原花青素对前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡的影响

目的研究原花青素对人雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养的LNCaP细胞株与100、200、300μg/ml的原花青素共孵育,分别在24、48和72h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况。结果原花青素可引起LNCaP细胞形态较明显改变。不同浓度(100、200、300μg/ml)原花青素对LNCaP细胞作用的细胞增殖抑制率分别为27.1%、72.1%和86.4%。流式细胞术检测表明原花青素可诱导LNCaP细胞凋亡,300μg/ml原花青素处理72h引起36.5%的凋亡率。这3种作用均随原花青素浓度和作用时间的延长而增强。结论原花青素可在体外抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,并促进其凋亡。

两种抗原致敏方式负载树突状细胞疫苗对LNCaP细胞株的体外杀伤作用

目的:比较验证重组腺相关病毒负载PSA基因转染方式与LNCaP细胞裂解物诱导方式对产生树突状细胞(DCs)疫苗的的影响.方法:抽取HLA表型为A2的健康志愿者外周血,分离单核细胞,体外培养.通过反复冻融LNCaP细胞、提取肿瘤细胞裂解物以及使用含PSA片段的重组腺相关病毒转染未成熟DCs,诱导特异性细胞毒性T细胞(CTL).检测体外培养的DCs和CTL活性,并使用MTT法检测两组CTL对LNCaP细胞的杀伤作用,同时使用腺相关病毒转染组诱导的CTL对LNCaP和DU145两种前列腺癌细胞进行杀伤实验检测.结果:两种方式均可培养成熟的DCs,诱导激活CTL并分泌IFN-γ,而腺相关病毒转染的DCs成熟度和CTL诱导率均高于细胞裂解物组;腺相关病毒转染组诱导的CTL对LNCaP细胞的杀伤率显著高于细胞裂解物组诱导的CTL;腺相关病毒转染组诱导的CTL对LNCaP细胞有特异性杀伤作用.结论:两种抗原递呈方式均可培养出成熟的DCs,并可诱导自体CTL增殖;而使用重组腺相关病毒转染PSA至DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式,具有高效特异性.

人外周血单核细胞来源树突状细胞转染重组腺相关病毒诱导特异性T细胞的效应

目的:观察人外周血单核细胞来源的树突状细胞转染含前列腺特异性抗原片段的重组腺相关病毒后,其所诱导的特异性T细胞对前列腺癌细胞株LNCaP和DU145的体外杀伤抑制作用。方法:实验于2006-05/10在南方医院肿瘤科生物室完成。①对象:HLA-A2基因亚型的健康自愿供血者1名,对本实验知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准。作为靶细胞的前列腺癌细胞株LNCaP、DU145以及携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒由美国阿肯色大学生物治疗中心刘勇教授惠赠。②实验方法:抽取HLA表型为A2的健康自愿供血者外周血50mL,Ficoll法分离单核细胞体外培养,磷酸盐缓冲液洗涤6孔板,收集悬浮细胞作为效应T细胞,贴壁细胞即为树突状细胞。向6孔板内加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒,第4天加入白细胞介素4,第6天加入肿瘤坏死因子α,至培养第7天收获悬浮细胞即为成熟的树突状细胞。③实验评估:应用流式细胞仪检测树突状细胞表面分子标记的表达。以ELISA法检测树突状细胞分泌白细胞介素12的含量。将成熟树突状细胞与效应T细胞分别按1:10、1:20、1:40进行共培养,将未经过树突状细胞共育的T细胞设置为空白对照组,ELISA法检测效应T细胞分泌干扰素γ的含量。LNCaP、DU145靶细胞分别与效应T细胞按效靶比5:1、10:1、20:1、40:1进行共培养,MTT法检测效应T细胞对两种靶细胞的杀伤作用。结果:①树突状细胞表面分子标记的表达:经携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒致敏后的树突状细胞,培养8d后高表达CD83.CD40.HLA-DR,CD80,CD1a,CD86,分别为65.8%,66.0%,96.7%,70.0%,61.9%.79.0%。②树突状细胞释放白细胞介素12含量检测:与培养第1天比较,第7天成熟树突状细胞释放白细胞介素12的含量显著升高(P<0.05)。③效应T细胞释放干扰素γ含量检测:与空白对照组比较,树突状细胞:T细胞按1:10、1:20、1:40共培养后所释放的干扰素γ含量均明显升高(P<0.01.0.01,0.05),且随树突状细胞加入比例的提高有所增加。④效应T细胞的细胞毒性作用检测:效应T细胞可有效识别并杀伤HLA-A2阳性的LNCaP细胞,其抑制作用在效靶比为10:1、20:1、40:1时均显著强于DU145细胞株(P<0.01)。结论:经携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒转染后的树突状细胞,其细胞表型和刺激淋巴细胞增殖、分化的功能无明显改变,可诱导自体效应T细胞增殖,该效应T细胞对LNCaP细胞具有明显杀伤作用。

紫杉醇联合卡铂治疗激素抵抗性前列腺癌

目的:探讨紫杉醇联合卡铂治疗内分泌治疗失败前列腺癌的应用价值。方法:14例前列腺癌患者,全部经去势手术及不同程度的抗雄激素药物治疗,经全身骨扫描证实均有多发性骨转移灶,其中肝脏和双侧肾上腺转移各1例,血前列腺特异性抗原(PSA)呈逐渐上升趋势。给予紫杉醇135mg/m2,第1、8天;卡铂AUC5300～400mg/m2,第1天;21～28d为1个周期。结果:本组病例随访2～30个月,平均16个月。入组后接受治疗1～12个周期。4例患者PSA值降至正常水平<4ng/mL,7例PSA值下降超过50%,有效率78.6%,有效患者PSA从治疗前(65.8±46.2)ng/mL下降至(13.4±9.8ng/mL),有效持续时间5～18个月,平均14.2个月。2例患者死亡,中位生存期为18.2个月。最常见的毒副反应为骨髓抑制,本组未出现最不利的不良反应—过敏反应,其余反应均可——耐受。结论:紫杉醇联合卡铂治疗激素抵抗性前列腺癌有较好疗效,毒副反应可以耐受。

Chl H/RS细胞与背景细胞蛋白表达的相关性

目的 :探讨cHL肿瘤性H/RS细胞与反应性背景淋巴细胞蛋白表达的相关性。方法 :采用免疫组化SABC法对 32例cHL进行CD2 0、CD30、CD15、CD4 5RO和LMPI蛋白表达的检测。结果 :(1) 32例cHL中LrHL11例 ,NSHL2例 ,MCHL14例 ,LDHL5例 ;(2 ) 30 / 32 (93.8% )的H/RS细胞与 14 / 32 (4 3.8% )的北景淋巴细胞表达CD30 ,2 5 / 32J(78.1% )的H/RS细胞与 7/ 32(2 1.9% )的背景淋巴细胞表达CD15 6 / 32 (18.8% )的H/RS细胞与 8/ 32 (2 5 .0 % )的背景淋巴细胞优势表达CD2 0 ,7/ 32 (2 1.9% )的H/RS细胞与 18/ 32 (5 6 .3% )的背景淋巴细胞优势表达CD4 5RO ;(3) 2 0 / 32 (6 2 .5 % )的H/RS细胞表达LMP1蛋白。结论 :H/RS及其背景细胞的在蛋白表达水平上具有一定的相关性 ,检测CD2 0、CD30、CD15、CD4

间接法原位PCR在cHL IgH基因重排研究中的应用

目的 :探索在石蜡切片上进行间接法原位PCR的可行性及利用产物探针检测IgH克隆性基因重排的意义。 方法 :选取获得IgH克隆性基因重排的经典型霍奇金淋巴瘤 (cHL) ,纯化产物合成探针 ,进行间接法原位PCR。 结果 :在H/RS细胞和周围背景细胞核内均发现棕褐色杂交颗粒 ,利用产物探针互测时也能出现杂交颗粒。结论 :在石蜡切片上进行间接法原位PCR是可行和有效的 ,但产物探针的精确性仍有待进一步证实。

经典性霍奇金淋巴瘤中EB病毒潜伏膜蛋白1的表达

目的探讨经典性霍奇金淋巴瘤（ｃＨＬ）肿瘤性Ｈ／Ｒ－Ｓ细胞埃泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ１）的表 达情况及其意义。方法 采用免疫组化ＳＡＢＣ法对３２例ｃＨＬ进行ＬＭＰ１蛋白表达的检测。结果２０／３２（６２．５％）例ＬＭＰ１ 蛋白表达阳性，在各亚型之间没有显著性差异（Ｘ２＝０．８０９， Ｐ＝０．８４７）。结论ＬＭＰ１蛋白表达有地区差异，在ｃＨＬ亚型间可

经典型霍奇金淋巴瘤CD15及CD30蛋白表达的研究

目的 探讨CD15和CD 3 0在经典型霍奇金淋巴瘤 (cHL )H /RS细胞的表达及区别。方法 采用SABC法对 3 2例cHL中CD 15和CD3 0蛋白的表达进行检测。结果 CD15阳性 2 5例 ,阳性率为 78.1% ;CD 3 0阳性 3 0例 ,阳性率为 93 .8%。各型之间阳性表达没有显著性差异 ,2种蛋白表达之间也无显著性差异。结论 CD 15和CD3 0均可作为cHL的诊断性免疫标记。

浅论医学课课前准备的重要性

课堂讲学有两个环节 :课前准备和课堂发挥 ,而课前准备进行的如何直接影响课堂发挥的好坏 ,也即上课质量的高低。从教师、教材、学生

bcl-2基因与淋巴细胞发育

bcl—2基因是一种重要的抑制凋亡的原癌基因,它在淋巴细咆发育过程中的正负选择(成熟与凋亡)中起着主要作用,而它的易位和异常表达也影响了淋巴瘤的发生。本文就bcl-2基因的分子基础、抑制凋亡机制及其在正常淋巴细胞发育中的作用等作一综述。

何杰金病H/RS细胞起源的新认识

微操作技术结合免疫组化及免疫球蛋白基因重排检测 ,使人们对H/RS细胞起源有了更进一步的认识 ,初步推测H/RS细胞来源于生发中心B细胞的不同发育阶段。

悬浮培养细胞的细胞块制作及其应用

淋巴造血系统来源的细胞株在细胞培养过程中因细胞无法贴壁生长，只能采取悬浮培养的方式。悬浮培养的细胞在进行形态学及免疫表型研究中，通常采用细胞滴片和细胞甩片技术，因获得的细胞为三维立体结构，故所观察到的细胞结构欠清晰。细胞块技术是近几年逐步发展起来的针对人体细针穿刺标本及脱落细胞学诊断的一项技术，基本原理是将液体中的样本进行离心，

Hsa-miR9在伯基特淋巴瘤EBV^(+/-)细胞中的差异表达及其与BCL-6调控的关系

目的探究hsa-miR9在伯基特淋巴瘤细胞株EBV^+Raji/EBV-Ramous中差异表达及其与BCL-6的关系。方法荧光定量PCR检测hsa-miR9和BCL-6在EBV^+Raji和EBVRamous细胞中的表达;利用Oligofectamine 2000脂质体法将化学合成的hsa-miR9-inhibitor和随机序列转染高表达hsa-miR9的EBV^+Raji细胞(Raii-miR9-inhibitor组和Raji-CON组),hsa-miR9-mimics和相应的随机序列转染低表达hsa-miR9的EBVRamous细胞(Ramous-miR9-mimics组和Ramous-CON组);运用实时荧光定量PCR、Western blotting检测转染前后BCL-6的表达,AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡率和观测凋亡细胞形态。结果 hsa-miR9和BCL-6在EBV^+Raji细胞的表达水平显著高于EBVRamous细胞(P<0.01);EBV^+Raji细胞经转染hsa-miR9-inhibitor 48 h后,BCL-6基因和蛋白水平的表达量均降低,而EBVRamous细胞经转染hsa-miR9-mimics 48 h后,BCL-6基因和蛋白水平的表达量均升高,与相应的随机序列组相比均有显著性差异(P<0.05);转染48 h后Raji-miR9-inhibitor组凋亡率明显低于Raji-CON组,Ramous-miR9-mimics组凋亡率明显高于Ramous-CON组,差异具有统计学意义(P<0.05);Raji-CON组和Ramous-miR9-mimics组可见明显凋亡细胞。结论 hsa-miR9正向调控伯基特淋巴瘤细胞株EBV^+Raji/EBVRamous细胞BCL-6的表达和凋亡。

血管生成与非小细胞肺癌

近年来有关肿瘤血管生成与肿瘤的生长、转移及预后的关系已受到越来越多的学者的关注,现就血管生成与非小细胞肺癌的关系作一个简单的回顾。

mic2/CD99基因克隆及在霍奇金淋巴瘤L428细胞株中表达

目的克隆mic2/CD99基因并表达于L428细胞株。方法通过PCR及双酶切方法,从Jurkat细胞基因组RNA中获得mic2/CD99全长基因编码序列,克隆到pcDNA3.1(+)质粒载体上,构建包含mic2/CD99全长基因载体;用脂质体转染法将mic2/CD99全长基因载体转染至L428细胞系;并从分子水平验证其存在。结果RT-PCR方法扩增出大小为558bp片段,序列测定其编码序列正确,酶切鉴定亚克隆序列正确。结论成功构建了mic2/CD99全长基因载体,并稳定转染于L428细胞株中。

霍奇金淋巴瘤背景淋巴细胞免疫表型与组织学类型关系及其意义

本研究探讨霍奇金淋巴瘤(Hodgkin′s Lymphoma,HL)组织中的淋巴细胞表型与组织学类型的关系及其意义。应用即用型快速免疫组织化学MaxVisionTM法和计算机图像分析软件IPP6.0对经甲醛固定石蜡包埋的37例HL病理标本进行背景细胞蛋白表达的检测。选用的抗体有抗CD3/CD45RO、抗CD20/CD79a、抗CD4、抗CD8、抗GrB和抗TIA-1。结果表明:37例HL中结节性淋巴细胞为主型(NLPHL)4例,经典型(CHL)33例,其中淋巴细胞丰富型(LRHL)13例,结节硬化型(NSHL)14例,混合细胞型(MCHL)6例,在T/B细胞比值分析时另增加的10例会诊切片中1例NLPHL,4例NSHL,5例LRHL。图像定量分析结果显示:NLPHL中T/B细胞比值为0.28±0.07,CHL中T/B细胞比值为4.34±2.45,差异有统计学意义(p=0.001),T/B比值在CHL中表现为LRHL、NSHL、MCHL之间无显著性差异(p值均大于0.05);CD4+/CD8+细胞比值在NLPHL中为4.55±1.28,CHL中为4.10±1.50,(p=0.574),CHL中CD4+/CD8+细胞比值表现为MCHL>NSHL>LRHL(p=0.037);多重比较结果显示,LRHL与MCHL和NSHL之间有统计学差异(p=0.010和0.028);GrB+/TIA-1+比值在NLPHL中为0.71±0.57,CHL中比值为0.74±0.39,两型之间没有统计学差异(p=0.868),CHL中GrB+/TIA-1+细胞比值表现为MCHL、NSHL、LRHL之间无显著性差异(p值均大于0.05)。结论:HL背景细胞的免疫表型可以反映宿主肿瘤微环境,从T、B细胞的分布可以得出NLPHL与CHL的微环境是不同的。NLPHL表现出来其独特的生物学特点,CHL各亚型具有独特特点:T/B细胞比值在CHL中为LRHL>NSHL>MCHL;CD4+/CD8+与GrB+/TIA-1+细胞比值表现一致,均为MCHL>NSHL>LRHL。结合CHL亚型预后关系LRHL>NSHL>MCHL推理得出:T/B,CD4+/CD8+,GrB+/TIA-1+的细胞比值与CHL组织学类型预后分别呈现正相关和负相关关系。

地高辛标记斑马鱼cd99l2基因RNA探针的制备

目的制备用于斑马鱼胚胎早期cd99l2基因时空表达检测的地高辛标记RNA探针。方法设计引物,构建cd99l2/pGM-T重组质粒,用SacII和SalI分别进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6RNA聚合酶和T7RNA聚合酶转录合成地反义和正义地高辛标记的RNA探针,用整体原位杂交法检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的表达。结果成功构建了cd99l2/pGM-T重组质粒,体外转录获得反义和正义RNA探针,反义探针杂交检测证实cd99l2基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中中枢神经系统呈现高表达,正义探针未检测到表达信号。结论本研究制备的反义cd99l2RNA探针,兼顾了特异性和敏感性,能有效检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的定位表达,而正义探针可以作为阴性对照,为进一步探究cd99l2基因在斑马鱼发育过程中的作用机制奠定了基础。

经典型霍奇金淋巴瘤CD30、CD15表达差异性的研究

探讨经典型霍奇金淋巴瘤 (c HL )及其亚型的 R- S细胞 CD30、CD15蛋白表达的差异性。将 32例 c HL全部按 WHO新分类标准进行病理分型 ,采用免疫组织化学 SABC法进行 CD30和 CD15染色 ,观察每一病例及不同亚型 R- S细胞阳性表达率。 32例 c HL中 R- S细胞 CD30阳性表达率为 93.8% (30 / 32 ) ,CD15为 78.1% (2 5 / 32 ) ,各亚型间均无显著性差异 (P>0 .0 5 )。 CD30、 CD15两者的阳性表达率无显著性差异性 (P>0 .0 5 ) ,但 CD30的表达程度高于 CD15 (P<0 .0 0 1)。 CD15和 CD30可作为诊断 c HL的参考依据 ,在 R-

室管膜瘤31例细胞学诊断

目的 探讨核沟作为细胞学诊断室管膜瘤的意义。方法 观察 31例经组织学证实为室管膜瘤的术中冷冻切片的组织细胞印片 ,统计每例室管膜瘤菊形团、血管周假菊形团、核沟的出现频率。结果 有室管膜瘤菊形团者占 77 4% (2 4/ 31) ,血管周假菊形团为 35 5 % (11/ 31) ,核沟为 74 2 % (2 3/ 31)。结论 核沟可能是除室管膜瘤菊形团。

两种抗原致敏方式负载树突状细胞疫苗对结直肠癌细胞株的体外杀伤作用

目的比较两种抗原负载方式对树突状细胞(DCs)疫苗的影响。方法抽取HLA表型为A11的健康志愿者外周血,分离单核细胞,体外培养。通过反复冻融LoVo细胞,提取肿瘤细胞裂解物或者使用含CEA片断的重组腺相关病毒转染未成熟DCs,诱导特异性细胞毒性T细胞。检测体外培养的DCs和CTL活性,并使用MTT法检测两组CTL对LoVo细胞的杀伤作用。结果两种方式均可培养的成熟DCs,诱导的CTL细胞分泌IFN-γ有所增加;转染后DCs诱导特异性CTL可有效识别并杀伤HLA-A11阳性的LoVo细胞,腺相关病毒提呈抗原制备的DCs疫苗对LoVo细胞的杀伤作用明显高于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式。结论两种抗原提呈方式均可培养出成熟的DCs,不明显改变DCs表型和刺激淋巴细胞增殖、分化功能,并可诱导自体CTL增殖。使用腺相关病毒转染DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式。