禽用双价禽流感病毒重组疫苗使用后广东省高致病性H7N9病例调查分析

目的调查分析禽用双价禽流感病毒重组疫苗使用后2017-2019年流行季广东省高致病性H7N9病例流行病学特征,探索可能的感染来源,为制定防控措施提供依据。方法对H7N9确诊病例基本情况、密切接触者和感染来源进行流行病学调查,采集相关标本进行实验室检测,并应用描述性流行病学方法进行分析。结果 2017-2019年流行季广东省报告1例人感染高致病性H7N9禽流感病例,患者发病前有明确的活禽暴露史,病家自养活禽和禽舍环境标本均检出H7亚型禽流感病毒核酸阳性标本,未发现人与人之间传播病例。报告的唯一确诊病例通过自养活禽暴露的可能性大。结论禽用双价禽流感病毒重组疫苗使用后2017-2019年流行季广东省高致病性H7N9病例较往年同期大幅下降。饲养者个人防护不足是导致该病例发病的主要原因。继续做好禽只的免疫接种,持续推进活禽的规范化养殖,是减少禽间疫情和人类感染的重要措施。

补充维生素A对接种麻疹疫苗的学龄儿童IgG抗体水平的影响

目的:探讨补充维生素A(VA)对强化接种麻疹疫苗的学龄儿童产生的麻疹IgG抗体的影响。方法:选珠三角地区某市山区105名小学生,其中53名为补充组,另52名年龄、性别相匹配的儿童作为对照组,两组均接种麻疹疫苗,补充组儿童在接种疫苗的当天开始服用VA(2500IU/d),连续口服1个月,应用高效液相色谱(HPLC)法测定补充前后和对照组血清中VA含量。用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法测定接种前后麻疹特异性IgG抗体。结果:补充组血清中VA显著升高,为376.5±74.2μg/L,两组接种麻疹疫苗一个月后,VA补充组抗体阳性率由69.8%上升至100.0%,保护率由5.6%上升至60.4%;对照组阳性率由71.2%上升至100.0%,保护率由0%上升为17.4%。麻疹免疫之后,两组的抗体阳性率都大大升高,但VA补充组的保护率比对照组升高明显。结论:补充维生素A对接种麻疹疫苗的学龄儿童(特别是缺乏VA的儿童)所产生的抗体水平升高起到明显的促进作用。

中山市2007—2014年1型登革病毒E基因分子特征分析

目的分离、鉴定中山市2007—2014年1型登革病毒并获得E基因序列,从分子水平分析其系统进化和地域来源情况,了解该病毒各年份的流行性质。方法收集中山市2007—2014年登革热患者急性期血清,接种C6/36细胞分离登革病毒,应用RT-PCR技术扩增病毒的包膜蛋白E基因全长,并对序列进行系统进化和同源性分析。结果共分离到登革1型病毒流行株25株,参考国际标准株E基因序列将其分为GⅠ型和GⅤ型2个基因型。其中2007年3株,2012年3株,2013年3株,2014年7株聚集在GⅠ型中,2014年9株聚集在GⅤ型中。中山2014年登革病毒GⅠ型流行株与中山市2007年、2012年、2013年流行株E基因核苷酸(氨基酸)序列相似度分别为98.25%(99.40%)、98.18%(99.80%)、99.73%(100.00%),与珠三角2014年广州、珠海输入中山株的氨基酸序列相似度为100.00%;中山市2013年登革病毒GⅠ型流行株与广州、佛山的2013年流行株E基因核苷酸(氨基酸)序列相似度分别为99.67%(100.00%)、99.74%(100.00%)。结论 2007—2014年中山市流行的登革1型病毒有2个基因型(GⅠ型和GⅤ型)。2014年GⅤ型可能由国外输入,GⅠ型中2007年和2012年为国外输入株,2013年及2014年流行株E基因序列相似度高,2014年的登革流行可能与2013年流行株本地化有关。

中山市高一年级学生血脂水平分析

目的了解中山市高一年级学生的血脂水平,为青少年预防和控制血脂异常提供科学依据。方法整群随机抽取中山市4所学校的高一年级学生691名,进行空腹血脂水平检测,检测项目包括TC,TG,LDL-C,HDL-C。结果TC,LDL-C,HDL-C水平女生均高于男生,差异有统计学意义(P值均<0.05);TC,LDL-C异常率女生均高于男生,差异有统计学意义(P值均<0.05)。不同年龄高中生TC,TG,LDL-C水平差异均无统计学意义(P值均>0.05)。LDL-C水平城区学生高于镇区学生,差异有统计学意义;HDL-C水平镇区学生高于城区学生,差异有统计学意义(P值均<0.05);TC,TG,LDL-C,HDL-C异常率城区均高于镇区,但差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论女生和城区学生的血脂水平和血脂异常率较高。应加强营养知识宣传教育,改正不良饮食习惯,降低成年后心血管疾病发生的危险性。

广东省中山市中学生血脂水平的正常参考值调查

目的:通过对中山市14～16岁中学生的血脂水平调查,为该群体提供血脂水平正常参考值范围。方法:于2006年随机抽取14～16岁在读高一学生687名,按性别分组,空腹采血3ml,分离血清,应用HITACHI7170A全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC),三酰甘油(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。以第5～90百分位数估计TC、TG、LDL-C正常参考值范围。以第5百分位数作为HDL-C的参考范围下限。结果:687名中学生血脂水平呈正偏态分布。男生TC、TG、LDL-C的第5百分位数分别为2.78、0.50、1.16mmol/L,第90百分位数分别为4.51、1.68、2.57mmol/L,HDL-C的第5百分位数为0.89mmol/L。女生TC、TG、LDL-C的第5百分位数分别为3.12、0.54、1.37mmol/L,第90百分位数分别为5.24、1.69、3.13mmol/L,HDL-C的第5百分位数为1.06mmol/L。结论:男生TC、TG、LDL-C的参考范围分别为2.78～4.51,0.50～1.68,1.16～2.57mmol/L,HDL-C的参考范围为>0.89mmol/L。女生TC、TG、LDL-C的参考范围分别为3.12～5.24,0.54～1.69,1.37～3.13mmol/L,HDL-C的参考范围为>1.06mmol/L。

新型冠状病毒IgM/IgG胶体金试剂应用情况分析

目的评价新型冠状病毒血清学IgM/IgG胶体金试剂与核酸检测试剂的一致性。方法收集整理2020年3月3日至5月26日中山市出院健康随诊的确诊病例(或无症状感染者)和集中隔离观察期间的密切接触者的检测信息和流行病学信息。结果242人385人次完成血清学检测。出院后第7天、第14天和第3个月开展了血清学检测的确诊病中,IgG阳性率分别为100.0%(12/12)、94.7%(36/38)和77.8%(21/27);10例无症状感染者,出院后14 d,IgG阳性率为80%(8/10);178例核酸检测阴性的密切接触者,IgG阴性率为98.9%(176/178)。除1例确诊病例发生IgG阳性到阴性转化外,其余人群IgG和核酸检测符合率为95.9%(231/241)(Kappa=0.889,P=0.334)。结论新型冠状病毒IgM/IgG胶体金试剂中IgG和核酸检测结果的一致性较好;但新型冠状病毒感染1个月后,随着时间延长,IgG阳性率有降低的趋势。

中山市流行性脑脊髓膜炎流行特征分析

目的 对中山市2004-2005年流行性脑脊髓膜炎病例进行流行病学的分析，为预防和控制流行性脑脊髓膜炎提供科学的依据。方法 采用统一个案调查表，对辖区内流行性脑脊髓膜炎病例进行调查，并采集脑脊液用乳胶凝集法进行特异性抗原的检测，采集咽拭子标本进行细菌的培养；用Excel录入每例个案资料，运用描述流行病学方法对病例进行综合分析。结果 全市报告8例流行性脑脊髓膜炎散发病例，其中1例为输入性病例，余均为本地感染病例，散发于该市4个镇区，除1例为本市籍的患者外，余均为外来流动人员；脑膜炎奈瑟菌特异性抗原的检测均为阳性，血清分型以A群为主，同时发现A＋B群、B群和C群。结论 应加强冬春季卫生知识的宣传教育，特别是预防流行性脑脊髓膜炎知识的教育，加强菌群监测及疫情预测预报，切实做好流脑多糖体菌苗的预防接种和应急免疫工作，定期在外来人员和易感者中开展流脑疫苗的接种。

中山市寄宿高一学生早餐行为及血糖血红蛋白含量调查

目的了解中山市寄宿制高中生的早餐行为及空腹血糖和血红蛋白含量,为学生健康教育提供科学依据。方法采用整群抽样方法,抽取中山市4所寄宿制学校735名高一学生进行问卷调查,并进行血糖和血红蛋白检测。结果4所学校学生每天进食早餐的比例为80.27,女生显著高于男生(P<0.01),镇区显著高于城区(P<0.01);高中生早餐的种类比较单一,女生早餐质量显著优于男生(P<0.01)。高中生血糖水平为(4.59±0.46)mmol/L,学生发生低血糖的比例较低;高中生血红蛋白平均水平为(143.90±15.20)g/L,贫血率女生显著高于男生(P<0.01),城区学生显著高于镇区学生(P<0.01)。结论应加强学生早餐行为的健康教育,尤其是男生和城区学生,有效避免学生低血糖的发生,降低贫血率。

中山市某合资企业员工血尿酸水平调查分析

目的了解中山市企业员工血尿酸水平及高尿酸血症患病情况。方法采用职业健康体检，调查该企业1019名在职员工的血尿酸水平及高尿酸血症的患病情况。结果总体血尿酸平均水平为365．17μmol／L，男性为393．70μmol／L，女性为304．79μmol／L。高尿酸血症总体患病率为30．4%其中男性34．4％，女性22．0％。各年龄段血尿酸水平在性别之间除50岁以上无显著差别外（P〉0．05），其他均存在显著差异（P〈0．05）。男性的血尿酸水平在不同年龄段之间不存在显著差异（P〉0．05），女性则存在显著差异（P〈0．05）。结论中山市该合资企业员工血尿酸水平及高尿酸血症患病率较国内其他地区以往的调查结果高，表明血尿酸水平处于上升趋势，高尿酸血症患病率也在升高，逐渐成为一种临床较为常见的疾病，应引起社会及疾病预防控制机构的高度关注。各年龄段除了50岁以上在性别之间不存在显著差异之外，其他各年龄段均存在显著差异；男性的血尿酸水平在不同年龄段之间不存在显著差异，女性则存在显著差异。

不同核酸检测试剂盒检测环境样本禽流感病毒H5亚型的效果比较

目的 比较3种厂家检测禽流感病毒H5亚型的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)试剂对环境标本的检测效果。方法 采用3个不同厂家的核酸检测试剂盒检测活禽市场环境样本中的H5亚型禽流感病毒,比较不同试剂检测结果检出率的差异,使用TA克隆技术,将扩增产物连接到克隆载体上并测序分析,获得反应产物的序列。结果 3种检测试剂中,试剂盒C检测H5的检出率比A高(18.3%vs. 8.4%),差异有统计学意义(χ^(2)=5.440,P=0.039)。对扩增产物片段序列进行分析发现,试剂A对标本核酸的H5扩增产物与KU042758.1序列的相似度最高,为100.00%,试剂C对标本核酸的H5扩增产物与CY091635.1序列的相似度最高,为97.92%,两者无明显的相似区域。结论 试剂C比试剂A对该批临床样本中H5的检出率更高,检出率的差异可能与不同试剂靶序列不一致以及试剂引物与样本核酸的匹配度有关。

2019—2021年中山市副溶血弧菌食物中毒分离株的病原特征分析

目的了解中山市2019—2021年副溶血弧菌食物中毒分离株的病原学特征。方法收集中山市2019—2021年8起食物中毒事件分离的37株副溶血弧菌,包含1株剩余食物分离株,36株人源分离株。通过血清学分型、毒力基因检测(tlh、tdh、trh)、药敏试验、脉冲场凝胶电泳(PFGE)以及多位点序列分型(MLST)进行分析本地区副溶血弧菌食物中毒分离株的遗传相关性。结果37株副溶血弧菌共分为4个血清型,分别是O3∶K6、O10∶K4、O4∶K8、O4∶KUT;tdh+、trh-为主要毒力基因型占97.30%(36/37),头孢唑林耐药率较高为40.54%(15株R,22株I),未发现多重耐药菌株。37株副溶血弧菌分为23个PFGE型别,6个聚类群,相关系数在60.4%~100%。共分为9个ST型别,3个复合群,其中以ST3型为主(23株,62.16%)。结论研究发现本市2019—2021年副溶血弧菌食物中毒分离株的优势毒力型为tdh+、trh-,37株代表株可分为6个PFGE聚类群,9个型别,以ST3型为主。此研究发现其罕见血清型O10∶K4,该血清型引起食物中毒的事件有占比增加,提示要加强检测,警惕新的罕见血清型菌株在本地持续流行的风险。

2010-2013年中山市流感病毒(H3N2)血凝素基因特征分析

目的研究中山市2010-2013年流行的H3N2亚型流感病毒的血凝素基因特征,分析其基因变异情况。方法选取2010-2013年中山市流行的H3N2亚型流感病毒6株,用MDCK细胞分离病毒,提取病毒RNA,RT-PCR扩增HA基因并测定序列,利用BLASTn对序列进行相似性检索,分析其与疫苗株,不同年份、区域流行株的进化变异情况。结果共分离鉴定到6株H3N2亚型流感病毒,其中2株为2010年流行株,2株为2012年流行株,2株为2013年流行株。各年流行株与其他国家或地区当年大部分流行株在一个分支上,其进化距离随着进化时间变长而变远。2012年流行株相对2010年流行株在HA1区发生12个氨基酸位点变异,有3个位于B、C区。2013年流行株相对2012年流行株发生4个氨基酸位点变异,有2个位于A区。2012年、2013年流行株相对于疫苗株分别发生6、8个氨基酸位点变异,分别有2、4个位于A、B、C区。受体结合位点未发生变异。结论中山市H3N2亚型流感病毒流行株在年度之间存在一定程度变异,进化距离随着进化时间变长而变远,相对于疫苗株也存在一定程度上的变异。

C6/36细胞系分离登革1型病毒的方法学探讨

目的应用C6/36细胞系3种细胞分离方法分离血清中登革1型病毒并探讨其分离效率。方法采用血清预稀释法,将已鉴定为登革I型病毒的阳性血清作10^-1-10^-10等10个10倍梯度稀释并接种于长满单层C6/36细胞的培养管;采用共培养法,将血清作50至6400等8个梯度倍比稀释,再加等体积C6/36细胞悬液作共培养;采用直接接种法,将25μl、50μl、100μl、150μl、200μl血清接种于长满单层C6/36细胞的培养管。连续7d,每天观察细胞生长情况,收获细胞分离液并提取核酸,然后采用Real-time PCR检测其CT值。结果血清标本呈登革I型病毒阳性,CT值为26.3;血清预稀释法与共培养法均未发现由血清毒性引发的非特异性细胞病变,除了10^-10稀释度呈弱阳性外,其余稀释度的CT值均在11-15之间。直接接种法中25μl、50μl接种量培养管未发现由血清毒性引起明显的非特异性细胞病变,检测其CT值约为19,100μl、150μl、200μl接种量的细胞第2d就因血清毒性完全被破坏。结论3种方法都能成功分离登革1型病毒,降低血清对细胞的干扰作用能提高分离效率。

广东省中山市登革Ⅰ型病毒的分离鉴定及E/NS1基因序列分析

目的分离鉴定中山市2007年及2012年流行的登革病毒，从分子水平分析其地域来源和系统进化情况。方法用C6／36细胞分离10份2007年登革病毒特异性IgM抗体阳性血清和4份2012年登革病毒核酸阳性血清中的病毒，采用Realtime—PCR对毒株进行血清型鉴定，RT—PCR扩增毒株E／NSl基因并进行序列测定，分析其与不同区域流行株和国际标准株的同源性和系统进化情况。结果共分离鉴定到6株登革I型病毒，其中2株为2007年流行株，4株为2012年流行株，分别命名为2007ZSDenguel-2和2012ZSDenguel-4。2012ZSDenguel-2与柬埔寨、越南等东南亚国家近年流行的登革I型毒株相似性高（大于99．0％），进化距离最短（0．011～0．012）。2012ZSDengue3—4，2007Z—SDenguel-2与广东省珠海市2007年流行和新加坡、日本、泰国等亚洲国家近年流行的登革I型毒株相似性高（大于99．0％），进化距离最短（0．007～0．024）。中山流行株与登革I型国际标准株、非洲和美洲流行株相似性在90．0％～94．0％之间，进化距离较远（0．065--0．108）；与登革Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型国际标准株NGC、I-187、I-t241相似性约为68．0％、66．0％、71．0％，进化距离最远（0．369--0．505）。结论中山市2007年及2012年流行株为登革I型病毒，可能属于东南亚国家输入性毒株，但输入源头有所不同。

一株人感染H9N2禽流感病毒高通量测序及序列分析

目的对一株人感染H9N2禽流感病毒进行高通量测序（next—generationsequencing，NGS）分析，探讨其在人群流行的可能性。方法应用高通量测序技术进行全基因组序列测定（wholegenomesequencing，WGS）。对8个基因进行相似性检索，构建系统进化树并分析其关键位点的分子特征。结果8个基因与GenBank基因库相似度最高序列的来源不完全一致，系统进化树显示HA基因属于欧亚系I群，M基因位于G1-like分支，PB2位于G9-like分支，NA位于一独立分支，PBl，PA，NP，NS均位于SH／F／98-like分支。HA基因裂解位点为PSRSSR／GLF，226位受体结合位点为L。除M2基因$31N突变之外，NA基因茎63～65位缺失，PA和PB2基因未发生L336M和Q591R，E627K等可以增强病毒对哺乳动物适应性的突变，但发现可以增强病毒毒力的突变如M1基因N30D和T215A，PB2基因L89V，NSl基因P42S。除M2基因S31N突变外，NA基因和M2基因的药物结合位点未发生E119G，R152K，H274Y，R292K和L26F，V27A，A30T，G34E等耐药性突变。HA和NA糖基化位点预测结果都有8个糖基化位点，其中分别有7个和5个可靠程度较高。结论该H9N2禽流感病毒的大部分关键性位点较保守，只有少部分位点发生一定程度进化与变异，在人群引起流行的可能性不大，但需加强分子方面动态监测。

Real-timePCR技术在呼吸道病毒检测中的应用与分析

呼吸道感染疾病是危害人类健康的重大疾病，在感染性疾病的死亡原因里排首位。研究表明，急性呼吸道感染90％以上由病毒引起，引起呼吸道感染的病毒主要有流感病毒A型和B型（FluA、FtuB），腺病毒（ADV），博卡病毒（BOV），鼻病毒（hRV），呼吸道合胞病毒（RSV），

应用芯片式数字PCR检测人血清中登革病毒载量

目的建立芯片式数字PCR绝对定量技术,用于登革病例血清中登革病毒载量绝对定量并分析载量变化情况。方法选取发病1~7d登革实验室确诊病例血清样本,提取病毒RNA并逆转录为cDNA,取3μL或4.5μL cDNA,配制15μL反应体系,采用QuantStudio 3D Digital PCR Chip Loader仪器制作芯片,将芯片置于Dual Flat Block GeneAmp PCR System 9700运行PCR,最后在QuantStudio TM 3D Digital PCR System中读取结果并应用QuantStudio^ TM 3D AnalysisSuite TM Software进行分析,根据实验稀释倍数计算血清中登革病毒载量。结果芯片制作良好,有效孔数高,检测结果重复性较好,示病例发病第1~7d血清中的登革病毒载量分别是10^7.646 ,10^7.544 ,10^7.298 ,10^6.990 ,10^5.823 ,10^4.732 ,10^4.221 copies/mL。结论应用芯片式数字PCR检测血清中登革病毒载量的方法可行,可应用于登革病毒载量的绝对定量。登革病毒载量随着病程的发展而降低。

免核酸提取Real-time PCR技术在细胞分离病毒快速鉴定中的应用

目的探讨应用免核酸提取Real-time PCR技术直接对细胞培养液进行检测鉴定,判断成功分离病毒的可行性。方法应用C6/36细胞和MDCK细胞分别对登革病毒和甲型H3亚型流感病毒进行病毒分离培养,应用Real-timePCR技术分别对经提取的核酸溶液和细胞培养液进行目标病原体检测,判断是否成功分离病毒。结果登革病毒和甲型H3亚型流感病毒细胞培养液经核酸提取后进行Real-time PCR检测,检测结果CT值范围分别为12.0~14.6和8.5~9.8,病毒培养液直接检测结果范围分别为18.5~21.2和10.1~12.8,定性结果完全一致。结论免核酸提取Real-timePCR技术可直接对细胞培养液进行病毒核酸检测,判断是否成功分离病毒。

不同脊髓灰质炎疫苗免疫程序基础免疫后的血清学反应

目的比较不同脊髓灰质炎(简称脊灰)疫苗免疫程序基础免疫后的血清学反应。方法选择广东省中山市居住的无疫苗接种禁忌的健康婴儿,在其2、3、4月龄时各接种1剂脊灰灭活疫苗(inactivated poliovirus vaccine,IPV)或口服脊灰疫苗(oral polio vaccine,OPV),按照接种程序的不同,将观察对象分为全程OPV组(O-O-O)、全程IPV组(II-I)、1剂IPV+2剂OPV组(I-O-O)、2剂IPV+1剂OPV组(I-I-O)。基础免疫完成后1个月时采集静脉血,以微量中和试验测定血清中脊灰病毒中和抗体。结果 3剂疫苗免疫后,除I-O-O组1份血清标本Ⅲ型抗体为阴性外,其余标本均产生了针对3个型别脊灰病毒的中和抗体。与I-I-I组比较,I-O-O组和I-I-O组产生了更高的抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT),除与I-O-O组的Ⅲ型抗体GMT差异无统计学意义(P>0.05)外,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.001);与O-O-O组比较,除I-I-O组的Ⅰ型抗体GMT较低外(P<0.001),I-O-O组和I-I-O组均获得了相近(P>0.05)或更高(P<0.05)的抗体GMT;I-I-O组Ⅰ型中和抗体GMT明显低于I-O-O组(P<0.05),Ⅱ型和Ⅲ型中和抗体GMT高于I-O-O组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IPV/OPV序贯免疫可提供与全程OPV免疫相似或更高的针对脊灰的免疫保护;为减少OPV相关脊灰同时维持高水平的免疫屏障,推荐采用I-I-O序贯程序。

2013-2017年中山市20起诺如病毒暴发疫情的分子流行病学特征分析

目的分析2013-2017年间中山市诺如病毒暴发疫情的分子流行病学特征,为中山市诺如病毒感染疫情防控提供分子生物学实验依据。方法收集2013-2017年间中山市20起诺如病毒引起的感染性腹泻暴发疫情病例标本,采用RT-PCR方法测定诺如病毒VP1基因全序列,并对序列进行系统发育分析。结果 20起诺如病毒引起的感染性腹泻暴发主要发生在幼儿园及小学,占疫情总数的80.0%(16/20)。获得了77株病毒的VP1基因全序列, 20起疫情分别由GII.4 Sydney2012(25.0%, 5/20),GII.3(25.0%, 5/20),GII.17(25.0%, 5/20),GII.2(15.0%, 3/20),GII.21(5.0%, 1/20),及GII.6(5.0%,1/20)亚型引起,5起暴发中GII.4 Sydney2012分为两个不同分支。结论 GII.17型为中山市新发现流行毒株,2016年底发现的两起GII.4 Sydney2012区别于以往出现GII.4 Sydney2012,可能为新亚型的重组毒株(GII.P16-GII.4 Sydney2012)。VP1基因序列分析可作为有效的诺如病毒分型工具, RdRp基因分析应作为重要补充以确定毒株的重组变异情况。