Livin基因为靶向的RNA干扰技术对宫颈癌SiHa细胞的化疗增敏作用

目的:研究凋亡抑制基因Livin为靶向的RNA干扰技术(RNAi)对增加人宫颈癌细胞系SiHa化疗敏感性的作用及价值。方法:用已经构建好的针对Livin基因的短发夹RNA真核表达载体(shLivin),转染宫颈癌SiHa细胞,分为空白对照组(SiHa组)、SiHa-shLivin组和转染空载体的SiHa-shVector组。选用顺铂、紫杉醇、多柔比星作为化疗药物,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测加药后3组细胞的增殖情况,得出半数抑制浓度(IC50)值,用流式细胞术检测3组细胞在shLivinIC50的凋亡率进行比较。结果:shLivin重组质粒稳定转染SiHa细胞后,SiHa-shLivin组对顺铂、紫杉醇、多柔比星的IC50值明显低于SiHa组和SiHa-shVector组,差异有高度统计学意义(P<0.001),SiHa组与SiHa-shVector组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。用shLivinIC50药物浓度处理细胞,SiHa-shLivin组凋亡率明显高于SiHa-shVector组和SiHa组,差异有高度统计学意义(P<0.001),Si-Ha组与SiHa-shVector组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:以Livin基因为靶向的RNA干扰技术可增加化疗药物的敏感性,作为宫颈癌细胞化疗增敏的分子靶点,其基因沉默有望成为宫颈癌基因治疗新手段。

观赏植物花芽分化研究进展

花芽分化是有花植物发育中最为关键的阶段,同时也是一个复杂的形态建成过程。简要综述了植物花芽分化过程中形态结构、外部因子与内部因子的影响,以及花芽分化中花转变的顺序和基因对成花的作用,并对观赏植物花芽分化的展望与问题做了概述和探讨。

水生植物在园林景观中的应用

我国素有世界“园林之母”的称誉，在园林中，水景又是园林的灵魂，而水生植物才是衬托水景的重要花卉。在景观上它可以美化水面，打破水面的宁静，为水面增添情趣，使水面景致生动活泼，还可以充实美化水陆交接带，给水岸线带来清新怡人的自然景观和四季分明的季相。在生态功能上更有着无与伦比的优越性，除了具有一般陆生植物的生态功能外，最重要的是还可以改善水质。

非洲菊的AFLP指纹图谱构建

以非洲菊的嫩叶、老叶为材料,用改进后的CTAB—FREE洗涤法、CTAB法均获得HMW基因组DNA;CTAB—FREE洗涤法提取的DNA纯度较高,其操作简单,并能有效地将非洲菊老叶中富含的酚类、多糖类物质去除,使得提取出DNA纯度、浓度都合符AFLP分析要求,取材也最方便;本研究还获得了非洲菊的清晰AFLP指纹图谱,为非洲菊的相关研究提供参考。

非洲菊SRAP标记的DNA模板制备及反应体系优化

为获得非洲菊清晰的SRAP标记图谱,对非洲菊DNA的提取方法及其SRAP-PCR反应体系的影响因子进行了初步探讨,建立了扩增多态性高、重复性好、带型清晰的DNA模板和SRAP-PCR反应体系.最佳SPAR-PCR反应体系:在50μL的反应总体系中,Mg2+2.0mmol/L,dNTPs0.3mmol/L,DNA模板100ng,DNA聚合酶2.0U,上游、下游引物各0.22mmol/L.扩增程序:在94℃预变性4min,反应前5个循环在94℃变性1min,35℃复性1min,72℃延伸1min的条件下运行,随后的30个循环复性温度提高到55℃,最后72℃延伸5min.

红花檵木SRAP反应体系的建立及优化

为了获得红花檵木清晰的SRAP标记图谱,对红花檵木DNA的提取方法以及SRAP-PCR反应体系的影响因子进行了初步探讨,筛选和建立了扩增多态性高、重复性好、带型清晰的DNA模板和SRAP-PCR反应体系,同时提出了应用SRAP分子标记构建红花檵木遗传图谱的可行性.最佳SPAR-PCR反应体系为:在50μL的反应体系中,Mg2+1.6 mmol/μL,dNTPs 1.0 mmol/μL,DNA模板150 ng,DNA聚合酶3.6 U,上下引物各0.20 mmol/L.扩增程序为:94℃预变性4 min,反应前5个循环在94℃1 min、35℃1 min、72℃1 min条件下运行,随后的30个循环复性温度提高到55℃,最后72℃延伸5 min.

红花檵木种质资源研究与利用

红花檵木为湖南特有野生资源,回顾了红花檵木种质资源研究利用的历史,简述了红花檵木的种质资源、生态习性、形态特点、细胞学及生物学特征、栽培管理与利用等方面的研究,对其研究与利用前景进行了展望,提出加快红花檵木研究的迫切性.

观赏植物分子标记研究进展

分子标记是继形态学标记、细胞学标记和生化标记之后发展起来的一种新的遗传标记。简要综述了分子标记技术在观赏植物种质资源遗传多样性评价、种质鉴定、亲缘关系的演化及分类、系谱分析、遗传图谱构建、基因定位、分子标记辅助选择育种等领域的研究进展,探讨了分子标记在观赏植物遗传育种上存在的问题。

抑制卵巢癌A2780/Taxol细胞hsa-miR-27a表达对紫杉醇敏感性影响的研究

目的:研究抑制卵巢癌A2780/Taxol细胞hsa-miR-27a表达对紫杉醇敏感性的影响。方法:用浓度递增法建立卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol;Stem-loop real-time PCR技术检测A2780/Taxol及亲本细胞A2780中hsa-miR-27a表达水平;利用脂质体Lipofectamine2000将化学合成的miR-27a抑制物及阴性对照(Negative Control,NC)转染A2780/Taxol细胞;分别用Real-time PCR和蛋白印迹法技术检测MDR1mRNA和P-glyco-protein(P-gp)蛋白表达;MTT检测A2780/Taxol对紫杉醇敏感性的变化;流式细胞术检测细胞内P-gp荧光底物罗丹明123(Rh-123)的荧光强度。结果:(1)成功建立了卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol;(2)miR-27a在A2780/Taxol细胞中高表达,与A2780细胞相比,表达增高2.2倍。(3)P-gp蛋白在A2780/Taxol细胞中高表达,在A2780细胞中未检测出其表达;(4)转染miR-27a抑制物后,A2780/Taxol细胞的MDR1mRNA和P-gp表达下降,与转染NC组相比,P-gp表达降低36%;对紫杉醇的敏感性增加,IC50为0.53μmol/L,与转染NC组IC506.8μmol/L相比,有明显差异;(5)流式细胞仪结果显示,细胞内Rh-123荧光强度在转染抑制物的A2780/Taxol细胞为5.10±0.35,与A2780/Taxol细胞的2.95±0.39和转染NC的A2780/Taxol细胞的3.30±0.45相比,差异均有统计学意义。结论:hsa-miR-27a在卵巢癌耐紫杉醇A2780/Taxol细胞中高表达,可能通过间接调节P-gp的表达和功能,参与耐药。抑制miR-27a表达后,可以增加A2780/Taxol细胞对紫杉醇的敏感性,部分逆转耐药。

干旱胁迫对4个红檵木品种渗透调节物质含量的影响

对土壤干旱胁迫下4个红檵木品种的游离脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白的含量和叶片相对含水量的变化进行了研究。结果表明,红檵木叶片含有较高的含水量,在土壤干旱胁迫的情况下,叶片相对含水量呈下降趋势,脯氨酸和可溶性糖总体呈上升趋势,其中,脯氨酸先下降后上升。可溶性蛋白质含量的变化与干旱胁迫呈负相关。

红檵木组织培养玻璃化苗发生原因初探

通过在培养基中加入不同质量浓度6-BA、NAA、蔗糖、琼脂、活性碳并进行正交试验,得出影响红檵木玻璃化苗发生的因素及其影响力大小顺序为6-BA>活性碳>琼脂>NAA>蔗糖。6-BA的质量浓度大于2 mg/L,会大大增加玻璃化苗的产生。考虑到增殖率,应适当加入少量活性碳或聚乙烯醇。此外,减少继代次数,选择中部节段作为外植体,也有利于玻璃化率的降低。

EZH2 shRNA真核表达载体的构建及其在卵巢癌A2780细胞系的稳定表达

目的采用基因工程技术,构建EZH2 shRNA的真核表达载体,获得稳定表达干扰质粒的卵巢癌A2780细胞系。方法合成特异性干扰EZH2的shRNA片段并定向克隆插入Supersilencing shRNA质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo,获得表达载体pGPU6/GFP/Neo-shEZH2。脂质体介导重组质粒转染A2780细胞,经G418加压筛选获得稳定转染细胞株,Real time RT-PCR和Western blot检测转染后细胞系EZH2的表达。结果测序结果证实重组载体构建成功,稳定转染shEZH2的A2780细胞EZH2的mRNA和蛋白水平下降(90.20±1.66)%和(73.80±5.49)%,P<0.01,差异有统计学意义。结论成功构建EZH2 shRNA表达载体,获得EZH2基因稳定沉默的A2780细胞系,为进一步研究以EZH2为靶点的卵巢癌治疗奠定实验基础。

室内观赏植物种类选择及其日常养护

随着我国人民生活的改善，室内栽植观赏植物已成为人们普遍的喜好。室内环境是一个相对密封的体系，与外界的气体交换较少，空气流动小，可以避免外部有害气体对植物产生危害；而且室内温度较外界温度变化小，多恒定在15-25℃有利于植物生长。但很多植物都会产生浓郁的气味，在室内达到一定浓度会使人感觉不适；并且墙体的遮挡使得室内的光照程度也有不同，所以在室内摆放植物必须满足植物对阳光的要求。

观赏灵芝菌株的筛选研究

以6个灵芝菌株为试验材料,观测各自生长特点,比较其菌丝体生长速度,颜色,分枝情况、孢子生长多少、菌柄长度、产量高低,筛选出最适合用于灵芝观赏性栽培的灵芝种类。结果表明:美国大灵芝菌丝生长速度最快,母种培养基上只需3d就可长满试管,菌丝长满瓶的天数为20d,子实体培养天数为31.5d。6个菌株的鲜产量以美国大灵芝产量最高,甜芝最低,两者差异显著,菌柄差异,朵形,分枝,孢子少,存在明显的差异。作为观赏灵芝栽培品种,美国大灵芝和甜芝明显地优于其它几个菌株。

非洲菊组织培养研究进展

综述了近年来非洲菊组织培养的研究进展,包括外植体选择与灭菌,愈伤组织的诱导分化,试管苗继代培养,生根培养和驯化移栽等方面;总结了目前非洲菊组织培养过程中主要存在的问题,以及多效唑(PP333)、La3+、封口膜对非洲菊组织培养的影响;指出了非洲菊组织培养中值得继续深入研究的方面。

22234例子宫颈高危型HPV感染及亚型分布研究

目的:分析17种型别的高危型人乳头瘤病毒(HPV)在22234例子宫颈癌筛查中的感染率及亚型分布特点。方法:回顾性分析2018年1月1日至2019年1月1日22234例于华中科技大学同济医学院附属协和医院行子宫颈癌筛查患者高危型HPV感染率及感染亚型。结果:22234例接受子宫颈癌筛查患者中,一种或以上高危型HPV阳性者3574例(16.1%),其中HPV16或(和)HPV18阳性者703例(3.2%)。在3574例高危型HPV阳性女性中,最常见的高危HPV感染是HPV52(24.4%),其次为HPV58(16.5%)、HPV16(14.0%)、HPV53(12.6%)和HPV39(8.6%)。与HPV16阴性患者相比,在HPV16阳性的患者中,除HPV31、HPV35、HPV45、HPV26和HPV82以外的12种高危型HPV的感染风险均显著降低约2~5倍(OR 0.169~0.530,P<0.05);与HPV18阴性患者相比,HPV18阳性的患者中HPV16、HPV33、HPV39、HPV51、HPV52、HPV58和HPV53的感染风险均显著下降(P<0.05)。结论:女性高危型HPV感染率较高,最常见的高危型HPV是HPV52和HPV58感染,并且HPV16、18感染对多个其他型别高危型HPV感染有保护作用。

宫颈癌筛查人群中的高危型人乳头状瘤病毒阴性宫颈病变

目的研究筛查人群中高危人乳头状瘤病毒(hrHPV)阴性宫颈病变的发生率,并基于此初步评估HPV初筛相对于联合筛查可能的伤害(漏诊)和获益(减少阴道镜转诊),为宫颈癌初筛方式的选择提供参考。方法本研究为单中心横断面研究。纳入2018年1月1日至2019年12月31日于华中科技大学同济医学院附属协和医院行联合筛查[hrHPV分型检测加宫颈液基细胞学检查(LCT)]的宫颈癌筛查女性,分析该人群中hrHPV阴性的细胞学异常及宫颈病变所占比例,并计算联合筛查和HPV初筛方案的理论阴道镜转诊率。在有宫颈病理结果的人群中计算两种筛查方案诊断一例宫颈上皮内瘤变2级及以上病变(CIN2+)所需的阴道镜检人次数。结果共纳入35321例筛查女性。人群总体hrHPV感染、LCT异常与LCT重度异常的发生率分别为17.13%(6051/35321)、18.07%(6384/35321)与3.97%(1402/35321)。宫颈细胞学重度异常女性中hrHPV阴性率高达51.28%(719/1402),宫颈活检诊断的CIN2+病变中hrHPV阴性者占7.15%(49/685)。联合筛查和HPV初筛的理论阴道镜转诊率分别为11.28%(3985/35321)和8.33%(2943/35321),平均诊断一例CIN2+分别需要3.51和2.81人次阴道镜检。结论在机会性筛查人群中,hrHPV阴性CIN2+病变比例不容忽视,而HPV初筛策略可能造成这些病变的漏诊,但相对于联合筛查,HPV初筛有提高阴道镜检效率的潜能。这些结果提示我们应该谨慎选择HPV初筛方案。

Livin基因短发夹状RNA对子宫颈癌Siha细胞增殖迁移的影响

Livin基因作为近年来发现的一种人类凋亡抑制蛋白（inhibitorofapoptosisprotein，IAP），低表达于健康成人组织和胚胎组织中，而高表达于包括黑色素瘤、淋巴瘤、结肠癌、前列腺癌、宫颈癌、乳腺癌等^[1-3]多种类型的肿瘤组织中。