ACMG基因变异分类指南在聋病遗传咨询临床教学中的应用

遗传咨询在聋病的病因学诊断与决策中起到越来越重要的作用。随着高通量基因测序技术的发展,越来越多临床医生提出了基因检测的需求,并期待通过基因结果为患者进行病因学诊断和临床精准分型。医生对于基因检测报告的准确解读是进行临床决策的关键,但现有的遗传咨询和基因学诊断还存在脱节现象。美国医学遗传学与基因组学学会(The American College of Medical Genetics and Genomics, ACMG)制定了关于序列变异解读的系列指南,为聋病基因诊断和遗传咨询提供了重要的依据,尤其是在聋病遗传咨询的临床教学中,应用ACMG指南(2015)与具体聋病遗传咨询的案例结合示教,有助于耳科医师了解基因变异的常规分类原则,并对基因测序结果与聋病表型异质性进行合理的分析和解释,从而帮助其有效开展聋病遗传咨询工作。

胚胎植入前遗传学诊断应用于SLC26A4致聋突变家庭的临床研究

目的研究携带SLC26A4致病基因突变的家庭中,胚胎植入前遗传学诊断(PGD)技术在帮助实现孕育听力正常后代、阻断耳聋基因垂直传递中的效果。方法采用单细胞全基因组扩增技术(MALBAC)、高通量测序技术及SNP分型技术,对5组夫妻双方均携带SLC26A4基因已知致病突变的家庭进行胚胎植入前遗传学诊断,挑选健康胚胎进行移植,在孕中期行羊水穿刺产前诊断基因型,新生儿出生后进行听力筛查。结果5组家庭中,3组家庭经PGD成功受孕,其中家庭1、家庭2已生育听力正常的新生儿,家庭4仍在妊娠期;家庭3经一次PGD形成的胚胎均携带耳聋基因,后选择自然受孕,经产前诊断检测胎儿基因型为单杂合突变携带;家庭5经促排卵后未成功排卵而退出研究。结论1.对于明确致病基因的家庭,PGD技术能够阻断耳聋基因的垂直传播,帮助生育健康胎儿;2.如果女方高龄,由于卵巢储备逐渐下降、对外源性促性腺激素的反应能力下降等原因,在PGD过程中失败风险高。

应用第三代测序技术检测Y连锁遗传性耳聋家系的复杂重组结构研究

目的 研究Y连锁遗传性耳聋家系患者的Y染色体上存在的复杂重组结构的插入片段及断点。方法应用第三代测序技术中的Nanopore技术,对Y连锁遗传性耳聋家系中1名先证者及家系外正常男性进行测序,并将测序结果对比分析,研究此复杂重组结构各插入片段在正常男性中的存在情况。结果 通过Nanopore技术检测,发现先证者Y染色体Yp11.2区存在一段长约793kb的复杂重组结构,由9段1号染色体及Y染色体不相连片段组成。通过对比分析,证明在正常男性中不存在此复杂重组结构。结论 第三代测序技术能够凭借其长读长的特点跨越染色体重复区域断点,对Y染色体的复杂拷贝数变异区域进行测序。

手持式超声仪测量硬膜外腔深度的准确性研究

目的评估在硬膜外麻醉中手持式超声仪(Accuro)测量硬膜外腔深度与传统阻力消失法测量硬膜外腔深度的一致性。方法收集2019年6月1日-7月31日于解放军总医院第一医学中心行急诊剖宫产手术的产妇40例。所有产妇均采用硬膜外麻醉方法进行麻醉。首先用手持式超声仪测量其硬膜外腔深度(Accuro depth,AD),然后用阻力消失法进行硬膜外穿刺,同时使用穿刺针测量穿刺的实测深度(needle depth,ND)。采用配对样本t检验、Pearson法以及Altman-Bland法对手持式超声仪的测量深度与实测穿刺深度的一致性和相关性进行分析。结果手持式超声仪测得的硬膜外腔平均深度为(4.23±0.73)cm,实际穿刺测得的平均深度为(4.70±0.96)cm。配对样本t检验显示,ND与AD的差值为(0.56±0.09)cm,二组差异有统计学意义(P<0.05);Person相关性分析显示,AD与ND的相关系数0.808(P<0.05),二者具有较强的相关性;Bland-Altman一致性分析显示,有5.13%(2/39)的点在95%CI范围以外,表明AD与ND的一致性较高(94.87%,P<0.05)。结论手持式超声仪预测所得的硬膜外腔深度与实测穿刺深度具有较好的相关性与一致性,可以用来指导硬膜外麻醉。

比较瑞芬太尼预处理不同麻醉方式下胸腔镜手术患者单肺通气的血流动力学和镇痛效果

目的比较瑞芬太尼预处理静脉与吸入麻醉方式下胸腔镜手术患者单肺通气的血流动力学和镇痛效果。方法选取2017年6月-2019年6月本中心胸外科收治的行胸腔镜下肺叶切除术患者72例,按照麻醉维持方式及插管前是否使用瑞芬太尼分为四组,两组为静脉麻醉组,分别为丙泊酚组(P1),瑞芬太尼+丙泊酚组(P2);另两组为吸入麻醉组,分别为七氟烷组(S1),瑞芬太尼+七氟烷组(S2)。收集患者的一般情况和手术情况,比较四组患者在诱导前(T1)、诱导后(T2)、切皮后(T3)、单肺通气后(T4)及缝皮时(T5)的血流动力学变化,分析患者术后呼吸恢复时间、睁眼时间、拔管时间、躁动例数和术后视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)。结果四组患者的一般情况无差异,手术时间、单肺通气时间、术中出血量和尿量亦无统计学差异(P>0.05)。麻醉诱导前四组患者动脉收缩压(systolic blood pressure,SBP)、动脉舒张压(diastolic blood pressure,DBP)、平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)、心率(heart rate,HR)差异均无统计学意义(P>0.05)。P2组诱导后T2时间点DBP与MAP显著低于同时间点P1组(P<0.05),T3时间点SBP、MAP、HR显著低于同时间点P1组(P<0.05),T4及T5时间点SBP、HR显著低于同时间点P1组(P<0.05);S2组在T2时间点SBP、DBP、MAP、HR显著低于同时间点S1组(P<0.05),T3、T4及T5时间点SBP、MAP、HR显著低于同时间点S1组(P<0.05);P2、S2组血流动力学指标在不同时间点变化较小。P2组术后呼吸恢复时间、睁眼时间、拔管时间均显著低于P1组(P<0.05),S2组术后呼吸恢复时间、拔管时间显著低于S1组(P<0.05)。P2、S2组的术后VAS评分分别显著低于P1、S1组(P<0.05)。结论瑞芬太尼预处理能够维持静脉和吸入麻醉下胸腔镜手术患者单肺通气血流动力学的稳定,缩短术后恢复时间,增强镇痛效果,安全有效。

突发性聋合并家族性高脂血症1例

高脂血症是指血脂水平过高,临床表现主要是脂质在血管内皮沉积所引起的动脉硬化。脂代谢异常与突发性聋之间的关系尚不明确。本文报道的1例突发性聋合并家族性高胆固醇血症患者。纯音测听提示单耳中频感音性听力损失,实验室检查提示脂代谢异常,基因检测提示APOA5基因杂合突变。诊断为突发性聋;高脂血症,药物治疗效果良好。本文旨在分析总结脂代谢异常与突发性聋可能存在的联系。

双侧突发性聋169例临床特征及疗效分析

目的分析双侧突发性聋(bilateral sudden sensorineural hearing loss,BSSHL)患者的临床特征及疗效。方法回顾性总结解放军总医院第一医学中心169例(338耳)BSSHL患者临床资料,对其人口学特征、发病诱因、伴随症状及伴发疾病、听力学特征、实验室检查结果进行统计描述,并对其疗效及影响因素、预后情况进行统计分析。结果50.9%(86/169)患者至少存在一种诱因,其中上呼吸道感染(23/169)、劳累(23/169)最为多见;伴随症状中耳鸣(150/169,88.8%)、眩晕(100/169,59.2%)较高,伴发疾病中高血压(49/169,29.0%)、糖尿病(23/169,13.6%)较为常见。听力损失类型多为全频受累,平坦型和全聋型占83.1%(281/338耳);听力损失程度以全聋型最多见(86/338耳),重度及以上占60.1%(203/338耳)。治疗总有效率仅29.0%,病程≤14 d、14 d<病程≤30 d患者有效率分别为39.5%和25.5%,病程>30 d者有效率为3.6%,差异有统计学意义(χ^(2)=13.776,P<0.01);不同类型的听力曲线治疗有效率差异有统计学意义(χ^(2)=14.782,P<0.01);比较28例BSSHL患者入院至出院和出院至随访的听力提高值,发现左-250 Hz、左-500 Hz、右-125 Hz、右-250 Hz、右-500 Hz处,两组听力提高值差异有统计学上意义(Z值分别为-2.495、-3.083、-3.970、-3.388、-3.264,P值均<0.05)。患者血清IgE升高比例远高于健康人群。结论BSSHL患者听力损失严重,更多患者伴耳鸣、眩晕,疗效欠佳,发病30 d内就诊疗效优于30 d后就诊;对低频范围内听力损失,住院治疗听力提高更显著;且BSSHL的发生可能存在免疫机制。

携带线粒体DNA致病突变家庭的聋病遗传咨询特征分析

目的分析携带线粒体DNA致病突变家庭的聋病遗传咨询特征及其临床意义。方法“中国聋病基因组计划(CDGP)”项目中以“聋病遗传咨询”为主诉家庭,采用靶向捕获技术对线粒体基因组、聋病相关核基因进行高通量测序,排除了明确已知耳聋核基因突变后筛选出携带线粒体DNA致病突变的首诊个体,对其进行家系资料收集、绘制家系图谱,完善相关人员听力学检测及家系内候选基因变异的验证分析。结果在513个咨询家庭中共发现20个明确携带线粒体DNA致病变异家庭,首诊个体中有16例耳聋先证者和4例无症状咨询者,分别携带MT-RNR1、MT-TS1和MT-TL1三个基因的9种突变:m.1095T>C、m.1310C>T、m.1494C>T、m.1555A>G、m.3243A>G、m.7445A>G、m.7505T>C、m.7510T>C和m.7511T>C。MT-RNR1和MT-TS1基因以同质突变为主,MT-TL1基因为异质突变,先证者以中度以上的斜坡型或平坦型感音神经性听力损失为主,也有显著的表型异质性,其中m.7445A>G同质突变患者听力呈明显进行性下降,m.7505T>C同质突变听力损失呈谷型,携带m.1095T>C个体的聋病外显率较低,携带m.3243A>G异质突变的患者可表现为非综合征型耳聋或糖尿病伴耳聋综合征。结论携带线粒体DNA致病突变个体及其母系家庭成员发生耳聋的风险较高,但携带者的发病年龄、听力损失程度及外显率等存在显著差异,在遗传咨询中需要明确排除核基因可疑致病变异并分析携带者的线粒体DNA突变比例,同时完善首诊个体及其母系家庭人员的听力检测,以咨询家庭为单位进行线粒体突变表型-基因型特征分析,有利于线粒体耳聋遗传咨询个性化的临床决策。

Y连锁遗传性耳聋与Y染色体测序研究进展

Y连锁遗传性耳聋家系的发现,使遗传性耳聋的遗传方式涵盖了全部孟德尔单基因病的遗传方式,为Y染色体的结构和功能研究展开了一个新的画面。作为男性性别决定的染色体,Y染色体大部分区域可以逃脱基因交换作用,从而存在大量的重复序列。这使得研究Y连锁遗传性耳聋的致病机制、重复序列的存在意义、Y染色体的生物学功能,困难重重。本文回顾了Y连锁遗传性耳聋家系的研究进展、Y染色体的功能以及长读长测序技术对Y染色体测序的可能发现,以期为Y连锁遗传性耳聋的研究提供思路与参考。

KCNQ4基因新突变耳聋患者的基因型表型相关性分析及遗传咨询

目的:对KCNQ4基因新突变耳聋患者进行基因型表型相关性分析,为患者及家庭提供精准的遗传咨询。方法:纳入1807956(5代34人)和1707806(3代12人)两个耳聋大家系,应用二代测序技术检测先证者致病基因,并对家系内成员进行Sanger测序验证。根据美国医学遗传学与基因组学会(ACMG)指南,结合临床资料、基因检测、生物信息分析、电生理实验等对突变位点进行致病性分析,为患者提供遗传咨询。结果:1807956家系先证者为育龄女性,15岁发病,携带KCNQ4 c.808T>G p.Y270D变异,双耳极重度听力下降,中频听力下降更为明显;1707806家系先证者为青少年,11岁发病,携带KCNQ4 c.733G>A p.G245R变异,双耳中重度听力下降,以高频为主。两个家系每一代均有患者,患者无性别差异,双亲之一也为患者,符合常染色体显性遗传发病特点。两个变异均为错义突变,在家系中共分离,正常人群中无分布。生物信息分析工具预测变异有害,变异位点在不同物种中高度保守,电生理实验提示变异离子通道功能受损。根据ACMG指南,判定KCNQ4 c.808T>G变异为致病的,KCNQ4 c.733G>A变异为可能致病的。结论:新发现的两个突变位点为国际首次报道,患者听力下降特点具有异质性,丰富了KCNQ4基因变异谱及临床表型,为患者及家庭提供了可靠的遗传咨询。