缺氧对鼠胚大脑神经元c-Fos表达的影响及当归保护作用

目的:探讨宫内缺氧对胚胎大鼠大脑神经元内c-Fos表达的影响及当归注射液是否对缺氧鼠胚大脑神经元有保护作用。方法:将孕15d孕鼠采用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧,鼠胚大脑组织经c-Fos和神经元特异性标记物-神经元特异烯醇化酶(NSE)免疫组化双标染色后,进行图像分析。结果:三组鼠胚大脑中神经元特异烯醇化酶阳性细胞数量差异没有显著性;而缺氧组中c-Fos/NSE双染阳性细胞比对照组增多(P<0.05);当归组双染阳性细胞比缺氧组减少(P<0.05)。结论:缺氧可刺激鼠胚大脑神经元内c-Fos的表达。当归注射液对缺氧鼠胚大脑神经元可能有保护作用。

培养心肌细胞琥珀酸脱氢酶酶组化显示方法

采用乳大鼠心肌细胞培养,琥珀酸脱氢酶NBT显示法,酶活性处呈紫兰色颗粒或棒状。此方法简便,易于操作,特异性强,定位准确,并可长期保存,具有较大的应用价值。

改良PAS整块染色法显示肝糖原

目的:探讨PAS整块染色过程中固定与氧化同时处理与顺序处理对肝糖原显示效果的影响。方法:取成年家兔肝脏两小块,一块作固定与氧化顺序处理,另一块作固定与氧化同时处理,Schiff氏试剂染色,两组织块行石蜡切片,观察肝细胞内PAS反应阳性物质的深浅与分布特征。结果:两种方法均能显示肝细胞内糖原,PAS反应均为阳性,其中固定与氧化顺序处理法中PAS阳性强,阳性物质分布均匀,结构清晰。固定与氧化同时处理法中PAS阳性反应较弱,阳性物质分布不均。结论:PAS整块染色过程中固定与氧化顺序处理法优于固定与氧化同时处理法。

苏木精─伊红整块染色法

组织学切片染色方法众多，采用什么样的方法才能又快又好，是值得探讨的问题。我们过去都是用组织片染法进行染色，也能取得满意的染色效果，但用的时间长，步骤多，费试剂，染色结果不稳定，而且未经染色的组织不易切片。我们经过大量的实践和探索，与组织切片染色进行比较，组织块染色能取得相同的染色结果。此方法稳定可靠，染色效果好，不褪色，操作简便，既节省时间，又节约试剂，染色后的组织块易切，适合制作大量的教学切片。

不同胎龄大鼠大脑神经干细胞的分布比较

目的探讨正常状态下不同胎龄大鼠神经干细胞(neuralstemeells,NSCs)在大脑中的分布。方法将孕鼠随机分为胎龄11天组、15天组和19天组,用免疫组织化学方法检测其大脑神经干细胞中的巢蛋白(Nestin),经图像分析比较其差异。结果胎龄11天组Nestin阳性细胞分布于整个神经管上皮层,随着胎龄的增加,Nestin阳性细胞主要在室管膜上皮层,细胞数逐渐增加,并向周围迁移;结论大鼠在正常胚胎发育过程中,随着胎龄的增加,其脑室室管膜及室管膜下区神经干细胞逐渐增多。

当归对缺氧鼠胚模型神经干细胞增殖的影响

目的探讨当归注射液对宫内缺氧胚胎大鼠神经干细胞增殖的影响。方法将孕19天孕鼠经尾静脉注入当归注射液,用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧,将鼠胚大脑组织作神经巢蛋白免疫组化染色后,进行图像分析。结果缺氧组鼠胚Nestin免疫组化反应较对照组增强,阳性细胞增多(P<0.05);而当归组鼠胚较缺氧组减弱,阳性细胞减少(P<0.05)。结论缺氧可刺激神经干细胞进入增殖状态;当归注射液对宫内缺氧大鼠神经干细胞可能具有保护作用;采用低张性缺氧方法制造胚胎宫内缺氧模型。

当归注射液对宫内缺氧胎鼠大脑皮质神经元的保护作用

目的探讨当归注射液对宫内缺氧胚胎大鼠大脑皮质神经元是否有保护作用。方法将孕15 d的孕鼠随机分为对照组、缺氧组和当归组,缺氧组和当归组孕鼠采用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧,各组鼠胚大脑组织经c-Fos和一氧化氮合酶(n itric oxide synthase,NOS)免疫组织化学双标染色后,进行观察分析。结果缺氧组大脑皮质NOS阳性细胞和c-Fos/NOS双染阳性细胞均比对照组明显增多(P<0.05);与缺氧组相比,当归组NOS阳性细胞和c-Fos/NOS双染阳性细胞均减少(P<0.05)。结论当归注射液可能对缺氧鼠胚大脑神经元有保护作用。

银屑病皮损区肥大细胞分布和血管内皮细胞CD34表达的研究论

目的:探讨肥大细胞(MC)和血管内皮细胞在银屑病发病中的作用。方法:采用组织化学和免疫组化的方法,观察寻常性银屑病皮损处MC和CD34标记血管内皮细胞的分布情况。结果:经甲苯胺蓝特殊染色发现,银屑病患者真皮区的MC密度在进行期(33.07±14.63)个/mm2,高于静止期(21.80±4.86)个/mm2,静止期又高于正常对照组(15.85±6.93)个/mm2,它们之间的差异均有显著性;免疫组化观察发现,银屑病真皮区CD34标记的微血管密度在进行期(29.31±4.04)个/mm2,明显高于静止期(22.31±2.07)个/mm2,而静止期又明显高于正常对照组(18.81±2.59)个/mm2。结论:寻常性银屑病皮损处真皮内肥大细胞和血管内皮细胞密度明显增加,且与病情变化有关。

c-Fos和巢蛋白在鼠胚肺内的表达及缺氧对其影响

目的探讨胚胎大鼠肺组织内c-Fos和巢蛋白的表达及宫内缺氧对其表达的影响。方法将孕15d孕鼠采用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧,鼠胚肺组织经c-Fos和巢蛋白免疫组化双标染色后,进行观察分析。结果对照组肺组织c-Fos有弱表达,肺内支气管上皮有较强的巢蛋白表达;缺氧组肺组织c-Fos表达增强(P<0.05),肺内支气管上皮巢蛋白表达明显增强(P<0.05),且肺内支气管上皮以外肺组织也有巢蛋白表达。结论正常鼠胚肺组织内有c-Fos和巢蛋白表达,且巢蛋白的表达只在肺内支气管。缺氧可刺激鼠胚肺组织内c-Fos和巢蛋白的表达。

鼠胚神经干细胞增殖对缺氧的反应及当归的保护作用

目的:探讨宫内缺氧对胚胎大鼠神经干细胞增殖的影响及当归注射液对缺氧神经干细胞的保护作用。方法:实验于2003-09/2004-06在四川省泸州医学院动物科将12只孕鼠随机分为对照组、缺氧组和当归组,每组4只(每只孕鼠产胎鼠5～8只)。当归组孕鼠经尾静脉注入当归注射液,然后用低张性缺氧模型致胎鼠宫内缺氧;缺氧组用生理盐水代替当归注射液,其余同当归组;对照组不缺氧,其余同缺氧组。然后在麻醉状态下处死孕鼠,快速剖腹取胎鼠,每组随机选取20个胚鼠,将各组胎鼠脑组织作神经巢蛋白免疫组化染色,并进行图像分析。结果:60个胎鼠脑室周围脑组织进入结果分析。①缺氧组胎鼠巢蛋白免疫组化反应阳性细胞的吸光度较对照组强(0.262±0.043,0.173±0.021,P<0.05);阳性细胞数量较对照组多[(101.4±15.76),(42.7±6.25)个/视野,P<0.05]。②与缺氧组相比较,当归组胎鼠的巢蛋白免疫组化反应阳性细胞的吸光度减弱(0.222±0.035,P<0.05);阳性细胞数量减少[(58.5±12.53)个/视野,P<0.05]。结论:缺氧后神经干细胞表达巢蛋白增加,当归注射液减弱了缺氧刺激引起的神经干细胞的增殖和分裂,提示当归对缺氧有保护作用。

缺氧条件下鼠胚软骨c-Fos和巢蛋白表达及当归的保护作用

目的:探讨宫内缺氧对胚胎大鼠软骨组织内c-Fos和巢蛋白表达的影响,以及中药当归注射液对缺氧状态下其表达的调节。方法:于2004-06/12在四川省泸州医学院动物科将成年发情期雌性Wis-tar大鼠(220～250g)12只,分别与1只雄鼠合笼饲养,于次日上午8:00发现阴栓记孕鼠怀孕0d,饲养雌鼠至孕15d。将12只孕鼠随机分为对照组、缺氧组和当归组各4只(每只孕鼠产胎鼠5～8只)。当归组孕鼠经尾静脉注入当归注射液,然后用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧;缺氧组用生理盐水代替当归注射液,其余同当归组;对照组不缺氧,其余同缺氧组。然后麻醉状态下处死孕鼠,快速剖腹取胎,每组中随机选取20个鼠胚,将各组胎鼠头部软骨组织作c-Fos和巢蛋白免疫组化双标染色后,进行观察分析。结果分析与判断:每张切片用DP12数码相机在400倍下照相,并随机选择1个软骨组织视野观察计数。c-Fos免疫组化反应阳性细胞为胞核着蓝色,巢蛋白免疫组化反应阳性细胞胞质染红色。将凡是胞质染红色的细胞根据红色深浅分为3个等级:深红色计为、红色计为、淡红色计为+,分别对其记数,然后将同一组内20个鼠胚3个等级的阳性细胞数分别相加,得出该组的巢蛋白免疫组化结果。既有胞核染蓝色,又有胞质染红色的为c-Fos/巢蛋白免疫组化双染阳性细胞,计数每例鼠胚软骨组织双染阳性细胞的数量。结果:60个鼠胚头部软骨组织进入结果分析。①对照组软骨组织c-Fos和巢蛋白有弱表达;与对照组相比,缺氧组软骨组织c-Fos和巢蛋白表达增强[c-Fos:(5.35±1.42),(14.55±3.37)个/视野,q=16.48,P<0.05;巢蛋白:193,427个/20个鼠胚,RA-RB=66.78,P<0.05]。②与缺氧组相比,当归组软骨组织c-Fos和巢蛋白表达减弱[c-Fos:(8.00±2.31)个/视野,q=11.73,P<0.05;巢蛋白:250个/20个鼠胚,RA-RB=51.83,P<0.05]。结论:①缺氧可刺激鼠胚软骨组织巢蛋白的表达,c-Fos可能是缺氧刺激巢蛋白表达的机制之一。②当归注射液对缺氧鼠胚软骨组织可能有保护作用。

胚胎大鼠宫内缺氧动物模型的建立

目的-建立适合不同胎龄大鼠宫内缺氧的动物模型。方法-将孕15、19天的孕鼠随机分为对照组和缺氧组,缺氧组孕鼠用低张性缺氧原理致鼠胚宫内缺氧,将鼠胚大脑组织作c-Fos蛋白和一氧化氮合酶(nitricoxide synthase,NOS)免疫组化双标染色后,进行观察分析。结果-缺氧组鼠胚大脑神经元c-Fos蛋白和NOS阳性细胞均较对照组增多(P<0.05)。结论-可采用低张性缺氧方法使孕鼠缺氧来制造胚胎大鼠宫内缺氧的动物模型。

大黄素对Ⅰ型糖尿病大鼠血糖及体重的影响

目的揭示Ⅰ型糖尿病大鼠血糖、体重改变及大黄素对其影响。方法健康SD大鼠适应性喂养1 w,选择血糖正常者40只,随机选取10只作为对照组,其余大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)65 mg/kg制作糖尿病模型(对照组注射等量柠檬酸缓冲液)。3 d后禁食不禁水6 h,采尾血测空腹血糖,STZ注射后第10 d(成模初期)再测血糖,以血糖≥16.9 mmol/L为造模成功。成模大鼠随机分为糖尿病组(10只)与大黄素组(10只)。成模2 w后,对照组与糖尿病组以PBS 5 ml/kg灌胃,大黄素组用8 g/L大黄素混悬液灌胃,5 ml/kg,1次/d,直至成模后第10 w。STZ注射后第3 d、第10 d(成模初期)及成模后第10 w,检测各组血糖及体重变化。结果 (1)成模初期,3组体重无差异;与对照组相比,糖尿病组与大黄素组血糖均升高,但两组间无显著差异。(2)成模后第10 w,与对照组相比,糖尿病组与大黄素组体重均减轻,血糖均升高;与糖尿病组相比,大黄素组体重无差异,血糖降低。(3)成模后期与初期相比,对照组体重增加,血糖无改变;糖尿病组体重减少,血糖升高;大黄素组体重减少,血糖无改变。结论大黄素可降低Ⅰ型糖尿病大鼠血糖浓度,对体重无影响。

乳鼠心肌细胞酶消化培养和贴块培养法的比较

目的探索经济、简单易行的心肌细胞培养方法。方法选用新生乳大鼠心肌细胞进行0.25%胰酶分离培养和贴块培养两种培养方法。结果用0.25%胰酶消化培养可获得大量的单细胞,但是酶对细胞的损伤比较大,酶消化所受的影响因素比较多,此过程获取单细胞所需的时间比较长;贴块培养法简便易行,得到的细胞结构完整、存活率高,且经济实惠、适合长期研究且需细胞量不多的实验。结论酶分离培养和贴块培养各有优劣势,应根据不同的实验目的选用不同的培养方法。

芦荟大黄素对豚鼠皮肤黑色素细胞NOS的影响——免疫组织化学研究

目的 探讨豚鼠皮肤黑色素细胞在大黄有效成分的作用下 ,一氧化氮合酶 (NitricOxideSynthase ;NOS)表达的变化 ,阐明大黄在活体皮肤中对黑素细胞的有效作用浓度和作用机制。 方法 将 2 1只雄性豚鼠随机分成对照组及 5个实验组 ,用芦荟大黄素 5种浓度对局部皮肤皮下注射处理 ,48小时后取材 ,免疫组织化学方法 (SABC)法显示NOS的表达 ,用光学显微镜和图象分析仪对结果进行统计分析。结果 芦荟大黄素作用下 ,表皮黑素细胞NOS表达明显减少 ,光密度明显下降 (P <0 .0 5) ;不同浓度药物作用之间无显著差异 (P >0 .0 5) ,加注侧与未加注侧之间无显著差异。结论 芦荟大黄素对黑色素细胞NOS的表达具有调节作用 ,提示大黄对黑素细胞的调节是经NO信号介导途径 ,为大黄的临床应用提供实验依据。

急性癫痫大鼠弓状核HSP70的表达——免疫组织化学研究

目的 :探讨急性癫痫大鼠弓状核HSP70的表达。方法 :2 0只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照 (C)组、癫痫 (E)组 ,采用免疫组织化学方法 (ABC法 )和图像分析技术对HSP70表达反应物进行定量研究。结果 :①E组HSP70表达阳性反应区面积明显增加 (P <0 .0 5) ,HSP70表达阳性反应神经元胞体直径无显著性差异 (P >0 .0 5) ;②E组和C组间 ,HSP70表达阳性反应神经元的面积密度明显增加 ,其灰度值明显下降 (P <0 .0 5)。结论

缺血性脑损伤大鼠下丘脑c-fos基因表达及药物调控

目的 :从分子水平探讨缺血性脑损伤的病理生理改变和参麦注射液的保护作用。方法 :将 15只雄性wistar大鼠随机分为对照组、缺血组和治疗组 ,采用免疫组织化学方法观察了缺血性脑损伤时大鼠下丘脑视上核和室旁核内神经元c -fos基因的表达及参麦注射液的保护作用。结果 :缺血性脑损伤时大鼠视上核和室旁核内神经元c -fos基因的表达明显增多 (P <0 .0 5 ) ,而用参麦注射液后明显减少 ,但未减少至正常水平 (P <0 .0 5 )。结论 :缺血性脑损伤时下丘脑中c -fos基因表达增多 ,而参麦注射液对缺血性脑损伤可能有一定治疗作用。

肺舒胶囊对慢性阻塞性肺病大鼠肺基质金属蛋白酶9表达的影响

目的探讨肺舒胶囊对慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。方法将30只Wistar大鼠随机分为对照组、COPD模型组和肺舒胶囊治疗组各10只,取各组大鼠肺组织作MMP-9免疫组化染色,进行图像分析。结果模型组大鼠肺组织MMP-9免疫染色后的光密度值较对照组增大(P<0.05);而治疗组大鼠肺组织MMP-9的光密度值较模型组减小(P<0.05)。结论肺舒胶囊可降低COPD大鼠肺组织中MMP-9的表达。