γ-干扰素对姜黄素抑制HL-60细胞增殖的影响

目的 :为研究在姜黄素作用下 ,基因重组干扰素γ(rh IFN γ)对白血病细胞杀伤能力的影响。方法 :选用HL 6 0细胞系 ,采用细胞培养、SABC法测定Brdu摄取率、流式细胞仪检测及末端TdT酶标技术。结果 :发现姜黄素抑制细胞增殖作用随浓度增加而逐渐增加 ,在 2 5 μmol/L浓度体外处理HL 6 0细胞 2 4小时后 ,增殖抑制率为 43 75 %± 2 0 0 % ,IFN γ使这种作用明显提高 ,增殖抑制率增至 80 %。进一步分析Brdu摄取率和DNA含量分布图时发现姜黄素使细胞阻滞于G1 /G0 和G2 /M期 ,同时出现亚 G1 峰 (凋亡峰 )。IFN γ与姜黄素联用后 ,DNA合成率进一步下降 ,与两药单用组的结果相比有明显的差异 (P <0 0 5 )。同时 ,亚 G1 峰值也增高 ,同步的末端TdT酶标技术也反映联用组的凋亡细胞数与亚 G1 峰值呈一致变化。结论 :IFN

姜黄素在急性髓性白血病HL-60细胞中对凋亡调控蛋白Bax、Bak、Mcl-1的影响

为了探讨姜黄素在诱导急性髓性白血病 HL- 6 0细胞凋亡时 ,Bcl- 2基因家族成员是否参与了其调控过程。选用 Bcl- 2基因家族成员 Mcl- 1、Bax、Bak蛋白为研究对象 ,SABC法检测其表达状况 ;用流式细胞术测定 DNA直方图中 Sub- G1 峰值、末端 Td T酶标技术检测 TUNEL 细胞阳性率。发现当 2 5 μmol/ L 姜黄素分别处理 HL- 6 0细胞 2 4h、 36h、 48h后 ,可使 Mcl- 1表达下调 ,Bax和 Bak上调 ,呈时间依赖性。在各处理组 ,Mcl- 1、 Bax、 Bak表达同对照组相比有显著差异 (F值分别为 3.44 3、 8.32 8;P值分别为 0 .0 40、 0 .0 0 1)。结果表明 :Bcl- 2基因家族成员确实参与了姜黄素诱导 HL- 6

沉默HIF-1α基因表达对大鼠肝癌细胞增殖的影响

目的:探讨沉默缺氧诱导因子1α(HIF-1α)基因表达对缺氧状态下肝癌细胞增殖的影响。方法:选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钴(CoCl2)建立缺氧模型。制备3组特异性较强的HIF-1αsiRNA-脂质体复合物,转染于肝癌细胞。利用real-time RT-PCR、Western blotting等方法分别检测肝癌细胞HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、p21和cyclin D1在mRNA和(或)蛋白水平的表达。MTT及BrdU掺入实验检测细胞增殖的变化。结果:缺氧条件下,肝癌细胞的HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达显著增多(P<0.05)。HIF-1α基因表达沉默后,HIF-1α、VEGF及cyclin D1 mRNA和(或)蛋白表达明显减少(P<0.05),p21蛋白表达明显增加(P<0.05)。HIF-1αsiRNA转染组的BrdU阳性细胞比例明显少于对照组(P<0.05)。结论:沉默HIF-1α基因表达对缺氧状态下肝癌细胞的增殖有显著抑制作用。

ICU病房嗜麦芽窄食单胞菌的耐药性分析和金属酶检测

目的分析某医院ICU病房分离的嗜麦芽窄食单胞菌耐药谱特点及产金属酶情况。方法采用琼脂二倍稀释法进行药物敏感性试验,应用纸片协同试验筛选产金属酶菌株,应用随机扩增DNA多态性分析(RAPD)技术进行DNA分型。结果该院ICU病房分离嗜麦芽窄食单胞菌对临床常用13种抗菌药物的敏感率由高到低依次为加替沙星90.0%、左氧氟沙星83.3%、复方磺胺甲恶唑66.7%、环丙沙星63.3%、替卡西林/棒酸60.0%、哌拉西林/三唑巴坦40.0%、头孢哌酮/舒巴坦36.7%、头孢他啶30.0%、阿米卡星23.3%、头孢噻肟13.3%、头孢曲松10.0%,所有菌株对亚胺培南和氨曲南均耐药。纸片协同试验阳性菌株6株,均来源于同一克隆。结论该院ICU病房分离的嗜麦芽窄食单胞菌对临床常用的多种抗菌药物耐药,敏感率较高的有新氟喹诺酮类、复方磺胺甲恶唑和替卡西林/棒酸;产金属酶菌株的流行主要是医院感染所致,流行株呈多重耐药。

姜黄素对急性髓性白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响

为了探讨姜黄素对白血病细胞的杀灭能力， 运用细胞培养、流式细胞仪和末端ＴｄＴ酶标记技术系统研究其药理作用和方式。结果发现， 姜黄素能选择性抑制急性髓性白血病细胞ＨＬ－６０ 的增殖， 呈时间与剂量依赖曲线， 姜黄素体外抑制ＨＬ－６０ 细胞２４ ｈ 达到最大峰值。亚Ｇ１ 凋亡峰出现在１２ ｈ 后，并随时间延长而逐步增加，２４ ｈ 可达３４．４％ 。用末端ＴｄＴ酶标记法进一步证实凋亡的细胞数在同一时相可达到４１％ 。结果提示： 姜黄素有明确的抗白血病细胞增殖的能力， 其作用机理是诱导细胞凋亡， 体外浓度和作用时间可作为其进一步临床运用的参考。

姜黄素对HL—60细胞周期的影响及对比研究

目的:探讨姜黄素抑制HL—60细胞增殖的机理.方法:选用HL—60细胞系,采用细胞培养,NBT还原率测定,SABC法测定BrdU摄取率,流式细胞仪检测细胞内DNA含量和原位末端TdT酶标技术,结果:姜黄素以时间、剂量依赖方式抑制HL—60细胞的增殖.在25umol/L浓度处理HL—60细胞48h,细胞增殖抑制率达60.71±1.20%,进一步分析BrdU摄取率、DNA含量分布图和NBT还原率时发现姜黄素优先使细胞阻滞于G_2/M期,随后使细胞阻滞于G_1期,整个细胞周期进程减缓,DNA合成活动受抑,阻滞细胞随之发生凋亡,而并非走向分化 同时将姜黄素对细胞周期的调控作用与VP—16、As_2O-3的结果进行比较,姜黄素调控HL—60细胞周期的能力强于As_2O_3,其作用点与VP—16也不尽完全相同,因而不存在着与后二者交叉耐药的可能性.结论:姜黄素具有一定程度调节HL—60细胞G_2/M期转换和G_1/S期转换检测点的能力,通过干扰HL—60细胞的细胞周期,诱发细胞凋亡.

G1/S检测点调控与癌变

细胞周期G1/S期转换受G1/s检测点的调控,其功能由周期素D、E、A及相应的CDKs和CKIs综合作用所决定。检测点功能的正常发挥保证了机体细胞有序地增殖及遗传信息的稳定。相反,其功能的失控使细胞积累突变,最终致肿瘤的生成。如何调整肿瘤细胞的检测点功能则是近期肿瘤治疗的热点。

如何做一名合格研究生

研究生阶段主要侧重培养学生严谨的学术素养、实践技能和创造性解决问题的能力。目前相当一部分研究生对自己在学习中的主体地位缺乏明确的认识,没有切实明白读研期间到底应该掌握哪些技能,学习什么?本文结合实际生活存在的一些问题,总结自己的体会简明介绍读研期间应注意的要点,就关于如何做一名合格的研究生提出自己的几点意见。

血液系统肿瘤中的人类错配修复系统

人类错配修复 (mismatchrepair ,MMR)系统由MutH ,MutL和MutS三大家族的蛋白组成。它们修正核苷酸摄取错误、增强DNA复制忠实性、降低基因的自发突变率、维持着微卫星位点乃至整个基因组的稳定。MMR系统功能低下就有可能导致癌变发生 。

2012—2016年血液病患者血流感染病原菌分布及耐药性

目的了解血液病患者血流感染的临床特点、病原菌分布和耐药情况,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法回顾性分析2012年1月—2016年12月发生血流感染的血液病患者临床资料,包括感染部位、病原菌种类及对常用抗菌药物的耐药情况等。结果血培养阳性血流感染患者共308例,分离病原菌337株,其中革兰阳性菌119株(35.3%),主要为凝固酶阴性葡萄球菌和肠球菌属;革兰阴性菌215株(63.8%),主要为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌;真菌3株(0.9%),均为热带假丝酵母菌。血流感染患者分离菌株中革兰阴性菌所占比率逐渐增加,最高达71.6%。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和碳青霉烯类抗生素的耐药率均<20%。铜绿假单胞菌对阿米卡星、环丙沙星、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和碳青霉烯类抗生素的耐药率均<20%。主要革兰阳性菌对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺敏感率接近或达到100%,未检出耐万古霉素肠球菌(VRE)。热带假丝酵母菌对两性霉素B100%敏感。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产超广谱β-内酰胺酶菌株检出率分别为55.6%、41.2%。8株金黄色葡萄球菌中检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌5株,60株凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌检出率为86.7%。结论血液病住院患者血流感染病原菌种类较多,革兰阴性菌所占比例呈上升趋势,且多重耐药菌检出率高,应根据不同地区病原菌分布及耐药情况合理选择抗菌药物。

槲皮素调控AMPK活性诱导HL-60细胞自噬与凋亡

【目的】观察槲皮素对急性髓系白血病HL-60细胞凋亡与自噬的影响及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)活性的变化,探讨槲皮素抗白血病的分子机制。【方法】流式细胞仪、电镜、蛋白质印迹法检测槲皮素孵育HL-60细胞24、48 h后细胞凋亡与自噬的水平;检测槲皮素作用后HL-60细胞AMPK、p-AMPK的表达;流式、蛋白质印迹法检测不同浓度槲皮素与AMPK小分子抑制剂Compound C共同孵育HL-60细胞后AMPK活化的情况及细胞凋亡、自噬的变化。【结果】槲皮素可诱导HL-60细胞发生凋亡,且细胞凋亡率与槲皮素浓度、作用时间呈正相关。槲皮素浓度越大,细胞凋亡率越高(P=0.000);随着作用时间的延长,细胞凋亡率进一步增加(P=0.000);不同浓度槲皮素(25和50μmol/L)与HL-60细胞共同孵育24 h及48 h后,电镜观察到自噬体形成;绿色荧光标记自噬体后用流式细胞仪对荧光强度进行检测,结果发现槲皮素作用后细胞内绿色荧光强度明显较对照组增加(P=0.001);Western blot检测LC3Ⅱ/Ⅰ比值增高(P<0.001);证实槲皮素能够诱导HL-60细胞发生自噬。槲皮素能够浓度依赖性的激活AMPK活性,使得AMPK的磷酸化水平增高(P=0.001)。槲皮素与Compound C联合用药组与单用槲皮素组比较,p-AMPK的表达降低,Compound C能够阻断槲皮素诱导的AMPK磷酸化。槲皮素+Compound C组与单用槲皮素组比较,细胞凋亡率下降(P<0.001);抑制AMPK的活性后,槲皮素诱导细胞凋亡的作用减弱。槲皮素+Compound C组LC3Ⅱ/Ⅰ比值低于单用槲皮素组(P<0.001);抑制AMPK的活性后,槲皮素诱导细胞自噬的作用减弱。【结论】槲皮素通过诱导HL-60细胞凋亡与自噬发挥抗白血病作用,AMPK可能是槲皮素诱导细胞凋亡与自噬的重要信号分子。

HIF-1α基因沉默对大鼠肝癌CBRH-7919细胞p27和Ki67表达的影响

目的:探讨沉默缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)基因对大鼠肝癌CBRH-7919细胞在缺氧状态下p27和Ki67表达的影响。方法:选用大鼠肝癌细胞株CBRH-7919作为研究对象,利用氯化钻(CoCl2)模拟缺氧状态。构建HIF-1αsiRNA特异性载体,利用小分子RNA干扰技术沉默肝癌细胞HIF-1α基因。应用real-time RT-PCR和Western blotting方法分别检测肝癌细胞HIF-1αmRNA和蛋白的表达变化,用Western blotting方法检测肝癌细胞p27和Ki67蛋白的表达变化。应用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果:在缺氧条件下,肝癌细胞HIF-1αmRNA及蛋白表达显著增多(P<0.05)。HIF-1α基因被沉默后,HIF-1αmR-NA和蛋白表达以及Ki67蛋白表达量明显减少(P<0.05),p27蛋白表达量显著增多(P<0.05)。转染组G0/G1期的肝癌细胞数量明显多于对照组,S期细胞显著减少(P<0.05)。结论:缺氧可以诱导肝癌细胞HIF-1α的表达;特异性siRNA沉默HIF-1α,可能通过促进p27的表达和抑制Ki67的表达,在一定程度上抑制了肝癌细胞的增殖。

调节性T细胞在小鼠ITP发病中的作用

目的:探讨Treg细胞在ITP发病中的作用。方法:构建ITP小鼠模型,应用流式细胞术检测外周血及脾脏中的Treg细胞比例,应用免疫磁珠法分选出脾脏CD4+CD25+T细胞,采用RT-PCR方法测定Treg细胞相关转录因子(Foxp3,Smad7,STAT5和Akt-1)和细胞因子(IL-10,TGF-β)的mRNA表达水平。结果:与对照组相比,ITP小鼠外周血及脾脏的Treg细胞比例均显著下降(P<0.01);同时,Foxp3、IL-10,TGF-βmRNA表达水平降低(P<0.05);而Smad 7的mRNA表达水平升高。结论:Treg细胞数量及其功能下降可能是ITP免疫功能紊乱的直接原因之一,而Foxp3 mRNA低表达及Smad 7 mRNA高表达可能抑制Treg的增殖和分化,参与ITP的发生。

三氧化二砷对人肺癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人肺癌的潜在性治疗作用及可能的机制。方法 选用人肺癌细胞株GLC 82 ,运用细胞培养法、MTT法、流式细胞术 (FCM)检测细胞生长曲线、细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。结果 三氧化二砷可明显抑制GLC 82细胞的增殖 ,其抑制作用具有时—效和量—效关系。当 4.0 μmol/L三氧化二砷处理GLC 82细胞 96小时 ,增殖抑制率达 81.0 5 %。FCM检测肿瘤细胞DNA含量 ,观察到三氧化二砷使GLC 82细胞周期阻滞于G2 /M期 ,细胞周期进程变慢 ,同时出现剂量依赖性亚G1峰。结论 三氧化二砷能有效地抑制人肺癌细胞株GLC 82的增殖 ,其可能的机制与三氧化二砷使细胞阻滞于G2 /M期并诱导其凋亡有关。

特发性血小板减少性紫癜242例临床分析

目的:总结儿童和成人特发性血小板减少性紫癜(idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP)患者的临床特点。方法:对242例ITP患者的临床资料进行回顾性分析。结果:儿童ITP组,140例,男女比例为1.5∶1,急性型87例(62.1%),起病前50.7%有诱因,治疗前血红蛋白为(121±16)g/L;成人ITP组,102例,男女比例为1∶3.6,74.5%为慢性型,仅15.7%发病前有诱因,治疗前血红蛋白量为(108±30)g/L。两者的性别构成、分型、起病诱因、血红蛋白量比较有统计学意义(P<0.05)。无论儿童还是成人ITP,治疗前骨髓巨核细胞数增多者的疗效明显优于巨核细胞数正常或减少者(均为P<0.05)。随访病例中31例(78%)儿童ITP痊愈,2例(5%)成人ITP痊愈。结论:儿童ITP通常起病急、病情可自行缓解,预后好;成人ITP起病隐袭,多呈慢性经过,病情反复发作。ITP患者治疗前骨髓巨核细胞数增高者比正常或减少者疗效好,检查骨髓巨核细胞数有助于临床判断疗效。

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS对血小板释放反应的影响

【目的】观察血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)拮抗剂——四肽Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS)对血小板聚集和CD62p表达的作用,探讨RGDS对血小板聚集和释放反应的影响。【方法】检测二磷酸腺苷(ADP;终浓度5μmol/L,下同)诱导血小板聚集的最大聚集率(rPA,max)、静息血小板和ADP诱导的血小板CD62p表达,检测不同浓度RGDS对ADP诱导的rPA,max的抑制率和血小板CD62p表达的抑制率,进行回归分析。【结果】5种浓度(50、100、200、400、800μmol/L)的RGDS对rPA,max均有显著抑制作用。正常人静息血小板CD62p表达率为(3.5±0.6)%;ADP激动的血小板CD62p表达率为(65.6±13.8)%,两组比较有显著性差异(P<0.01);50、100μmol/L的RGDS对血小板CD62p表达无抑制作用;当RGDS浓度≥200μmol/L时(200、400、800μmol/L),其可抑制血小板CD62p的表达;RGDS对rPA,max的抑制作用和其对血小板CD62p表达的抑制作用相关。【结论】RGDS浓度<200μmol/L时,对ADP诱导的血小板释放反应无影响;RGDS浓度≥200μmol/L时,可抑制ADP诱导的血小板释放反应;与RGDS显著的抗聚集效应相比,其对血小板释放反应的影响比较小;RGDS抑制血小板释放反应的作用与其抗血小板聚集有关。

丙戊酸对HL-60/HT细胞P27^(Kip1)、P170表达水平及耐药性的影响

目的观察丙戊酸对白血病细胞P27Kip1、P170表达水平和耐药性的影响,探讨其可能的作用机制。方法递增压力选择培养法建立白血病耐药细胞株HL-60/HT,MTT法检测丙戊酸作用前后细胞的增殖情况及对Ara-C耐药性的改变,流式细胞术测定HL-60细胞、HL-60/HT细胞中P27Kip1、P170的表达和细胞周期。结果成功诱导培养建立耐药HL-60/HT细胞,其对HT、VCR、DNR、Ara-C的耐药倍数分别为9.30、5.20、4.91、3.65倍,耐药性能稳定。HL-60/HT细胞P27Kip1表达水平明显低于正常人单个核细胞及HL-60细胞(P<0.05),P170表达水平则明显高于正常人单个核细胞及HL-60细胞(P<0.05)。丙戊酸+Ara-C联合用药对HL-60、HL-60/HT细胞的生长抑制率明显高于单独用药的丙戊酸组和Ara-C组,q值分别为1.37和1.51,说明合用具有协同作用。丙戊酸作用于HL-60、HL-60/HT细胞后,细胞中P27Kip1表达水平、G1期细胞比加药前增加(P<0.05);P170表达水平在加药前后无明显变化(P>0.05)。结论耐药白血病HL-60/HT细胞中P27Kip1的表达低于敏感细胞HL-60,丙戊酸能抑制HL-60/HT细胞增殖,并降低其对Ara-C的耐药性。作用机制可能与改变P27Kip1的表达、增加G1期细胞含量有关,与P170作用无关。

警惕貌似春困的5类疾病

脑卒中70％～80％的缺血性脑卒中患者，在发病前一周左右，会因大脑缺血缺氧而频频出现打哈欠等犯困现象，应与春团加以区别。

SKP2 siRNA对HL-60/A细胞周期及药物敏感性的影响

【目的】观察S期激酶相关蛋白2(SKP2)siRNA转染后耐阿霉素的HL-60细胞(HL-60/A)P27kip1及多药耐药相关蛋白MRP表达水平的变化,探讨其对细胞周期及药物敏感性的影响。【方法】siRNA转染HL-60/A细胞,荧光显微镜、流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR、Western-blot检测转染后细胞SKP2、P27kip1、MRPmRNA及蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期,药物毒性分析CCK-8法检测细胞对化疗药物的敏感性。【结果】SKP2siRNA转染24h后,HL-60/A的SKP2mRNA及蛋白表达分别下调43%(P=0.020)和69.6%(P=0.003);P27kip1蛋白上调78.1%(P=0.049),P27kip1mRNA表达无明显变化;MRPmRNA及蛋白表达分别下调55%(P=0.001)和62.3%(P=0.001);G0/G1期细胞比例升高;细胞对阿霉素、柔红霉素、阿糖胞苷的敏感性分别提高1.15倍、4.79倍和3.76倍。【结论】SKP2siRNA下调HL-60/A细胞的SKP2表达可使P27kip1蛋白表达升高,细胞增殖周期延长;细胞耐药性的改善可能与MRP表达的降低有关。