扫描电镜精子样品快速制备方法

常规扫描电镜精子样品制备方法易出现精子团聚、形变等结构表征缺陷,而且大部分少精样品无法满足制样要求。为了改进技术,在精子样品制备过程中引入一种多元醇生物相容性聚合物,重悬固定后的精子样品均匀涂布于硅片上,经自然干燥后可直接用于扫描电镜观察。优化后的扫描电镜精子样品制备流程及方法可大幅改善扫描电镜精子样品成像效果。

长时间活体成像的小动物固定解决方案

为解决双光子活体显微成像试验中样本固定的问题,研制了一套适用于多种不同模式的小动物固定装置,能根据动物的大小进行灵活调整适配,可对小动物不同感兴趣区域(如脑部、腹部、四肢等)进行固定,确保成像过程中焦面的稳定,并可以对成像的位置进行定位,保证长时间、多时间节点的稳定成像.装置简单易加工、成本低,能广泛适用,为活体成像提供了一种多功能的活体小动物固定方法,能够帮助研究人员完成大部分麻醉状态下小动物活体试验.

科研论文中显微图像的获取和处理

显微成像是科学研究中重要且直观的方法,插图是科研论文的重要组成部分,对于成像技术的初学者而言,在显微图像获取和处理过程中容易面临各种问题及误区,该文围绕显微图像的获取和处理过程,详细阐述了样本制备、显微镜选择和图像处理与分析的各个步骤及其注意事项,为成像技术的初学者提供重要的参考依据,以便能合理利用显微成像技术获得可靠的实验数据,科学地展示论文插图。

冷冻电镜平台3+X运行模式的探索与思考

冷冻电镜技术已成为生命科学领域研究结构和功能的重要技术手段,冷冻电镜平台的建设给高校和科研院所的学科发展带来新的突破口。现以浙江大学冷冻电镜中心的建设与运行为例,阐述了冷冻电镜平台的仪器架构和3+X创新运行模式,剖析了运行中存在的问题,提出了相应对策,旨在探索冷冻电镜平台高效、良性的运行机制和管理模式。

漆酶介体系统对孔雀绿的脱色研究

研究了漆酶介体系统对代表性三苯甲烷类染料孔雀绿的脱色处理。漆酶介体系统对孔雀绿的脱色效率比单独使用漆酶要高出10倍。高浓度的孔雀绿对漆酶介体系统的脱色效率有抑制作用,最适的pH值和温度分别在4.2和32°C左右。介体浓度的提高可促进脱色率的增加,但高浓度的介体会抑制脱色效率。漆酶和漆酶介体系统对孔雀绿的脱色机制上存在不同,前者的作用机制为脱甲基反应,而后者的脱色机制为自由基介导的聚合反应。

露湿漆斑菌胆红素氧化酶的分离纯化及其性质

露湿漆斑菌产生的胆红素氧化酶粗酶液通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-100纯化,得到纯化152.54倍胆红素氧化酶,得率19.14%;用PAGE检测为单一条带,活性电泳证实该单一蛋白质组分为胆红素氧化酶,SDS-PAGE证明该酶的相对分子质量为64000。该酶最适反应温度为55℃,以胆红素为底物时最适pH值为7.5,而以ABTS为底物时最适pH值为4,该酶在pH 3-8之间都能够检测到酶活。以胆红素为底物,胆红素氧化酶的Km值和Vmax分别为552.06μmol/L和38.91μmol/（L.min）;而以ABTSA为底物,胆红素氧化酶的Km值和Vmax分别为631.84μmol/L和12.79μmol/（L.min）。

响应面法优化白腐菌Pleurotus ostreatus降解六氯苯

采用响应面法优化白腐菌侧耳属菌株(Pleurotus ostreatus)降解六氯苯(HCB)的条件。结果表明,对HCB降解率影响显著性较大的是摇床转速和pH。在摇床转速125r/min、pH为7.0、培养温度为28℃、HCB初始质量浓度为10mg/L、接种量为5%(体积分数)、培养时间为2d的优化条件下,HCB降解率和降解速率分别为92.73%和2.318mg/(L.d)。

白腐菌Trametes hirsute对六氯苯的降解及其条件优化

在液体体系下,筛选了5株白腐菌,对六氯苯进行了降解研究,并优化了白腐菌Trametes hirsute TH对六氯苯的降解条件.结果表明,不同白腐菌均能降解六氯苯,其中白腐菌Trametes sp. TR对六氯苯降解率最高,达90.21%;而白腐菌T.hirsuteTH对六氯苯降解率为87.08%,但生物量最高,达3.33g/L.通过响应面法优化白腐菌T. hirsute TH降解六氯苯的条件,结果显示,转速、接种量和培养时间是影响六氯苯降解的主要因素.优化后的最佳条件为:转速125r/min,菌丝接种量8%(V/V),培养时间2d,温度28℃,pH为7.在优化条件下,2d内白腐菌T. hirsute TH对浓度为10mg/L的六氯苯降解率和降解量分别可达91.52%和2.288mgL-1d-1.

木质纤维素水提物促进白腐菌降解孔雀绿研究

对经白腐菌处理的木质纤维素水提物能否促进白腐菌对孔雀绿的降解及其反应机制进行了研究,并探讨了不同木质纤维素组分对白腐菌降解孔雀绿的影响。结果表明,经白腐菌处理不同时间的木质纤维素水提物均能促进白腐菌对孔雀绿的降解,该类物质的加入能缩短白腐菌生长周期及漆酶分泌周期;限氮培养基更有利于白腐菌对孔雀绿的脱色,半纤维素的加入对白腐菌降解孔雀绿的促进作用最为明显。

倒置激光共聚焦显微镜的共享使用与维护

为给科研人员和仪器管理者提供系统、直观的激光共聚焦显微镜的使用与维护方法,介绍了Olympus倒置激光共聚焦显微镜与活细胞工作站(IX81-FV1000)的配置、软硬件组成和技术参数,样品制备要求,单光子、活细胞图像采集常用操作规程,共享成效、日常维护和管理等方面。浙江大学医学院公共技术平台的倒置激光共聚焦显微镜实行开放共享,近三年来使用率高,共享效果好。根据仪器使用经验总结出了一些获得高分辨率图像的方法,供大家探讨。

AMPA受体的磷酸化与突触可塑性

突触可塑性在学习记忆中发挥了重要作用,AMPA(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionic acid,AMPA)受体功能和运输的调节是突触可塑性机制研究的重要环节。在突触可塑性发生过程中,激酶和磷酸酶能够调节AMPA受体C末端的磷酸化水平,进而影响AMPA受体运输。对于AMPA受体磷酸化的研究能够加深我们对突触可塑性机制的理解。

基于激光共聚焦同步双扫描技术的LC3脱乙酰化修饰调控自噬的机理研究

激光共聚焦同步双扫描(simultaneous,SIM)技术在常规扫描单元的基础上,引入一个同步扫描单元(SIM scanner),该技术独立控制了两个激光束,一个用于激光光刺激,另一个用于同步成像。本实验中,采用激光共聚焦同步双扫描系统的405 nm和488 nm激光分别对细胞的特定部位进行刺激和同步成像,实时检测了LC3复合物的形成,记录并分析了乙酰化前后LC3的光动力学变化过程,证实了LC3的脱乙酰化修饰是自噬性降解所必须的,本实验体系为激光共聚焦双扫描技术的推广提供了一个很好的平台。SIM技术的应用,解决了刺激过程无法成像的问题,为漂白后荧光恢复(fluorescence recovery after photobleaching,FRAP)、漂白后荧光损失(fluorescence loss in photobleaching,FLIP)和光诱导激活等研究提供了最佳的解决方案,可作为光刺激的一种实验模式在很多实验设计中进行延伸应用。

单颗粒冷冻电镜技术在核糖体抗生素耐药机理研究中的应用

抗生素是现代医学的基础,随着抗生素在临床上广泛长期应用,细菌的耐药性日益显著,已成为人类健康的威胁。核糖体负责翻译遗传信息合成细胞中的所有蛋白质,是抗生素的主要靶点之一。本文从显微结构层次对核糖体抗生素的耐药性机理进行了总结,论述了核糖体基因突变,核糖体修饰及核糖体的保护机制导致细菌耐药性产生的分子机理,展望了未来冷冻电镜显微技术在揭示核糖体抗生素耐药性机理研究中的作用和前景。

TOC检测方法HTY-CT1000A型总有机碳分析仪浅谈

近些年以来,TOC检测手段正在逐渐受到有关部门的关注。与传统检测手段相比,TOC方法具备更加突显的清洁性以及实效性,针对检测结果也能保证其符合精准性的指标。在当前的实践中,通过运用总有机碳的HTY-CT1000A型分析仪可以获得精确度较高的TOC检测结论,在此前提下全面突显了TOC检测方法具备的价值与意义。

细胞大型内吞囊泡快速标记方法的改进和应用

为了研究细胞内大型内吞囊泡的快速动态变化,本文借鉴了诱导神经元轴突诱导转向的方法,通过脉冲压力从微电极释放诱导因子,在细胞周围形成稳定的浓度梯度,诱导细胞产生胞饮泡,并通过局部染料释放进行快速标记和洗脱。同时利用活细胞成像技术,对胞饮泡标记过程以及标记后胞饮泡动态变化进行实时记录。该方法大大缩短了标记和洗脱的时间,从而实现了对细胞囊泡的快速标记和同步观察记录,可用于胞饮泡、溶酶体等细胞囊泡的动态标记和观察,是研究细胞大型内吞囊泡动态变化的一种实用且高效的手段。