大鼠酒精性肝纤维化肝非实质细胞蛋白质组学研究

目的本文研究酒精对肝非实质细胞蛋白质表达的影响,以探讨酒精性肝纤维化的发病机制。方法大鼠酒精灌胃导致其发生肝纤维化。采用James染色法检测大鼠肝脏的病理学变化,通过Percoll密度梯度离心富集肝非实质细胞,再通过二维凝胶电泳(2DE)分离非实质细胞的蛋白质,经考马斯亮蓝(G250)染色,采用液相色谱串联质谱鉴定差异表达的蛋白质,并对部分差异蛋白质采用实时定量RT-PCR和免疫印迹的方法进行验证。对于2DE胶上的蛋白质点,采用两样本t检验的方法,对于RT-PCR分析,采用Mann-Whitney U检验进行统计分析。结果建立了酒精性肝纤维化大鼠模型,通过Percoll密度梯度离心纯化的非实质细胞中淋巴细胞、Kupffer细胞和内皮细胞分别富集了1.5、3.2和3.7倍。采用二维凝胶电泳法检测到了800多个蛋白质点,检测到具有2倍以上的差异蛋白质有26个,采用LC-MS法鉴定了21个非冗余蛋白质,对其中7个蛋白质的RT-PCR分析发现:ANXA3、CES3、ATPA和NDUFV2的mRNA水平和蛋白质组研究结果一致。结论本研究鉴定了一批与酒精性肝纤维化相关的蛋白质,可能为了解酒精性肝纤维化发病机制提供一些新线索。

LC-MS/MS法同时测定人血浆中依曲韦林、利匹韦林和地拉韦啶的浓度

目的：建立同时测定人血浆中依曲韦林、利匹韦林和地拉韦啶浓度的方法。方法：血浆样品以沉淀蛋白联合萃取的方法进行处理后,采用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法进样测定,以替米沙坦为内标,Eclipse XDB-C18为色谱柱,0.1%甲酸＋100%水-甲醇（20∶80）为流动相进行色谱分离。采用电喷雾电离源（ESI）,以多反应监测（MRM）方式进行正电荷检测,用于定量分析的依曲韦林、利匹韦林、地拉韦啶和内标检测离子对m/z分别为437.1/165.1、367.2/195.2、457.3/221.2和515.1/276.0。结果：依曲韦林、利匹韦林、地拉韦啶血药浓度分别在0.02~5μg/ml（r=0.994 2）、0.005~10μg/ml（r=0.995 6）、0.001~5μg/ml（r=0.998 0）范围内线性关系良好,定量下限可分别达20、5、1 ng/ml;各待测物的日内、日间精密度以及准确度均符合生物样品分析相关要求,RSD〈10%。血浆样品在经历3次冷冻-解冻循环、室温放置4 h和-80℃放置60 d的条件下均稳定,RSD〈15%。结论：该方法具有快速、灵敏、重复性好等特点,适用于临床测定血药浓度及药动学研究。