戴氏虫草菌丝体抗肿瘤化学成分研究

研究戴氏虫草菌丝体抑制肿瘤细胞增殖活性有效部位的化学成分及其抑制肿瘤细胞活性。采用液体深层发酵制备戴氏虫草菌丝体,MTT法筛选其抑制肿瘤细胞增殖活性的有效部位,反复正相柱层析,Sephadex LH-20等方法分离纯化其有效部位中的化学成分,利用EI、ESI及1D-NMR等技术对其结构进行鉴定;并研究他们对肿瘤细胞增殖的抑制活性。结果显示,戴氏虫草菌丝体石油醚、乙酸乙酯萃取部位为抑制肿瘤细胞增殖活性部位,并从中分离得到6个化合物,分别为反式-16-十八碳烯酸(化合物1)、壬二酸(化合物2)、5α,8α-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(化合物3)、亚油酸甲酯(化合物4)、亚油酸(化合物5)和十七-烷醇(化合物6)。活性检测表明,化合物2对舌癌Tca-8113细胞增殖具有较高的抑制活性,IC50值为31.90μmol/L,化合物3对乳腺癌MDA-MB-435细胞和BT474细胞具有较高的细胞增殖抑制活性,IC50值分别为25.57、26.31μmol/L。从戴氏虫草菌丝体抑制肿瘤细胞增殖的活性部位中分离到6个化合物,化合物1~2、4~6为首次从该菌丝体中分离得到。化合物2、3分别选择性地对Tca-8113细胞和MDA-MB-435细胞、BT474细胞有较强的细胞增殖抑制活性,可能为戴氏虫草菌丝体抑制肿瘤细胞增殖的有效成分。

汉防己甲素衍生物P-42对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察汉防己甲素(TET)衍生物P-42对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法收集对数生长期MDA-MB-435细胞,观察组分别加入不同浓度P-42,空白对照组加入DMEM培养液,培养24 h后,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。收集对数生长期MDA-MB-435细胞,观察组分别加入终浓度2、10μmmol/L的P-42,对照组加入DMEM培养液,另设正常乳腺细胞MCF-10a为空白组,采用Western blot法检测各组细胞布卢姆综合征(BLM)蛋白。结果当P-42浓度在5、20、80μmmol/L时,MDA-MB-435细胞增殖抑制率分别为76.00%、84.77%和85.53%,20、80μmmol/L时细胞增殖抑制率均高于5μmmol/L时,P均<0.05;80μmmol/L时细胞增殖抑制率高于20μmmol/L时,但差异无统计学意义。观察组P-42浓度在2、10μmmol/L时,细胞早期凋亡率分别为39.47%、87.95%,晚期凋亡率分别为2.73%、3.82%,对照组分别为1.40%、0.90%,组间比较,P均<0.05。观察组P-42浓度在2、10μmmol/L时,BLM蛋白的相对表达量为31.57±7.80、33.82±8.61,对照组和空白组BLM蛋白相对表达量分别为12.73±1.14、19.12±1.58,组间比较,P均<0.05。结论 TET衍生物P-42可抑制MDA-MB-435细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与促进BLM蛋白表达有关。

汉防己甲素衍生物对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用及其机制

目的 :探讨汉防己甲素衍生物HL-42和HL-49对三阴性乳腺癌MDAMB-231细胞增殖、克隆形成能力以及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 :采用不同浓度的HL-42和HL-49分别作用MDA-MB-231细胞后,应用MTT法检测细胞的增殖情况;平板克隆形成实验检测对细胞克隆形成的影响;2和10μmol/L的HL-42和HL-49分别作用于MDA-MB-231细胞24 h后,应用FCM法检测对细胞凋亡的影响;分别采用半定量RTPCR法和蛋白印迹法检测细胞中Bloom综合征解旋酶(Bloom’s syndrome helicase,BLM)、人乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)和同源重组修复的关键酶Rad51 m RNA及蛋白的表达水平。结果:1.25~10μmol/L的HL-42和HL-49处理24、48和72 h后,MDAMB-231细胞的增殖受到抑制,呈时间和浓度依赖性(P值均<0.05),HL-42作用于MDA-MB-231细胞24、48和72 h的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值分别为(8.27±0.27)(、3.92±0.39)和(2.72±0.14)μmol/L;相应的HL-49的IC50值分别为(5.30±0.45)、(3.19±0.32)和(1.64±0.12)μmol/L;而阳性对照顺铂的IC50值则为(61.96±3.83)、(29.08±4.11)和(16.19±2.53)μmol/L。0.2、0.5、1和5μmol/L的HL-42和HL-49均可抑制MDA-MB-231细胞克隆的形成(P值均<0.001)。2和10μmol/L的HL-42和HL-49均可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,且有浓度依赖性(P值均<0.05)。2μmol/L的HL-42处理24 h后,MDA-MB-231细胞中的Rad51 mR NA及蛋白的表达水平无明显变化(P值均>0.05);10μmol/L的HL-42处理24 h后,MDA-MB-231细胞中的Rad51 m RNA及蛋白的表达水平下调(P值均<0.05);2和10μmol/L的HL-42处理24 h后,MDA-MB-231细胞中BLM和BRCA1 m RNA及蛋白表达水平无明显变化(P值均>0.05)。2μmol/L的HL-49处理24 h后,MDA-MB-231细胞中的BRCA1 m RNA及蛋白表达水平无明显变化(P值均>0.05),10μmol/L的HL-49处理24h后,MDA-MB-231细胞中的BRCA1 m RNA及蛋白表达水平下调(P值均<0.01);2和10μmol/L的HL-49处理24 h后,MDA-MB-231细胞中的BLM、Rad51 m RNA及蛋白表达水平下调(P值均<0.01)。结论 :汉防己甲素衍生物HL-42和HL-49可明显抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,作用机制可能是HL-42和HL-49部分阻断了细胞内DNA损伤修复通路。

汉防己甲素衍生物HL-49协同顺铂或多柔比星促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡

目的:研究汉防己甲素衍生物HL-49协同顺铂(cisplatin,DDP)或多柔比星(adriamycin,ADM)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:用不同浓度的HL-49、DDP、ADM单药以及HL-49联合DDP或ADM处理MDA-MB-231细胞;采用MTT法检测细胞的增殖抑制率并计算Q值,平板克隆实验检测细胞的集落形成能力,FCM法检测细胞的凋亡率并计算Q值;蛋白质印迹法检测细胞中Bloom综合征解旋酶(Bloom’s symdrome helicase,BLM)、乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)和DNA修复关键酶Rad51以及凋亡相关蛋白caspase 3、caspase 8、 caspase 10、Bax、p53和Bcl-2蛋白的表达水平。结果:与HL-49、DDP和ADM单药组相比,HL-49(1或2μmol/L)联合DDP(5或10μmol/L)或ADM(2或5μmol/L)组MDA-MB-231细胞的增殖抑制率均明显提高(P值均<0.05),其中HL-49联合DDP(单药浓度两两组合)4个浓度组的Q值分别为2.04、1.88、1.87和1.83,HL-49联合ADM的Q值分别为1.37、1.21、1.36和1.23,两药联用均具有协同效应。在平板克隆形成实验中,联合用药组细胞的集落形成数均较单药组明显减少(P值均<0.05)。HL-49(1或2μmol/L)联合DDP(5或10μmol/L)或ADM(2或5μmol/L)组MDA-MB-231细胞的凋亡率均高于单药组(P值均<0.05),其中HL-49联合DDP的Q值分别为1.20、1.35、1.70和2.06,HL-49联合ADM的Q值分别为1.48、1.17、1.99和2.13,提示两药联用有协同作用。HL-49联合DDP或ADM用药组MDA-MB-231细胞中的caspase 3、caspase 8、caspase 10和Bax蛋白的表达水平均较单药组明显上调(P值均<0.05),Rad51、BRCA1、BLM、p53和Bcl-2蛋白表达水平均明显下调(P值均<0.05)。结论:汉防己甲素衍生物HL-49与DDP或ADM联合用药均具有协同作用,且其联用抗肿瘤活性可能与诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡相关。