露湿漆斑菌产生的胆红素氧化酶粗酶液通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-100纯化,得到纯化152.54倍胆红素氧化酶,得率19.14%;用PAGE检测为单一条带,活性电泳证实该单一蛋白质组分为胆红素氧化酶,SDS-PAGE证明该酶...露湿漆斑菌产生的胆红素氧化酶粗酶液通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-100纯化,得到纯化152.54倍胆红素氧化酶,得率19.14%;用PAGE检测为单一条带,活性电泳证实该单一蛋白质组分为胆红素氧化酶,SDS-PAGE证明该酶的相对分子质量为64000。该酶最适反应温度为55℃,以胆红素为底物时最适pH值为7.5,而以ABTS为底物时最适pH值为4,该酶在pH 3-8之间都能够检测到酶活。以胆红素为底物,胆红素氧化酶的Km值和Vmax分别为552.06μmol/L和38.91μmol/(L.min);而以ABTSA为底物,胆红素氧化酶的Km值和Vmax分别为631.84μmol/L和12.79μmol/(L.min)。展开更多
激光共聚焦同步双扫描(simultaneous,SIM)技术在常规扫描单元的基础上,引入一个同步扫描单元(SIM scanner),该技术独立控制了两个激光束,一个用于激光光刺激,另一个用于同步成像。本实验中,采用激光共聚焦同步双扫描系统的405 nm和488 n...激光共聚焦同步双扫描(simultaneous,SIM)技术在常规扫描单元的基础上,引入一个同步扫描单元(SIM scanner),该技术独立控制了两个激光束,一个用于激光光刺激,另一个用于同步成像。本实验中,采用激光共聚焦同步双扫描系统的405 nm和488 nm激光分别对细胞的特定部位进行刺激和同步成像,实时检测了LC3复合物的形成,记录并分析了乙酰化前后LC3的光动力学变化过程,证实了LC3的脱乙酰化修饰是自噬性降解所必须的,本实验体系为激光共聚焦双扫描技术的推广提供了一个很好的平台。SIM技术的应用,解决了刺激过程无法成像的问题,为漂白后荧光恢复(fluorescence recovery after photobleaching,FRAP)、漂白后荧光损失(fluorescence loss in photobleaching,FLIP)和光诱导激活等研究提供了最佳的解决方案,可作为光刺激的一种实验模式在很多实验设计中进行延伸应用。展开更多
文摘露湿漆斑菌产生的胆红素氧化酶粗酶液通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-100纯化,得到纯化152.54倍胆红素氧化酶,得率19.14%;用PAGE检测为单一条带,活性电泳证实该单一蛋白质组分为胆红素氧化酶,SDS-PAGE证明该酶的相对分子质量为64000。该酶最适反应温度为55℃,以胆红素为底物时最适pH值为7.5,而以ABTS为底物时最适pH值为4,该酶在pH 3-8之间都能够检测到酶活。以胆红素为底物,胆红素氧化酶的Km值和Vmax分别为552.06μmol/L和38.91μmol/(L.min);而以ABTSA为底物,胆红素氧化酶的Km值和Vmax分别为631.84μmol/L和12.79μmol/(L.min)。
文摘激光共聚焦同步双扫描(simultaneous,SIM)技术在常规扫描单元的基础上,引入一个同步扫描单元(SIM scanner),该技术独立控制了两个激光束,一个用于激光光刺激,另一个用于同步成像。本实验中,采用激光共聚焦同步双扫描系统的405 nm和488 nm激光分别对细胞的特定部位进行刺激和同步成像,实时检测了LC3复合物的形成,记录并分析了乙酰化前后LC3的光动力学变化过程,证实了LC3的脱乙酰化修饰是自噬性降解所必须的,本实验体系为激光共聚焦双扫描技术的推广提供了一个很好的平台。SIM技术的应用,解决了刺激过程无法成像的问题,为漂白后荧光恢复(fluorescence recovery after photobleaching,FRAP)、漂白后荧光损失(fluorescence loss in photobleaching,FLIP)和光诱导激活等研究提供了最佳的解决方案,可作为光刺激的一种实验模式在很多实验设计中进行延伸应用。
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