microRNA-182与缺血性脑卒中的相关性研究进展

脑卒中是全球第二大死因,是我国死亡和残疾的主要病因,给我国国民健康及经济发展带来了极大的负担。缺血性脑卒中占所有脑卒中病例的82%,其难以早期发现、难以有效治疗的现状急需得到进一步改善。microRNA-182(miR-182)近年来已被证实参与缺血性脑卒中及其危险因素,即动脉粥样硬化、糖尿病、血脂异常等的病理生理过程。现就miR-182与缺血性脑卒中的相关性进行综述,旨在揭示miR-182在缺血性脑卒中及其危险因素中作为新型生物学标志物及潜在治疗靶点的作用。

SOX17过表达慢病毒载体和稳定转染细胞系的构建

目的:构建性别决定区Y盒17 (SOX17)过表达慢病毒载体,使用SOX17过表达慢病毒感染PC12细胞并建立稳定过表达SOX17的细胞系。方法:在NCBI数据库中查找、设计并合成SOX17过表达序列,将其与经Bam HⅠ和AgeⅠ双酶切的慢病毒GV492载体连接,构建GV492-SOX17过表达重组质粒。琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物,筛选携带GV492-SOX17过表达重组质粒的阳性菌,克隆后测序。将GV492空载质粒和GV492-SOX17过表达重组质粒分别转染至人胚肾HEK 293T细胞中,转染48 h后收集GV492对照慢病毒和GV492-SOX17过表达慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将PC12细胞分为空白组、GV492对照组和GV492-SOX17组,空白组不作处理,GV492对照组和GV492-SOX17组分别采用相应慢病毒感染细胞(感染复数=100),10 mg·L^(-1)嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的PC12细胞,荧光显微镜观察各组PC12细胞生长状态及绿色荧光表达情况。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组PC12细胞中SOX17 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组PC12细胞中SOX17蛋白表达水平。结果:GV492-SOX17过表达重组质粒的基因片段长度约为744 bp,GV492-SOX17过表达重组质粒基因序列与设计合成的SOX17过表达序列一致。GV492对照慢病毒和GV492-SOX17过表达慢病毒滴度均为2.5×108TU·mL^(-1)。各组PC12细胞生长状态良好且有绿色荧光表达。RT-qPCR法检测,与空白组和GV492对照组比较,GV492-SOX17组PC12细胞中SOX17 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。Western blotting法检测,各组细胞在相对分子质量44 000处出现特异性条带,提示PC12细胞中SOX17蛋白表达成功;与空白组和GV492对照组比较,GV492-SOX17组PC12细胞中SOX17蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:成功构建了GV492-SOX17慢病毒表达载体,建立了稳定过表达GV492-SOX17的PC12细胞系。

miRNA-9参与脑卒中调控的研究进展

脑卒中是一种常见的脑血管疾病,也是威胁人类健康最严重的疾病之一。目前溶栓及机械介入取栓等治疗方案已广泛运用于临床医疗,但由于狭窄的时间窗限制以及可能发生的并发症等难题,需要进一步探究脑卒中发生、发展过程中的分子机制,期望能提供更有效的预防策略和更安全的治疗方案。miRNA是一类能够特异性结合mRNA的低分子RNA,研究表明,miRNA-9是一种与神经功能相关的miRNA,参与调控了神经细胞的增殖、凋亡和细胞周期等生物学过程,因此它可能在脑卒中的发生、发展过程中起重要作用。本文就miRNA-9在脑卒中发病过程中参与调控的分子机制做一综述。