改良组织贴壁法培养豚鼠胆囊平滑肌细胞及鉴定

目的本研究使用组织贴壁法构建一种经济、简单、纯高度的胆囊平滑肌细胞模型,为胆囊疾病相关实验提供材料。方法从豚鼠腹腔中分离胆囊,沿着纵轴将胆囊剪开,使用组织清洗液多次漂洗胆囊组织。将清洗好的胆囊组织转移到超净工作台,并再次漂洗,将漂洗好的胆囊组织用动物眼科镊去除胆囊的粘膜和浆膜,胆囊组织用维纳斯剪分割成1mm×1 mm的小碎块。组织块均匀的铺到皿底,缓慢倒置,在培养箱中贴壁25分钟,加人完全培养基进行培养。在培养基中,采用不同的贴壁时间来提取纯化细胞。选用形态学,免疫荧光,免疫组化和蛋白印迹技术对其进行鉴定。结果贴壁第7天,组织边缘观察到胆囊平滑肌细胞爬出,第21天时,平滑肌细胞呈“峰-谷”状增长。免疫荧光、免疫组化化学和免疫印迹技术鉴定3代胆囊平滑肌细胞肌动蛋白的表达呈阳性。结论仑通过本项实验的完成,有望获得成本低、操作简便、纯度高的细胞模型,为胆囊疾病的发病机制研究提供更好的体外模型。