柴胡疏肝散中色氨酸-2,3-双加氧酶抑制剂的筛选及抗抑郁药效研究

目的筛选柴胡疏肝散中抑制色氨酸-2,3-双加氧酶(tryptophan-2,3-dioxygenase,TDO)表达的活性组分,探寻其抗抑郁药效作用。方法双荧光素酶报告基因法检测化合物对TDO表达的影响;分子对接虚拟评价化合物与TDO的结合能力,TDO过表达人肝癌HepG2细胞株检测其抑制活性;制备柴胡疏肝散各单味药的含药血清,验证抑制TDO的显效药味;将吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)过表达慢病毒感染人源结肠癌Caco-2细胞,检测活性组分的IDO抑制活性。采用三联一复合应激法构建抑郁样小鼠模型,通过行为学观察、LC-MS/MS检测血浆中犬尿氨酸含量、Western blotting和qRT-PCR检测TDO、IDO表达等技术评价活性组分的抗抑郁作用。结果双荧光素酶报告基因法筛选出芍药苷、橙皮苷、辛弗林、刺芒柄花苷均可抑制TDO表达(P<0.05、0.01);分子对接发现上述4种化合物对TDO有亲和性;过表达细胞株证实芍药苷可抑制TDO和IDO的表达(P<0.01、0.001),刺芒柄花苷选择性抑制TDO表达(P<0.001);抑郁样小鼠在给予芍药苷、刺芒柄花苷或两药联用后,糖水偏嗜显著升高(P<0.001),悬尾不动时间明显减少(P<0.001),游泳不动时间明显减少(P<0.05、0.001),自主活动显著增多,TDO表达明显降低(P<0.05、0.01),血中犬尿氨酸含量显著减少(P<0.05)。结论芍药苷和刺芒柄花苷均可通过抑制TDO表达发挥抗抑郁作用。