猪肺血管紧张素转化酶的提取纯化及其性质研究

新鲜猪肺均浆离心后,经35%～55%饱和度的硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶柱层析、DEAESephadex A-50阴离子交换后,得到经SDS-PAGE显示为一条带的ACE纯品。200g猪肺可制备出ACE347.09U,比活力29.029U/mg,活力回收12.53%。用双倒数作图法得出ACE的酶反应动力学常数Km为3.168mmol/L,Vmax为6.165nmol/min。两个月的保藏后,试验证明所提酶活力保持稳定。

高效液相色谱法测定血管紧张素转化酶抑制剂的活性

建立了体外直接测定血管紧张素转化酶抑制剂活性的高效液相色谱分析方法。以马尿酰 组氨酰 亮氨酸为反应底物,血管紧张素转化酶为催化剂,反应所生成的马尿酸为测定指标,未加酶抑制剂的反应为空白对照。使用ZORBAXSB C18色谱柱(4 6mmi d ×150mm,填料粒径5μm),柱温25℃,流动相为乙腈 超纯水(体积比为25∶75,各含0 05%(体积分数)三氟乙酸及0 1%(体积分数)三乙胺),流速0 5mL/min,检测波长228nm。在马尿酸浓度为0 005～1 000mmol/L时,马尿酸浓度与其峰面积呈良好的线性关系(r=0 9999),最小检测限为0 50μmol/L;该方法对马尿酸的回收率为99.48%～105.64%,相对标准偏差(RSD)为2.20%(n=6)。该方法可适用于血管紧张素转化酶抑制剂活性的体外测定,具有操作简便、精密度和准确性高的特点,为降血压药物的研制提供了方便可靠的检测手段。

蚕蛹不同溶解性蛋白的营养学评价及酶解物对血管紧张素转换酶的抑制活性

分别对缫丝蚕蛹中的水溶性和碱溶性蛋白组分进行营养学评价,为高效开发蚕蛹食品提供依据;通过蚕蛹蛋白酶解产物对血管紧张素转换酶(ACE)的体外抑制活性试验,探讨蚕蛹蛋白作为天然降压药品原料的利用潜力。营养学分析表明:蚕蛹蛋白水溶性和碱溶性组分中的氨基酸种类齐全,且必需氨基酸占总氨基酸的质量分数分别为41.2%和39.2%,明显高于WHO推荐的氨基酸组成模式(>36%);蚕蛹水溶性蛋白有第1～第4限制性氨基酸(依次为亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和苏氨酸),而蚕蛹碱溶性蛋白仅有第1和第2限制性氨基酸(依次为蛋氨酸+胱氨酸、异亮氨酸),2种溶解性蛋白的生物效价均较低,在开发利用中,应补充限制性氨基酸或与其它蛋白搭配使用,以提高产品的营养价值。体外ACE抑制活性试验表明,蚕蛹的水溶性蛋白和碱溶性蛋白的碱性蛋白酶酶解产物均具有较强的ACE抑制活性,IC50值分别为0.121、0.113 mg/mL,2种蛋白有可能成为降血压肽生产原料。

柚皮黄酮的超声辅助提取及其抗氧化性研究

以70%乙醇为提取溶剂,采用超声辅助提取技术从柚皮中提取黄酮类化合物,利用二次旋转组合设计方法探讨柚皮黄酮的最佳提取工艺,建立了黄酮提取率与超声功率、超声时间和料液比之间的数学模型;通过化学方法考查了柚皮黄酮清除超氧阴离子自由基、DPPH自由基以及羟自由基的能力。结果表明:黄酮提取率与各因素之间的关系可以表示为Y=0.5087+0.0311X1-0.0253X2-0.0289X3+0.0498X1-0.0238X1X3+0.0395X2+0.022X2X3+0.0233X3,由此式得出柚皮黄酮的最佳提取条件为:超声功率1250W、超声时间10min、料液比1:30(g/ml)。经实验验证,柚皮黄酮的提取率可达0.734%,模型拟合度良好。抗氧化实验结果表明,柚皮黄酮具有较强的清除超氧自由基和DPPH自由基的能力,其EC50(半抑制浓度)相应为0.0906、0.0161mg/ml,分别是VC的1.9倍和3.3倍;柚皮黄酮清除羟自由基的能力较弱,其EC50为0.5649mg/ml,为VC的15.5倍。

超声波-离子液体耦合预处理制备蚕蛹蛋白质ACE抑制肽的工艺优化

为提高蚕蛹蛋白质酶解产物的ACE抑制活性,利用超声波-离子液体耦合法对蚕蛹蛋白质进行预处理。以酶解产物ACE抑制活性为指标,采用单因素结合响应面分析法,研究超声波-离子液体耦合预处理蚕蛹蛋白质的工艺条件,并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,研究预处理前后蚕蛹蛋白质及其酶解产物相对分子质量的变化。结果表明,各因素对酶解产物ACE抑制活性的影响程度由大到小依次为:液料比、超声波功率、预处理时间。确定最佳预处理工艺条件为:液料比27.2 mL/g,处理时间31.9 min,超声波功率406.8 W。在此优化条件下,蚕蛹蛋白质酶解产物的ACE抑制率为75.7%(IC50=0.071 mg/mL)。与未处理、超声波预处理的相比,超声波-离子液体耦合预处理在制备蚕蛹蛋白质ACE抑制肽上具有明显优势。超声波-离子液体耦合预处理后,蚕蛹蛋白质的分子质量无明显变化,但其酶解产物的分子质量(<1.43 ku)变小。

维生素E微胶囊化技术的研究

以产率、效率和维生素E的保留率作为评价指标,得出以喷雾干燥法制取维生素E微胶囊的最佳壁材配方及工艺条件。

超声波辅助提取家蚕蛹虫草子实体多糖的工艺条件优化

为建立高效提取家蚕蛹虫草多糖的工艺技术,以家蚕蛹虫草子实体为原料,用超声波辅助法提取蛹虫草多糖,考察料液质量浓度、提取时间和超声波功率3个因素对多糖提取率的影响,并采用响应面分析法优化提取工艺条件。在超声波频率40 kHz的条件下,超声波辅助提取家蚕蛹虫草子实体多糖的最佳工艺条件为:料液质量浓度0.023 2 g/mL,提取时间39.8min,超声波功率103 W。在此工艺条件下,家蚕蛹虫草子实体多糖提取率的预测值为8.20%,实测值为8.15%,比传统热水浸提法的提取率提高了1.08个百分点。扫描电子显微镜观察提取多糖后的蛹虫草子实体残渣颗粒的排列更为疏松,有较多的中空结构,表明采用超声波辅助提取更有利于家蚕蛹虫草子实体多糖的溶出。

蚕蛹源ACE抑制肽的分离纯化与结构研究

目的：研究蚕蛹蛋白血管紧张素转换酶（ACE）抑制肽的结构特征。方法：采用超滤、DEAE-52离子交换色谱和Sephadex G-50凝胶色谱对蚕蛹蛋白酶解产物进行分离纯化,并利用液质联用对蚕蛹蛋白ACE抑制肽的结构特征进行初步分析。结果：分离得到的组分2（IC500.072mg/mL）对ACE抑制活性较高,是分离纯化前的2.95倍,为蚕蛹蛋白ACE抑制肽的主要组分。结论：组分2中ACE抑制肽的分子质量为226.34-983.61u,主要由2-8肽组成。

乳源抗菌肽的抑菌活性及其影响因素

以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为实验菌,研究了乳源抗菌肽的抑菌活性,以及pH值、温度、热处理时间、胃蛋白酶水解和离子强度等不同因素对乳源抗菌肽抑菌活性的影响.结果表明:乳源抗菌肽对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为4μg/mL,对大肠杆菌的最小抑菌浓度为8μg/mL;乳源抗菌肽在pH值为7.0～8.0时的抑菌活性最高;在60℃以上时,随着温度的升高及加热时间的延长,乳源抗菌肽抑菌活性逐渐降低;胃蛋白酶能够部分水解乳源抗菌肽,降低乳源抗菌肽的抑菌活性;当NaCl浓度为0～100 mmol/L,CaCl2浓度为0～5.0 mmol/L时,离子强度越大,乳源抗菌肽的抑菌活性越低.

发酵乳中血管紧张素转换酶抑制剂的分离与鉴定

用瑞士乳杆菌生产具有抑制血管紧张素转换酶(ACE)活性的发酵乳并从其中分离血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)。脱脂乳经灭菌后,接种4%(V/V)的发酵剂,37℃培养24h,获得抑制ACE活性较高的发酵乳。对此发酵乳的乳清进行超滤、上海732阳离子树脂交换、SephadexG-15凝胶过滤和HPLC分步纯化,最终得到两种起主要作用的ACEI肽。经氨基酸分析和液相-质谱分析,这两种肽的氨基酸序列分别为:Phe-Pro(IC50:12.05μmol/L)和Ala-Glu-Glu(IC50:12.42μmol/L)。

ACEI发酵乳对原发性高血压大鼠的降血压效果

脱脂乳经灭菌后,接种4%(体积分数)发酵剂,37℃培养24 h,获得抑制血管紧张素转换酶活性较高的发酵乳。以发酵乳及其乳清为样品,每种样品分别以10 mL/kg和20 mL/kg两种不同剂量连续3 d灌胃原发性高血压大鼠。结果表明,它们均具有较好的降血压效果,其中以20 mL/kg剂量的乳清降压效果最好,最大降压值为(3.4±1.36)kPa,最低血压持续时间为5 h。

酶解反应和膜分离耦合制备乳源抗菌肽

采用间歇式酶膜反应工艺水解牛乳蛋白制备抗菌肽,以金黄色葡萄球菌做指示菌,考察了酶膜耦合时间、底物浓度、加酶量、温度、pH值和出肽速率等因素对蛋白转化率的影响,并在单因素影响实验的基础上,通过正交实验进行工艺优化.结果表明:间歇式酶膜反应的最优工艺参数为耦合时间120 min,底物浓度2%,加酶量3%,温度30℃,pH7.5,出肽速率6 mL/min;在此优化条件下,蛋白转化率为0.293%,牛乳蛋白酶解产物的最小抑菌浓度为4.8μg/mL.该法通过消除产物抑制效应,有效地避免多肽过度降解,从而提高产物活性,较好地强化了反应过程,为酶法制备乳源抗菌肽提供一种更有效的方法.

抗菌乳的制备及其初步纯化

确定了木瓜蛋白酶酶解乳蛋白所得抗菌乳对不同菌抗菌效果最佳时的酶解条件。最佳抑制金黄色葡萄球菌的酶解条件:pH值为6.0,温度为35℃,加酶量为1.9%,酶解时间90 min;最佳抑制大肠杆菌的酶解条件:pH值为6.0,温度为35℃,加酶量为2.5%,酶解时间30 min。比较了两种抗菌乳经离心、超滤后所制备的不同分子量多肽片断的抑菌效果。结果表明,分子量大于10 ku的多肽分子基本无抑菌作用;抑制金黄色葡萄球菌的多肽片段以分子量小于5 ku的多肽为主,而抑制大肠杆菌的多肽的分子量则集中在5～10 ku。

PBL教学模式在我国高校教学中的应用与思考

PBL是一种基于问题的教学模式,目前已在我国各大院校广泛开展。文章介绍了PBL教学模式的特点及组织方式,概述了PBL教学模式在我国高校教学中的应用与现状,归纳了PBL教学模式在我国高校教学中存在的问题,并提出了相应的解决方案。

脂类及脂溶性物质的微胶囊技术

简述微胶囊技术的发展 ,对脂类及脂溶性物质微胶囊的功能与制备方法做了综合论述 ,并指出 ,喷雾干燥法是目前使用最广泛的方法。

1例腹透外导管脱出的处理及腹透导管的护理

总结了1例腹透患者腹膜透析导管脱出的护理体会,分别从健康宣教、心理护理、病情追踪观察、导管护理和护理质量改进五个方面进行介绍。通过及时正确处理,患者未发生导管相关性感染,因此认为正确护理腹透导管脱出的患者是预防感染发生的关键。

脂类物质的微胶囊技术

微胶囊技术是目前广泛流行的一种高新技术,脂类物质的微胶囊化为其贮藏稳定性和功能特性的改善提供了保障.本文扼要介绍了脂类物质微胶囊化的功能和制备方法.

科学思维:化学探究实验的灵魂——Fe与CuSO_(4)溶液反应再探究

科学思维是化学探究实验的灵魂。对铁钉与CuSO_(4)溶液反应pH降低的“异常”现象进行深入探究,设计成时长80分钟的高三复习课。沿着“发现异常→设计方案→分析解释→又见异常→系统梳理→模型内化”六个教学环节层层递进,促进核心知识、认识思路和学科观念结构化,全面提升学生的思维品质。

蛹虫草多糖的酶法修饰及其抗氧化活性

为了提高蛹虫草多糖的抗氧化活性,采用α-淀粉酶对蛹虫草多糖进行酶法修饰。以DPPH自由基清除率为响应值,运用响应面分析法对α-淀粉酶修饰蛹虫草多糖的工艺进行优化,研究酶修饰后蛹虫草多糖清除DPPH自由基、螯合Fe2+和还原力等抗氧化活性,并对其三螺旋体结构进行分析。结果表明:对修饰多糖抗氧化活性的影响因素从大到小依次为:加酶量、酶解温度、酶解pH值;α-淀粉酶修饰蛹虫草多糖的最优工艺条件为:酶解温度48.5℃、酶解pH 5.8、加酶量259.5U/g,在此条件下,酶修饰后蛹虫草多糖对DPPH自由基的清除率预测值为81.4%,验证值为(81.6±1.6)%,结果重现性好,可用于实际预测。抗氧化实验表明,α-淀粉酶法修饰后,蛹虫草多糖清除DPPH自由基和螯合Fe2+的EC50值分别为:0.0247、1.0120mg/mL,分别比酶法修饰前提高了55.1%和39.8%;同时,蛹虫草多糖的还原力也得到了显著提高(P<0.05)。三螺旋体结构分析表明,蛹虫草多糖经α-淀粉酶修饰后,其三螺旋体结构有轻微破坏,但仍然保持三螺旋体结构。

酶解蚕蛹蛋白制备血管紧张素转换酶抑制肽的工艺优化

采用碱性蛋白酶水解蚕蛹蛋白,制备血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽,是蚕蛹蛋白深度开发的途径之一。以ACE抑制率为响应值,用响应面分析法研究酶解温度、酶解pH和加酶量等因素对酶解产物的ACE抑制活性的影响,优化制备工艺。结果表明,各因素对制备ACE抑制肽的活性影响程度由大到小依次为酶解pH、酶解温度、加酶量。获得碱性蛋白酶水解蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为:酶解温度50.8℃,酶解pH 9.0,加酶量3 500 U/g。在此条件下,蚕蛹蛋白酶解产物对ACE的理论抑制率最高可达96.67%,验证值为96.49%±1.75%,IC50值为0.102 mg/mL,预测模型可靠性高,可应用于蚕蛹ACE抑制肽的酶法制备。