贝母瓜蒌散抑制炎症反应改善脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的机制研究

目的:基于网络药理学和脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤模型探究贝母瓜蒌散干预急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的抗炎作用。方法:通过中医药系统药理学数据库和分析平台,以生物利用度和药物相似性为条件筛选贝母瓜蒌散活性成分和作用靶点;在GeneCards数据库获取ALI相关靶基因。通过STRING平台构建化合物靶点-ALI靶基因相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,运用Cytoscape 3.8.0软件构建药材-成分-靶点-通路网络,利用Metascape平台进行基因本体(gene ontology,GO)分析,应用通路数据库Reactome进行信号通路富集分析,预测其分子机制。通过贝母瓜蒌散对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的干预实验,对潜在靶点和通路进行验证。结果:获得贝母瓜蒌散活性成分44个、靶点606个,与ALI有关共同靶点258个。GO功能富集分析发现,贝母瓜蒌散对ALI的作用主要涉及激酶活性的正调控、受体复合物、蛋白激酶活性等过程;通路富集分析指出,贝母瓜蒌散可能从调控白细胞介素信号、白介素-4和白介素-13的信号、免疫系统中的细胞因子信号传递等信号通路发挥治疗作用。HE染色及胶原纤维阳性染色结果显示,贝母瓜蒌散能改善肺损伤;qPCR结果显示,贝母瓜蒌散能下调小鼠肺组织IL-1α、IL-2、IL6、IL-10、TNF-αmRNA表达。结论:贝母瓜蒌散可能通过抑制促炎细胞因子表达发挥治疗ALI的作用。

千层纸素A调控胆碱能抗炎通路抑制结核分枝杆菌致巨噬细胞焦亡

目的探讨千层纸素A(oroxylin A,OrA)对结核分枝杆菌感染诱导的巨噬细胞焦亡的作用及分子机制。方法构建结核分枝杆菌感染J774A.1细胞体外模型;MTT法检测OrA对J774A.1细胞活力的影响;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测试剂盒检测细胞LDH释放水平;Western blot检测细胞焦亡相关蛋白NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、GSDMD-N、caspase1-p20、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、α7烟碱乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)蛋白质表达水平及NF-κB p65的磷酸化。ELISA检测各组细胞IL-1β表达水平;免疫荧光检测α7nAChR蛋白及定位。结果MTT结果表明OrA在80μmol/L浓度范围内对J774A.1细胞无细胞毒性;OrA抑制J774A.1细胞LDH的释放,降低细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD-N、caspase1-p20的蛋白质表达水平以及ASC寡聚化,促进α7nAChR蛋白表达,并抑制NF-κB p65磷酸化和IL-1β的释放;加入α7nAChR激动剂PNU282987可降低GSDMD-N并抑制NF-κB p65磷酸化。结论OrA可能通过调控胆碱能抗炎通路抑制结核分枝杆菌感染诱导的巨噬细胞焦亡。

贝母瓜蒌散抑制MUC5AC表达改善脂多糖诱导的小鼠气道黏液高分泌

目的探讨贝母瓜蒌散对气道黏液高分泌的干预效应及机制。方法36只雄性C57小鼠随机分为3组,空白组、模型组和贝母瓜蒌散组,每组12只;贝母瓜蒌散治疗4周后,取材,肺组织石蜡切片行HE、PAS、免疫组化及MASSON染色,并用荧光定量PCR检测肺组织MUC5AC mRNA表达。结果模型组肺组织结构破坏,肺泡肺泡壁不规则、间隔增厚,肺间质水肿,可见炎性细胞浸润和红细胞渗透;PAS、MUC5AC及胶原纤维阳性染色增加(P<0.01),MUC5AC mRNA表达升高(P<0.01);贝母瓜蒌散能改善上述变化。结论贝母瓜蒌散可抑制MUC5AC基因表达,减轻脂多糖诱导的小鼠肺组织黏液高分泌,发挥化痰作用。