慢性机械压力诱导气道上皮黏蛋白5AC的表达

目的探讨慢性机械压力能否诱导气道上皮黏蛋白(mucin,MUC)5AC表达及通过的相关信号通路。方法培养大鼠气道上皮细胞建立气液相界面(air liquid interface,ALI),通过对Transwell培养板上的气道上皮细胞每天施加10、20、30 cmH2O水平的气体压力1 h并持续7 d来模拟慢性机械压力作用,并以表皮生长因子受体(epidermal growthfactor receptor,EGFR)特异性抑制剂AG1478、细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)激酶抑制剂PD98059分别作为干预因素处理细胞。将细胞分为空白对照组、单纯压力组、AG1478+30 cmH2O压力组、PD98059+30 cmH2O压力组,单纯压力组分为10、20、30 cmH2O3个压力水平。RT-PCR检测MUC5AC mRNA表达水平,ELISA法检测MUC5AC蛋白含量,Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminalkinase,p-JNK)和磷酸化P38(p-P38)水平。结果与空白对照组比较,单纯压力组MUC5AC蛋白及mRNA表达水平随压力水平的升高而升高(P<0.05),呈压力依赖性,同时伴随p-ERK蛋白含量增加(P<0.05),但p-JNK和p-P38含量没有明显变化(P>0.05)。30 cmH2O压力水平MUC5AC蛋白及mRNA表达水平[(0.65±0.09)、(0.62±0.04)]明显高于空白对照组[(0.28±0.04)、(0.20±0.05),P<0.01],p-ERK蛋白含量(0.68±0.05)较空白对照组(0.27±0.07)显著增加(P<0.01)。应用AG1478和PD98059分别预处理后,MUC5AC蛋白、mRNA表达水平及p-ERK蛋白水平在AG1478+30 cmH2O压力组分别为(0.39±0.08)、(0.40±0.06)、(0.25±0.04),PD98059+30 cmH2O压力组分别为(0.36±0.09)、(0.38±0.13)、(0.26±0.11),与单纯压力组30 cmH2O水平比较均显著降低(P<0.05)。结论慢性机械压力能诱导气道上皮MUC5AC表达增加,这一作用可能通过机械压力压缩侧面胞间隙来实现,而EGFR及ERK信号通路参与其中。

瞬时感受器电位香草酸受体4型通道蛋白在气道压力诱导大鼠气道黏液高分泌中的作用

目的探讨机械通气产生的气道压力对大鼠气道黏液高分泌的影响及机制。方法 48只SD大鼠分为4组,实施麻醉和气管切开后接小动物呼吸机进行机械通气。①对照组(8只):大鼠气管插管后自主呼吸;②机械通气组:对大鼠采用压力控制通气模式机械通气,根据气道压力水平再分10、20、30 cmH2O 3个亚组,每个亚组8只大鼠,机械通气6 h;③钌红干预组(8只):施加机械通气前鼠尾静脉注射瞬时感受器电位香草酸受体4型通道蛋白(transient receptorpotential vanilloid 4,TRPV4)非特异性阻断剂钌红(ruthenium red,RR)进行预处理;④4α-PDD干预组(8只):机械通气前鼠尾静脉注射4-α-佛波醇-12,13-二癸酸(4-α-Phorbol-12,13-didecanoate,4α-PDD)进行预处理。实验完毕后收集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本。采用ELISA法检测BALF中MUC5AC蛋白含量,RT-PCR法检测大鼠肺组织MUC5ACmRNA的表达水平。结果与对照组相比,机械通气组MUC5AC在蛋白及转录水平表达均增加,呈压力依赖性。30 cmH2O亚组MUC5AC蛋白及mRNA转录水平分别为[(0.71±0.10)、(6.23±0.54)]明显高于对照组[(0.29±0.05)、(1.68±0.35)](P<0.01)。在30 cmH2 O压力水平下MUC5AC的表达增加可被RR干预减弱[(0.41±0.06)、(4.15±0.22)](P<0.05),被4α-PDD干预增强[(1.12±0.09)、(8.47±0.35)](P<0.05)。结论 机械通气产生的气道压力可以通过作用于TRPV4诱导MUC5AC表达增加,这可能是压力诱导气道黏液高分泌的调节机制之一。

姜黄素通过调控PPARγ/NF-κB信号通路减轻CSE诱导的人气道上皮细胞氧化应激反应

目的探讨姜黄素对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人气道上皮16HBE细胞氧化应激和炎症反应的抑制作用及相关的分子机制。方法使用shRNA-PPARγ(shPPARγ)转染人气道上皮16HBE细胞下调PPARγ表达。将16HBE细胞分为5组即对照组、姜黄素组、CSE组、CSE+姜黄素组和CSE+姜黄素+shRNA-PPARγ组。在0 h和24 h时使用MTT法对细胞活性进行检测;干预24 h后使用q PCR对细胞TNF-α、iNOS和PPARγm RNA表达进行检测,采用western blot检测16HBE细胞中iNOS、PPARγ蛋白表达以及NF-κB p65磷酸化水平。结果 16HBE细胞在干预24 h后各组之间细胞活性未有明显统计学差异(P>0.05)。与对照组相比较,CSE干预24 h后PPARγ表达水平明显降低,TNF-α、iNOS表达及NF-κB p65磷酸化水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。但CSE组较CSE+姜黄素组和CSE+姜黄素+shPPARγ组PPARγ表达水平下降以及TNF-α、iNOS表达和NF-κB p65磷酸化水平升高更显著,差异均有统计学意义(P<0.05);且CSE+姜黄素+shPPARγ组较CSE+姜黄素组PPARγ表达水平下降以及TNF-α、iNOS表达和NF-κB p65磷酸化水平升高更明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素可以通过抑制PPARγ/NF-κB信号通路减轻CSE诱导的人气道上皮16HBE细胞的炎症反应及氧化应激。为姜黄素应用于慢性阻塞性肺疾病等疾病的临床治疗奠定了理论基础。

双能X线骨密度仪检测中对感兴趣区包含与排除功能的应用

目的运用双能X线骨密度仪的分析功能,检测骨质疏松特殊患者的骨密度(BMD),对X线吸收记数低于软组织水平的感兴趣区BMD进行分析,观察分析前后的结果。方法应用NORLAND XR-46双能X线骨密度仪器软件包的包含/排除(include/exclude,IE)功能,对人工设定分析区域或排除特定部位进行图像分析,对患者分析前后的骨矿含量进行t检验。结果应用IE功能,能够显示感兴趣区内的BMD。IE处理前后的BMD和BMC,经配对t检验后,P均<0.01。结论IE功能能纠正仪器自动分析的误差,更能反映特殊患者的骨质疏松骨矿含量的状况。

肺结核患者T细胞亚群及炎性因子水平对患者预后的影响

目的：探讨肺结核患者T细胞亚群及炎性因子的水平及对患者预后的影响。方法：选取2013年2月~2015年2月经我院传染科确诊为结核病患者72例设为实验组,其中活动性肺结核患者58例,静止性肺结核患者14例;选取同期于我院体检健康者50例设为对照组,分别于治疗前和治疗6个月后对两组进行痰菌检测,记录痰菌转阴率、检查肺部病灶的吸收以及空洞闭合情况,对患者T细胞亚群中各免疫细胞功能再次检测。结果：实验组患者外周血中CD3、CD4、CD8、CD4/CD8均明显低于对照组,尤以实验组中活动性肺结核患者明显（P〈0.01）,而在实验组静止性活动患者外周血中CD4/CD8较对照组低,较活动性肺结核患者高（P〈0.01）。实验组患者实验组患者血清中IL-1、IL-6、TNF-α的量明显高于对照,尤以实验组中活动性肺结核患者明显（P〈0.01）。结论：细胞亚群及炎性因子在肺结核患者中发挥着重要的作用,其动态变化可以有效的显示患者免疫功能及患者病情的严重程度,对于判断和了解肺结核患者病情的变化以及评估其预后都要着重要的价值,值得临床进一步探究。