术连饮干预腹泻型肠易激综合征模型大鼠的实验研究

目的:探讨术连饮对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠肠动力的影响及其可能的作用机制。方法:选择SD大鼠60只,随机分为空白对照组、模型组、匹维溴铵组及术连饮低、中、高剂量组,每组10只。采用番泻叶灌胃结合束缚刺激法建立IBS-D大鼠模型。造模第15日开始给药,除空白对照组外,其余各组继续灌服番泻叶,1 h后灌胃给药,术连饮低、中、高剂量组分别给予术连饮2.3 g·kg^(-1)、4.6 g·kg^(-1)、9.2 g·kg^(-1)灌胃,匹维溴铵组给予18.5 m g·kg^(-1)灌胃,空白对照组和模型组均灌胃生理盐水20 mL·kg^(-1)。给药1 h后,束缚1 h,每日1次。连续给药14 d。观察大鼠一般状态、体质量、粪便含水量、肠道推进率、血浆及结肠组织P物质(SP)、生长抑素(SS)表达的变化。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低(P<0.01),粪便含水量、肠道推进率均显著升高(P<0.01),血浆及结肠组织SP、SS含量均显著升高(P<0.01)。病理组织学结果显示,模型组大鼠结肠黏膜结构完整。与模型组比较,术连饮低、中、高剂量组体质量显著升高(P<0.01或P<0.05),粪便含水量、肠道推进率均显著降低(P<0.01);术连饮低、中、高剂量组血浆SP、SS含量显著降低(P<0.05),术连饮中、高剂量组结肠组织SP含量显著降低(P<0.05),术连饮低、中、高剂量组结肠组织SS含量显著降低(P<0.01)。结论:术连饮可有效改善IBS-D模型大鼠肠运动障碍,其作用机制可能与调节血浆及结肠组织SP、SS水平有关。

塑身胶囊的安全性毒理学研究

目的了解塑身减肥胶囊毒理学安全性,确保其食用安全。方法按《保健食品安全性毒理学评价程序和检验方法规范》进行小鼠急性毒性试验、Am es试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸变试验。结果受试物对小鼠经口LD 50>10g.kg-1,为实际无毒物;在Am es试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸变试验中均显示呈阴性反应,未显示致突变作用。结论塑身胶囊经口急性毒性LD 50>10g.kg-1;根据急性毒性分级,属实际无毒,且无致突变性,在正常摄入情况下对人体是安全的。

建立标准化动物实验技术服务平台的初探

建立标准化动物实验室技术服务平台,建立集中统一、条件合格、规范管理、开放使用的专业动物实验室,创建区域性开放性的公共动物实验服务技术平台,逐步形成有特色的实验动物使用服务体系,释放出高校实验动物资源的潜能。

辅酶Q10毒性研究

目的研究辅酶Q10胶囊的食用安全性。方法以0.21、0.42、0.83g.kg-1BW剂量给予大鼠灌胃辅酶Q10胶囊内容物30d,每周记录体重,统计进食量。试验结束后,取血测定血常规、血生化,取脏器并做病理组织的检查。结果试验期间,各组动物生长活动正常。试验结束时,样品各剂量组动物体重、体重增重、进食量、食物利用率、脏体比与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。个别剂量组血生化、血常规指标与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。其它各剂量组动物血常规、各项生化指标均在正常值范围内。对受检脏器作组织病理学检查,未见特异性病变。结论辅酶Q10胶囊对大鼠30d试验未见明显毒性。

浅析屏障环境实验室的管理

随着实验动物学科的发展,众多高校建立了实验动物屏障环境。本文结合医学院校实验动物平台的特点,在实践经验的基础之上,从人员、物品、动物以及设备等四个方面总结医学院校屏障环境动物实验室的管理所面对的重点和难点。对医学院校的实验动物中心屏障环境的运行提出几点建议。

术连饮治疗功能性消化不良的实验研究

目的探讨术连饮对功能性消化不良大鼠肠动力的影响及其可能的作用机制。方法将SD大鼠随机分组,每组10只,分别为正常组、模型组、术连饮组和西沙比利组。制作功能性消化不良大鼠动物模型,以葡聚糖蓝-2000为胃肠内标记物,观察大鼠肠道传输速率的变化。测定大鼠血浆及十二指肠组织胃动素、生长抑素的水平。结果模型组大鼠肠道传输速率明显降低(P<0.05),血浆及十二指肠组织MOT含量明显降低(P<0.01)、SST含量明显升高(P<0.01)。术连饮能够显著促进模型大鼠肠道传输速率(P<0.05),显著增加血浆及十二指肠组织MOT含量(P<0.05),降低SST水平(P<0.05)。结论术连饮能够改善FD大鼠肠运动障碍,其作用机制可能通过提高血浆及十二指肠组织MOT,降低SST,以促进肠动力。

结扎不同肾动脉构建肾性高血压大鼠模型

目的探讨两种肾动脉结扎法建立肾性高血压伴肾衰大鼠模型及其生化指示的评价。方法采用外科切除右肾并结扎左肾动脉上段分支及中、下段分支,继续饲养8周,实验前尾袖法测定大鼠的血压,断头取血,放免法测定血清血管紧张素II(AII)和内皮素(ET)。双缩脲法测定24 h尿蛋白,生化指标采用全自动生化分析仪检测。结果(1)与正常对照组相比,两种手术组血压都明显升高(126.67±8.5 VS 177.34±9.87,174.83±13.38,P<0.05),而手术组之间无明显差异(177.34±9.87,174.83±13.382,P>0.05)。两手术组血清中AII、ET水平明显增高(AII:2355.43±388.79,2556.28±408.33 VS 1546.78±312.96,P<0.05;ET:294.24±36.56,311.56±39.46 VS225.93±63.57,P<0.05)。尿24 h总蛋白量也明显高于正常组(25.76±12.45,23.81±5.94 VS 2.84±1.63P<0.05)(3)与正常对照组比,三组之间血清ALT,ALB及Trig无明显差别,但手术组AST、GLU、CHOL却有明显升高。(4)BUN和CREA与假手术组相比都有明显升高(BUN:13.39±2.18 12.87±1.61 VS 4.31±0.59P<0.05;CREA:59.85±9.19 55.47±5.80 VS 20.00±5.78P<0.05)。结论(1)采用两种手术法构建肾性高血压伴衰功能不全模型血清生化指标无明显差异;(2)大鼠背外侧手术入路行左肾动脉前支结扎建立肾性高血压伴肾衰模型手术操作更为简便;(3)肾动脉狭窄可引起血清AII、ET水平增高,其可能形成肾性高血压的并加速肾衰的重要原因。

NPM1 A型突变体对TGF-β1诱导K562细胞增殖及AKT磷酸化的影响

目的:观察核仁磷酸蛋白(nucleophosmin 1,NPM1)A型突变体过表达对TGF-β1诱导的K562细胞增殖及AKT磷酸化的影响。方法:腺病毒载体(Ad5-NPM1)转染髓系白血病K562细胞建立过表达NPM1蛋白细胞株;应用Western blot法及ELISA法分别检测细胞NPM1蛋白表达及上清液含量,Westernblot法检测K562细胞NPM1、AKT和P-AKT蛋白表达,MTT法检测细胞增殖。结果:K562细胞NPM1蛋白表达水平呈Ad5-NPM1转染复数[(multiplicity of infection,MOI):30-200]依赖性增加,与空载组(Ad5-vector-100)相比,Ad5-NPM1-30、Ad5-NPM1-100组K562细胞及细胞上清液NPM1蛋白水平均显著增高(P<0.01)。TGF-β1(10ng/mL)能够诱导K562细胞AKT蛋白磷酸化,但对总AKT水平无明显影响。TGF-β1(10ng/mL)+Ad5-NPM1-100组K562细胞P-AKT水平显著高于TGF-β1处理组(P<0.05),各组总AKT水平无显著差别(P>0.05)。与空白对照组(CT)相比,TGF-β1(10ng/mL)处理可促进K562细胞增殖;但TGF-β1(10ng/mL)+Ad5-NPM1-100组细胞的增殖水平明显高于TGF-β1处理组(P<0.01)。结论:NPM1可促进TGF-β1诱导的K562细胞增殖。NPM1促进TGF-β1诱导的K562细胞可能与AKT磷酸化有关。

小鼠Ogg1基因pET28a-mOgg1原核表达系统建立及其生物信息学探讨

将小鼠Ogg1(mOgg1)基因克隆至pET-28a(+)原核表达载体上,分析其相关的生物信息学特性.运用分子克隆的方法,获得重组质粒pET28a-mOgg1;经同源性分析证实与NCBI基因库中mOgg1基因相似度为100%;mOgg1基因可翻译成345个氨基酸序列,翻译后的蛋白不存在N-糖基化位点、跨膜螺旋区域,不含信号肽且无信号肽剪切位点,但含有31个磷酸化位点;运用在线软件对mOgg1蛋白进行结构分析并建立蛋白的3D结构,发现在该蛋白链上含有48%α螺旋、10%β折叠.成功获得了pET28a-mOgg1重组质粒,并对重组蛋白进行Western-blot鉴定,从基因及氨基酸组成上分析该蛋白的特性,由此探讨mOgg1基因及蛋白表达相关的生物信息学特性.

小鼠Nudt9基因原核载体的构建及其生物信息学分析

利用分子克隆的方法,将小鼠Nudt9基因克隆至原核表达载体,并进行PCR鉴定、酶切鉴定及测序鉴定;再运用DNAMAN和DNATAR对基因进行同源性分析及抗原肽分析,同时在线分析小鼠Nudt9蛋白的信号肽、跨膜区域、结构域、N-糖基化位点以及磷酸化位点。本研究成功获得重组pET28a-Nudt9质粒,并从基因及氨基酸组成上分析该蛋白的特性,从而挖掘出一些基因及蛋白生物信息。

某车用空气净化器空气消毒效果及毒性试验观察

目的了解某车用空气净化器对空气中细菌的杀菌功效及毒性。方法据《消毒技术规范》(2002年版),将车用空气净化器置于密闭空间,通过实验观察车用空气净化器对空气自然菌的杀菌效果;将小鼠置于车用空气净化器工作环境中观察小鼠反应。结果车用空气净化器在正常工作情况下,对1m3密闭空间空气消毒0.5h,空气自然菌平均消亡率95.2%;消毒1h,空气自然菌平均消亡率98.1%;20只雌雄各半小鼠置于车用空气净化器工作环境2h后正常饲养,无不良现象。结论该车用空气净化器对密闭小空间内的空气有较好的消毒效果;在无人情况下使用无毒性问题。

小檗碱对急淋白血病的在体抗肿瘤及与Ara-C的联合作用研究

本实验旨在研究小檗碱(berberine, BBR)对急淋白血病细胞Jurkat的在体抗肿瘤作用及与阿糖胞苷(cytosine, Ara-C)的联合作用。本研究通过体外培养Jurkat细胞株,将细胞注射至裸鼠皮下,建立皮下移植瘤模型,待肿瘤体积长至约100 mm^3时,随机分为两组:对照组和小檗碱处理组,分别口服PBS、200 mg/kg小檗碱,隔天给药一次,隔天记录裸鼠体重及肿瘤体积大小。给药30 d后处死动物,剥离肿瘤组织,称量肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线、体重图及瘤重图,计算抑瘤率;采用免疫组化法检测移植瘤组织中细胞核增殖抗原Ki-67的表达水平。同时,本研究用一线用药阿糖胞苷(cytarabine, Ara-C)与小檗碱联合处理Jurkat细胞,研究两药联用的药效。发现小檗碱处理组移植瘤大小受到明显的抑制,瘤块组织中Ki-67的表达明显降低;Ara-C与小檗碱能协同抑制Jurkat细胞的增殖,联合指数(combination index, CI)<1。本研究发现小檗碱能够抑制Jurkat细胞皮下移植瘤的增殖,在体内发挥抗急淋白血病活性,并能与一线用药Ara-C协同产生作用。

NPM1A型突变体对TGF-β1诱导K562细胞活力及AKT磷酸化水平的影响

目的观察核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin 1,NPM1)A型突变体过表达对TGF-β1诱导的K562细胞活力及AKT磷酸化水平的影响.方法将携带NPM1 A型突变体的腺病毒荧光载体(Ad5-NPM1)感染髓系白血病K562细胞,建立过表达NPM1蛋白的K562细胞株.利用Western blot法及ELISA法分别检测细胞NPM1蛋白表达及上清液蛋白含量;利用Western blot法检测TGF-β1处理对K562细胞AKT、P-AKT蛋白表达的影响.MTT法检测细胞活力;Western blot法测定细胞内NPM1、AKT、P-AKT蛋白水平.结果重组腺病毒载体Ad5-NPM1感染K562细胞荧光强度随感染复数(multiplicity of infection,MOI,30~200)增加而增强,转染第3天即观察到细胞内绿色荧光信号.K562细胞NPM1蛋白表达水平呈Ad5-NPM1感染复数(30~200)依赖性增加(r=0.85),与空载组(Ad5-vector-100)相比,Ad5-NPM1-30、Ad5-NPM1-100组的NPM1蛋白表达水平均显著增高(P<0.01).ELISA结果也显示K562细胞上清液NPM1蛋白水平呈Ad5-NPM1感染复数(30~200)依赖性增加(r=0.92),与空载组(Ad5-vector-100)相比,Ad5-NPM1-30、Ad5-NPM1-100组K562细胞上清液NPM1蛋白含量均显著增高(P<0.01).TGF-β1(10 ng/ml)能够时间依赖性诱导K562细胞AKT蛋白磷酸化,但对总AKT水平没有明显影响.单TGF-β1处理组与TGF-β1(10 ng/ml)+Ad5-Vector-100组细胞内P-AKT水平的差异无统计学显著性(P>0.05),而TGF-β1(10 ng/ml)+Ad5-NPM1-100组K562细胞P-AKT水平显著高于单TGF-β1处理组(P<0.05),各组总AKT水平未见明显差别(P>0.05).与空白对照(CT)组相比,TGF-β1(10 ng/ml)处理可促进K562细胞的活力;但TGF-β1(10 ng/ml)+Ad5-NPM1-100组细胞的活力水平明显高于单TGF-β1处理组(P<0.01).结论NPM1能促进TGF-β1诱导的K562细胞的活力.NPM1促进TGF-β1诱导的K562细胞的生长可能与AKT磷酸化有关.