白细胞介素-10对大鼠脊髓钝挫伤修复的影响及机制研究

目的探究脊髓钝挫伤(SCC)后白细胞介素-10(IL-10)对大鼠脊髓损伤修复以及对睫状神经营养因子(CNTF)表达变化的影响。方法采用Allen′s打击法制备SCC动物模型,BBB评分评估SCC后的运动功能。免疫组织化学技术(IHC)、免疫荧光技术(IF)和实时聚合酶链反应技术(qPCR)检测脊髓中IL-10、CNTF的蛋白定位及基因表达。用慢病毒介导的基因干扰技术抑制IL-10的表达。利用生物信息学方法GeneMANIA分析预测IL-10和CNTF的相互关系。结果与空载组(Vector)相比,IL-10抑制组(RNAi-IL-10)大鼠的BBB评分在第5、7天明显下降(P<0.05)。GeneMANIA分析提示IL-10与CNTF具有相互作用的蛋白质分子结构域。IL-10抑制后,CNTF mRNA表达明显上调(P<0.05)。IHC、IF实验结果表明IL-10和CNTF在脊髓前角灰质的神经元中表达。qPCR的实验结果提示,与假手术组相比,SCC后CNTF与CNTF受体的mRNA表达明显下调(P<0.05)。IL-10 mRNA在SCC后6、12 h明显上调;与6 h组相比,1、3、7、14 d组明显下调(P<0.05)。结论抑制IL-10导致CNTF表达上调,CNTF代偿性增高影响SCC的修复,为脊髓损伤的基因靶向治疗提供了新的视角。

大鼠脊髓钝挫伤后IL-6在白质中的表达变化与运动功能联系

目的探讨白细胞介素-6(IL-6)在脊髓损伤SD大鼠白质中的定位及表达变化,分析IL-6对大鼠神经行为学变化的影响。方法 66只成年SD大鼠,随机分为假手术组和脊髓顿挫损伤(Spinal cord contusion,SCC)术后12h、3d、5d、7d、14d组。用BBB神经功能评分评价脊髓顿挫损伤后大鼠的运动功能;采用RT-qPCR技术检测IL-6mRNA含量变化;采用免疫组化染色,定位观察IL-6在脊髓白质中的分布。结果 SCC后大鼠后肢运动功能消失,BBB评分显示术后5d、7d、14d较Sham组明显降低(P<0.05)。RT-qPCR表明IL-6mRNA在SCC后12h表达峰值,与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.05);IL-6mRNA在第5d明显下降,与12h相比较具有显著性差异(P<0.05)。免疫组化结果显示:IL-6主要分布在脊髓白质区的小神经胶质细胞和神经纤维。结论 SCC后大鼠后肢运动功能障碍随时间推移而得到一定的改善,其机制可能与IL-6的表达减少相关,因此,脊髓白质中IL-6的表达与运动功能恢复有关。

慢病毒介导的RNA干扰通过下调白细胞介素6抑制损伤后星形胶质细胞中波形蛋白的表达

目的:探讨用慢病毒介导的RNAi方法抑制白细胞介素6(IL-6),观察其对损伤后星形胶质细胞中波形蛋白(Vim)表达的影响。方法:选取3日龄SD大鼠的大脑皮质,体外培养星形胶质细胞,分为载体组和病毒组,2组均制备细胞划伤模型,采用qRT-PCR检测Vim mRNA的表达,免疫印迹检测Vim蛋白表达,用免疫荧光检测Vim的定位,MTT检测划伤模型中星形胶质细胞增殖率,免疫荧光检测GFAP用于观察划伤模型中星形胶质细胞活性。结果:划伤细胞2 d后,病毒组的Vim mRNA和蛋白表达量较载体组明显下降。Vim主要在星形胶质细胞胞质中表达。病毒组中星形胶质细胞增殖情况和活性低于载体组。结论:用慢病毒介导的RNAi方法抑制炎症因子IL-6,可以下调反应性胶质化细胞中Vim的表达,影响星形胶质细胞胶质化反应,可能抑制胶质瘢痕形成,对神经细胞的再生具有积极作用。