疫苗组的病理组织变化较AEr31全菌体灭活疫苗组和商品化弱毒疫苗组、灭活疫苗组更显著。表明受试菌株(AEr31)与矿物油佐剂ISA201VG制备成的猪丹毒丝菌灭活疫苗免疫小鼠后不仅可产生较高水平的细胞免疫和体液免疫,还可完全抵抗强毒株的攻击。

猪丹毒丝菌CbpB蛋白对小鼠的免疫效果分析

探究猪丹毒丝菌(ER)CbpB蛋白的免疫原性和保护作用,为深入研制ER基因工程亚单位疫苗提供新的思路和技术储备。以表达的ER重组蛋白CbpB、SpaA、CbpB+SpaA以及ER灭活全菌体(V-AEr21)、商品化弱毒疫苗、商品化灭活疫苗分别免疫小鼠。利用间接ELISA检测小鼠血清中IgG抗体,血清杀菌试验测定功能性抗体水平,攻毒试验测定免疫保护率,组织荷菌数试验测定ER定植情况,并采集小鼠组织脏器(脾、肺、肝、肾)制备切片,观察病理变化。结果显示:与免疫原性最优的商品化弱毒疫苗相比,CbpB和SpaA虽产生的IgG抗体均仅为1∶6400,但血清杀菌效果强;对小鼠的免疫攻毒保护率与商品化弱毒疫苗相同,均为100%,且在脾、肺、肝、肾组织中均无细菌定植,病理组织学观察与空白对照无明显区别。CbpB重组蛋白具有良好的免疫原性和保护作用,能刺激机体产生体液免疫和细胞免疫,可以作为猪丹毒基因工程亚单位疫苗的候选抗原。

猪丹毒丝菌灭活疫苗免疫佐剂的筛选

为筛选猪丹毒丝菌灭活疫苗免疫佐剂,将5种佐剂(聚合物佐剂、矿物油佐剂ISA 201 VG、蜂胶佐剂、弗氏佐剂、铝胶佐剂)分别与3株猪丹毒丝菌株(AEr21、AEr31和AEr32)制备成15种灭活疫苗,经物理性状检验、无菌检验、安全检验合格后分别免疫小鼠,应用ELISA方法检测小鼠血清中IgG抗体水平和细胞因子含量(IL-4、IL-10、TNF-β、IFN-γ、MCP-1)。通过腹腔注射和灌胃2种方式对免疫后小鼠进行攻毒,计算免疫保护率。结果显示,5种佐剂与3株猪丹毒丝菌株制备的灭活疫苗均可刺激小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫,矿物油佐剂ISA 201 VG疫苗免疫组诱导小鼠产生的IgG抗体水平和细胞因子含量最高,与铝胶佐剂、弗氏佐剂疫苗免疫组差异显著(P<0.05),与聚合物佐剂、蜂胶佐剂疫苗免疫组差异不显著(P>0.05);矿物油佐剂ISA 201 VG疫苗免疫组在攻毒后的免疫保护率最高,对腹腔注射和灌胃攻毒小鼠的免疫保护率分别为80%、80%、60%和100%、100%、80%。试验结果表明,矿物油佐剂ISA 201 VG可作为猪丹毒丝菌灭活疫苗制备的候选免疫佐剂。

幼儿优质户外区域运动的三要素

《幼儿园教育指导纲要(试行)》指出:"幼儿园必须把保护幼儿的生命和促进幼儿的健康放在工作首位。"好动是幼儿的天性,丰富多彩的户外运动不仅能满足幼儿对运动的需要,而且有利于培养幼儿的积极性、主动性和创造性。然而,目前部分幼儿园户外运动中还存在着一些问题,如:活动内容和形式单一,缺乏趣味性;材料投放随意,缺乏层次性;教师指导盲目,缺乏有效性等。

亲沙水,释天性,学探究

亲近自然是幼儿的天性。记忆中,童年最快乐的事情就是堆沙堡、打水仗……虽然总弄一身泥水,但是那种纯天然的快乐是任何游戏都代替不了的。陶行知先生主张“把学校的一切伸张到大自然里去”,而《3~6岁儿童学习与发展指南》(以下简称《指南》)也提出“经常带幼儿接触大自然,激发其好奇心与探究欲望”。沙、水是大自然中的瑰宝,其取用方便、玩法多变,蕴涵着许多教育价值。作为教师,我们要敏锐地捕捉幼儿的兴趣,把握各种教育契机,引导幼儿在沙水游戏中积极探索发现、体验乐趣、提升科学探究能力。

基于儿童本位的幼儿园公共阅读区创设和利用

《3~6岁儿童学习与发展指南》(以下简称《指南》)指出:“为幼儿提基于儿童本位的幼儿园公共阅读区创设和利用供丰富、适宜的低幼读物,经常和幼儿一起看图书、讲故事,丰富其语言表达能力,培养阅读兴趣和良好的阅读习惯,进一步拓展学习经验。”在众多的幼儿读物中,绘本无疑是最适合低幼儿童阅读的图画书。3~6岁幼儿正处于“读图”阶段,图画书对幼儿的视觉冲击比纯文字图书更为直接、更能启发儿童的想象力和审美感受等,从而使其体会到阅读的快乐。“日本图画书之父”松居直也说过:“儿童的读书生活从幼儿期开始,要使儿童了解书的世界的魅力,最好首先从图画书入手。”由此可见,幼儿园时期的绘本阅读在孩子的一生中起到了至关重要的作用。