产纤维素酶细菌的分离筛选与鉴定

通过筛选获得高产纤维素酶细菌菌株,为纤维素酶制剂研制及纤维素酶工程菌构建提供试验材料。采用刚果红平板从牛羊粪便及腐败的玉米秸秆和木屑中分离产纤维素酶菌株,以DNS法测定酶活,根据酶活复筛产纤维素酶分离菌株;观察分离菌株的形态、染色与培养特性;应用16S rDNA通用引物扩增菌株基因组DNA,测序结果提交GenBank数据库进行Blast比对分析和相似性搜索,作出复筛菌株种的鉴定。结果表明:分离获得16株纤维素酶产量较高的细菌菌株,均为革兰氏阳性菌,菌体呈短杆状、具中央芽孢,经16S rDNA序列比对分析和相似性搜索,鉴定为10株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、6株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。

多粘类芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶bglA、bglB和bgl基因在大肠杆菌中的表达

为了有效地提高β-葡萄糖苷酶的活性,本实验将多粘类芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)β-葡萄糖苷酶bglA、bglB和bgl(bglA和bglB基因)基因分别连接在pET-28a上并在大肠杆菌C41中表达。将这3株重组菌分别命名为EA、EB及共表达菌株EAB,并将构建好的工程菌EA和EB按1∶1,1∶2,2∶1进行混合培养,分别比较单一酶组分、共表达及混合表达菌株的酶活。SDS-PAGE电泳图显示BglA和BglB的大小都为50ku,EA和EB混合培养的蛋白大小也为50ku,Bgl大小为100ku,表明BglA和BglB在体外不能形成蛋白复合物,只有在生物体内才能形成Bgl复合蛋白。酶活测定结果表明共表达Bgl与多粘类芽孢杆菌的酶活差异不显著,但显著高于其他组分酶活(P<0.05)。刚果红染色结果也表明Bgl酶活比单一酶组分的酶活明显提高。本实验为纤维素酶多组分人工组装及集成生物工艺菌种的构建奠定实验基础。

多粘类芽孢杆菌纤维素酶基因bglA,bglB和EG在乳酸菌中的分泌表达

通过PCR扩增获得乳酸菌(Lactobacterium lactis MG1363)的usp45基因,将其克隆到乳酸菌(L.lactis)食品级表达载体pNZ8048中获得分泌型表达载体pNZ-X;然后将多粘类芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)β-葡萄糖苷酶基因bglA、bglB及内切β-葡聚糖酶基因EG分别连接载体pNZ-X,获得重组质粒pNZ-X::bglA,pNZ-X::bglB和pNZ-X::EG,将3个质粒电转导入L.lactis NZ9000,得到重组乳酸菌L.lactis NZ9000/pNZ-X::bglA、L.lactis NZ9000/pNZ-X::bglB和L.lactis NZ9000/pNZ-X::EG,并测定分泌性表达的BglA,BglB和EG的酶活性。结果显示:3个酶大小均在50kU;DNS法测定酶活力表明重组菌株的酶活力显著低于多粘类芽孢杆菌的酶活力(P<0.05),但具有一定的活性;刚果红染色结果也表明重组乳酸菌分泌产生的酶可产生明显的水解圈。试验为重组纤维素酶在食品级菌株中重组表达提供了一种可行的方案,为秸秆的降解研究奠定了基础。

腾冲嗜热厌氧杆菌tte0732基因的表达及生物信息学分析

腾冲嗜热厌氧杆菌tte0732(Galu)基因编码的TTE0732是温度依赖性蛋白。为研究其在热适应中的作用,应用PCR技术克隆腾冲嗜热厌氧菌tte0732基因,构建原核表达载体pET-28a::tte0732并在大肠埃希菌BL21表达TTE0732;通过qRT-PCR分析tte0732基因在50、60、75和80℃的RNA表达量;应用生物信息学软件分析Galu在嗜热菌和常温菌中编码氨基酸的基本理化性质。成功构建了原核表达载体pET-28a::tte0732并在大肠埃希菌BL21中得到高效表达,TTE0732分子质量大小为35 ku,主要以可溶性形式存在;qRT-PCR显示tte0732 mRNA在75和80℃高表达;生物信息学分析得出tte0732基因完整的ORF全长909 bp,编码302个氨基酸,其中Ile(I)、Leu(L)含量高于常温菌,编码蛋白为酸性亲水性蛋白,等电点为5.22,含有18个潜在的磷酸化位点,不存在跨膜结构、信号肽和糖基化位点。预测其蛋白质二级空间结构以α-螺旋、无规则卷曲、β-折叠为主。腾冲嗜热厌氧杆菌TTE0732蛋白是一种亲水性蛋白,在原核系统能高效表达,本研究结果对嗜热蛋白质的热稳定性机制的研究具有一定的参考。

“艾美乐”等4种杀虫剂对烟蚜的药效试验

进行了“艾美乐”、“吡虫啉”、“涕灭威”、“氧化乐果”防治烟蚜的室内和田间药效试验。室内校正死亡率分别为 95 .91%、94 .35 %、89.6 7%、85 .4 2 % ;穴施防效 :“艾美乐”5、10、15g/ 6 6 7m2 ,“涕灭威”10 0 0g/ 6 6 7m2 ,分别为 74 %～ 84 .86 % ,95 %～ 96 .15 % ,98.2 7%～ 98.6 %和 70 .81%～ 89.9%。叶面喷施“艾美乐”2、4、6g/ 6 6 7m2 ,“吡虫啉”30 0 0倍 ,“氧化乐果”10 0 0倍的防效分别为 76 .4 5 %～ 99.5 2 % ,84 %～99.95 % ,92 .4 0 %～ 99.98% ,89.9%～ 99.78%和 4 4.6 5 %～ 83.87%。方差分析证明 ,各种药效差异极显著。

MACF1对成骨细胞微丝骨架和细胞力学性能的调节作用

为探索细胞骨架关键交联分子微管微丝交联因子1(microtubule actin crosslinking factor 1,MACF1)对成骨细胞微丝骨架和细胞力学性能的调节作用,以MACF1低表达的小鼠成骨细胞及其对照细胞为研究对象,通过细胞免疫荧光染色和激光扫描共聚焦显微镜,观察成骨细胞微丝骨架;运用微丝图像分析系统对微丝特性进行定量分析;采用原子力显微镜检测细胞弹性模量。结果发现,与对照组相比,MACF1低表达显著改变了小鼠成骨细胞的微丝分布角度,增加了成骨细胞的微丝长度与数量,显著减小了成骨细胞的刚度。研究结果为深入认识MACF1在成骨细胞中的功能奠定了实验基础,并为由成骨细胞功能改变引起的骨质疏松等骨骼疾病防治研究提供了新靶标。

县域产业经济服务的途径探索

在"3+3"校县联合行动新模式下,农业高校专业学院应充分发挥人才智力、知识与学科专业技术优势,服务地方产业经济。烟草学院在服务县域产业经济过程中,实现了科研在生产中完成、师生在实践教学中成长的校县合作新机制,探索了校县合作共建助推县域产业经济发展的新模式以及人才培养的新路子,促进了县域烟草产业经济的发展壮大,达到了农民增收、财政增效的良好成效。

提高物理教学实效的策略

教材、教师、学生是教学活动的三大要素，这三大要素与课堂教学内容、课堂教学形式和课堂教学效率密切相关。高中物理教学实效的提高是课堂教学改革的重点，根据多年从事高中物理教学经验，笔者认为要提高高中物理教学实效应在课前准备，课堂指导和课后拓展三方面下工夫。

MACF1的生理学与病理学功能研究进展

微管微丝交联因子1(microtubule actin crosslinking factor 1,MACF1)是一种重要的细胞骨架蛋白,属于spectraplakin家族。MACF1在人和小鼠的脑、心脏、肺、骨骼肌、神经、肝脏、胃、肾和皮肤等多个组织中广泛表达,对细胞功能、胚胎发育和多种组织的生理活动具有重要调节作用。本文在介绍MACF1编码基因、结构和蛋白异构体的基础上,结合MACF1生理学与病理学的研究进展,详细总结了MACF1对细胞骨架动态变化与细胞迁移、细胞增殖与分化等细胞功能的调节作用及机制;综述了MACF1在参与胚胎发育、维持皮肤完整性、促进神经系统发育、调节心脏功能、保持肠通透性和骨组织发育等方面的重要研究进展。同时,分析了MACF1与人类遗传性疾病(Ⅰ型血影斑蛋白家族疾病等)、神经性疾病(帕金森病、精神分裂症、阿尔茨海默病等)、骨骼性疾病(骨质疏松等)和肿瘤疾病(肺癌、胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、黑色素瘤、胃癌等)的相关性及其潜在致病机理。最后,提出未来MACF1研究的重点方向,以期为深入揭示MACF1的生物功能提供新依据,为阐明相关疾病发生的分子机制提供新线索,为相关疾病的防治研究提供新思路和新靶点。

论高中物理实验教学模式的探索

虽然高中阶段的学生能够很好地掌握各学科知识内容尤为重要,但是这不是主要的学习目的,而培养高中学生能够独立去分析问题、解决问题才是高中学生通过全面学习,必须要具备的能力,这样就可以帮助学生不畏惧去面对未来选择的竞争。所以,在物理实验教学方面,教师必须改变传统的教学模式,合理地选用有效的教学创新,向学生提供锻炼平台,在实验课时提出一些问题,推动学生能够去独立思考问题,同时可以针对这些问题做出有效的解决方案,培养学生学习的能力。由此可见,对于物理实验教学模式的探索,具有十分重要的意义。本文以物理实验教学模式的探索为主题,对其展开论述。