Rosco纸片扩散法检测酵母样真菌的药物敏感性分析

目的了解酵母样真菌的药物敏感性。方法临床标本分离出酵母样真菌68株，采用ID32C卡结合CHROMager念珠菌显色培养基进行鉴定分型，用Rosco纸片扩散法进行药敏试验。结果68株酵母样真菌中以白色念珠菌为主，占72．1％。分离菌株对氟康唑、酮康唑、伊曲康唑、两性霉素B、5-氟胞嘧啶的敏感率分别为79.4％、83．8％、98．5％、98．5％、91．2％。结论在选用抗真菌药物之前，应进行真菌培养和药敏试验。

淋病奈瑟菌的耐药性及氟喹诺酮耐药基因突变的分析

目的了解本地区淋病奈瑟菌(NG)流行株对5种抗生素的敏感性,分析NG的耐药性特点,为淋病的治疗提供实验依据。方法纸片扩散法检测108株NG对5种抗生素的敏感性,用产色头孢硝噻吩法检测β内酰胺酶,用聚合酶链反应(PCR)扩增NGgyrA和parC基因的氟喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关序列并作测序分析。结果108株NG中检出84株对青霉素耐药(77.8%),由质粒介导的产青霉素酶NG(PPNG)为60株(55.6%);四环素耐药率为61.1%,其中质粒介导高度耐四环素NG(TRNG)为28株,占25.9%;环丙沙星耐药率为83.3%;未发现对大观霉素和头孢曲松的耐药菌株。耐氟喹诺酮的22株NG均发生gyrA基因的91、95氨基酸位点突变,原91位氨基酸全部由丝氨酸转变为苯丙氨酸,parC基因的氨基酸突变位点分别为86、87和91。结论青霉素、四环素以及氟喹诺酮类药物已不宜作为本地区治疗淋病的常规药物;大观霉素、头孢曲松可作为治疗淋病的首选药物,基因检测分析证明了NGgyrA和parC基因突变与氟喹诺酮耐药性有关。

抗PSMA全人源单链抗体制备、鉴定及初步应用

目的构建抗PSMA全人源单链抗体库,筛选抗PSMA人源单链抗体(ScFv)并鉴定,应用人源ScFv进行分子显像。方法从健康人外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人轻链和重链可变区基因,重叠PCR拼接轻重链可变区基因,构建ScFv的表达载体pDF-ScFv,电转染大肠杆菌XL1 Blue,获得噬菌体单链抗体库,酶切鉴定及测序分析,用PSMA抗原进行富集筛选,阳性克隆用Western-Blot和DNA指纹图谱鉴定。应用直接标记法将125I标记在ScFv上,通过尾静脉注入前列腺癌动物模型体内,2h后进行小动物SPECT/CT显像,观察人源ScFv对前列腺癌的定位性能。结果成功构建抗PSMA全人源单链抗体库,库容约2.16×10~8,插入片段经酶切及DNA测序证实为人抗体轻链和重链可变区基因。筛选出6株ScFv阳性克隆,Western-Blot证实6株ScFv均能与PSMA抗原特异性结合,DNA指纹图谱鉴定6株ScFv可变区基因具有多样性。动物模型的分子显像:人源ScFv能与前列腺癌PSMA抗原特异性结合,并使肿瘤显像。结论成功构建了一个全人源噬菌体单链抗体库,并筛选出了抗PSMA单链抗体,单链抗体在动物模型体内能靶向结合前列腺癌细胞,从而为前列腺癌的靶向诊断和治疗奠定了基础。

上海市普陀区1996～2003年间原发结核分枝杆菌感染的耐药性分析

目的了解我区1996～2003年间结核分枝杆菌原发耐药性.方法采用绝对浓度法进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)4种抗结核药物的耐受性测定.结果总原发耐药率由1996～1997年的14.6%上升至2002～2003年的19.7%(上升了34.9%).耐INH、SM、RFP率由1996～1997年的8.9%、9.8%、5.7%上升至2002～2003年的15.3%、10.9%、8.0%,(分别上升了71.9%、11.2%和40.4%),耐EMB率由2.4%下降至0.7%,原发耐多药率2002～2003年为5.8%,与1996年相比,无明显上升.结论本区结核分枝杆菌原发耐药性呈上升趋势,耐多药菌株仍占一定比例.