心理应激对小鼠脂肪组织黄嘌呤氧化酶表达、活性及相关指标的影响

目的:探讨心理应激对小鼠脂肪组织黄嘌呤氧化酶表达、活性及相关指标的作用。方法:雄性无特定病原体(SPF)级20只昆明小鼠随机分2组(每组10只),即慢性束缚应激(Stress)组和正常对照(Control)组。Stress组小鼠每天在自制式束缚器中限制活动2 h,其余时间两组小鼠在相同环境中自由饮水摄食,实验持续14 d,取血和白色脂肪组织(WAT);观察脂肪组织病理学改变,检测WAT中黄嘌呤氧化酶(XO)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(Nox-4)的蛋白水平,检测WAT组织中XO、Nox-4、超氧化物歧化酶(Mn SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、脂联素(ADPN)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、胰岛素受体底物1(IRS-1)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)、组织因子(TF)、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的mRNA表达,检测血清和WAT组织中XO酶活性以及血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-Cho)、游离脂肪酸(FFA)、尿酸(UA)的含量。结果:与control组比较,stress小鼠腹股沟WAT组织中XO免疫染色阳性着色细胞黄褐色沉淀深且丰富,WAT中出现大量的单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及浆细胞浸润反应和炎症性的改变;血清XO浓度、WAT组织中XO mRNA水平和XO的酶活性显著升高(P<0.01),血清游离脂肪酸(FFA)和尿酸(UA)的含量显著增高(P<0.01),WAT组织中Nox-4蛋白、MCP-1、IL-6、TNF-α、TF、PAI-1mRNA的表达水平显著增高(P<0.01),而Mn-SOD、GSH-Px、CAT、ADPN、IRS-1和GLUT-4的mRNA水平则显著降低(P<0.01)。结论:心理应激可诱发脂肪XO过量表达及其活性增高,进而引起脂肪炎症、糖代谢及凝血酶原异常等反应。

心理应激诱导ROS产生在食管上皮细胞间隙增宽发生中的作用机制

目的建立小鼠慢性束缚应激(Stress)模型,探讨心理应激诱导活性氧(ROS)介导的食管紧密连接(TJ)蛋白表达以及在细胞间隙增宽(DIS)发生中的影响。方法20只雄性SPF级昆明小鼠随机分两组(每组10只),即慢性束缚应激(Stress)组和正常对照(Control)组。Stress组小鼠每天在自制式束缚器中限制活动2h,其余时间两组小鼠在相同环境中自由饮水摄食,实验持续14天。通过HE染色在光学显微镜下观察食管上皮组织病理学改变并进行间距测量。采用免疫组化方法检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(Nox-4)在小鼠食管中的表达,进一步通过酶联免疫吸附(ELISA)、蛋白质印迹(WB)法检测Nox-4蛋白表达量,并通过实时定量RT-PCR法检测食管组织中ROS指标(Nox-4、8-OHdG、MDA)、抗氧化蛋白(Nrf-2、HO-1)及TJ蛋白重要指标(Claudin-1、Claudin-4、Occludin、ZO-1)mRNA的表达量。结果与Control组小鼠比较,Stress组小鼠体质量增加量低于Control组(7.95±2.45 vs 11.32±2.23),差异有统计学意义(t=3.78,P<0.01)。两组小鼠光镜下测量的平均细胞间隙分别为Control组0.71±0.18μm、Stress组1.18±0.12μm,与Control组比较,Stress组小鼠上皮细胞间距明显增宽,差异有统计学意义(P=0.000)。免疫组化结果显示,Nox-4主要表达于食管固有层、黏膜及黏膜下层,Stress组Nox-4阳性表达显著高于Control组。Stress组小鼠食管黏膜中Nox-4 mRNA相对表达水平是Control组的2.36±0.34倍,而Stress组血清Nox-4的释放浓度是Control组的2.25±0.27倍以上,差异有统计学意义(t=-11.56,P=0.000)。ELISA实验结果显示,Stress组小鼠8-OHdG(3.95±0.25 vs 1.65±0.38)和MDA(0.95±0.01 vs 2.48±0.20)的血清表达水平显著高于Control组,差异有统计学意义(t=-23.45,P=0.000)。抗氧化蛋白的RT-PCR实验结果显示,Stress组Nrf-2,HO-1的mRNA转录水平明显低于Control组的1.82±0.35倍,差异有统计学意义(t=-8.25,P=0.000);蛋白质印迹法检测显示,Stress组小鼠食管组织中Nrf-2、HO-1蛋白表达水平显著低于Control组。食管上皮组织TJ蛋白重要指标的RT-PCR实验结果显示,Stress组TJ蛋白Claudin-1、Claudin-4、Occludin及ZO-1的mRNA转录水平显著降低,分别是Control组的1.67±0.28、1.54±0.22、1.85±0.35、1.74±0.42倍,差异有统计学意义(t=-8.34、-14.78、-17.63、-12.27,P=0.000)。结论心理应激可能直接通过破坏食管氧化/抗氧化系统平衡,引起TJ蛋白的表达异常以及DIS的产生。

炎症反应介导胃食管反流病诱发心房颤动的机制研究

目的探讨炎性因子在胃食管反流病(GERD)和心房颤动(AF)患者食管黏膜中的表达及其在AF发生中的意义.方法按照纳入、排除标准选取2017年1月至2018年6月间在新疆维吾尔自治区人民医院住院收治的50例患者设为研究组.同期完成体检的15名健康受试者设为健康对照组.研究组均行GERDQ评分、24 h动态心电图、24 h pH监测、高分辨率食管测压监测并内镜下取食管齿状线上3 cm处的局部黏膜作为标本,后续采用HE染色、免疫组化、RT-PCR、ELISA等方法分析组织炎症程度、炎性因子(IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α及hs-CRP)的表达及血液中的释放浓度.结果根据患者的临床表现,GERDQ评分、内镜等检查,分为GERD合并AF组(AF组)、GERD不合并AF组(非AF组)和对照组.GERDQ评分在AF组3~7分、8~10分、11~14分及15~18分等评分范围均明显高于非AF组,差异具有统计学意义(P<0.01).食管24 h pH监测发现,AF组弱酸反流(4<pH<7)次数、酸反流(pH≤ 4)次数、食管近端酸反流(%)及DeMeester评分等指标明显高于非AF组,两组间差异具有统计学意义(P<0.05).内镜检查发现,AF组胃食管连接处的食管黏膜组织大规模的糜烂、炎性渗出、水肿以及溃疡等病变.组织炎症(损伤)评分显示,AF组评分明显高于非AF组和对照组,AF组炎症评分达到高峰,并显著高于非AF组,差异具有统计学意义(P<0.01).免疫组化显示,IL-6、IL-8、IL-1β及TNF-α主要表达在食管上皮层,黏膜及黏膜下层,而AF组这些指标的表达几乎覆盖全层食管黏膜上,表示严重的组织炎症性改变.RT-PCR和ELISA结果表示,AF组显著增高炎性因子(IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α及hs-CRP)的mRNA相对表达量及其血液中的释放浓度,与非AF组和对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.001).结论炎性因子在AF患者食管黏膜以及在血液中显著增高,可能是酸反流诱发AF产生的机制之一.

NADPH氧化酶Nox-4在DSS诱导的小鼠肠炎中的表达及作用

目的研究Nox-4及抗氧化物在葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的小鼠炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)模型中的表达水平,探讨氧化应激及NADPH氧化酶在IBD发病机制中的作用。方法将16只SPF级雄昆明小鼠随机分为正常组和DSS组,每组8只,正常组正常饮水,DSS组饮用2. 5%DSS溶液,7天建立小鼠肠炎模型。通过结肠长度、HE染色组织病理学评分、疾病活动指数(disease activity index,DAI)评估肠道炎症程度;免疫组织化学法检测结肠组织中Nox4蛋白含量,并分别采用实时定量PCR与生化方法检测组织中Nox-4的mRNA表达水平及血清浓度,评价机体氧化应激程度;利用实时定量PCR法分析小鼠肠道组织中Mn-SOD、GSH和CAT mRNA的表达情况,评价机体抗氧化功能;实时定量PCR法检测结肠组织中MCP-1、IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平、ELISA法检测上述3种炎性因子血清浓度以反应机体炎症程度。结果与正常组相比,DSS组小鼠体质量明显下降(P <0. 01),DAI评分明显增高(P=0. 000),结肠长度明显缩短(P <0. 01),肠道呈现中至重度炎症状态; DSS组结肠组织中Nox-4蛋白表达明显上调,Nox-4 mRNA含量显著升高(P=0. 000),血清Nox-4浓度在DSS组较正常组更高(P <0. 01);结肠组织中抗氧化物Mn-SOD、GSH和CAT mRNA的表达在DSS组中均明显增高(P=0. 000);比较机体炎症指标,DSS组小鼠血清中MCP-1、IL-1β、TNF-α浓度较正常组均呈不同程度上升(P均=0. 000),结肠组织中3种炎性因子的mRNA相对表达量较正常组显著升高(P均=0. 000)。结论 Nox-4通过氧化应激途径参与了肠道黏膜炎性反应的进程,并可能在IBD的转归中发挥着更为重要的作用。

小组式教学培训在医学专业型研究生提高科研能力带教中的应用及作用

目的探讨小组式教学培训在医学专业型研究生提高科研能力带教中的应用及作用。方法选取2017年9月至2021年7月在新疆维吾尔自治区人民医院进行规范化培训的微创外科专业研究生23名,采用数字表法随机分为对照组(12名)和研究组(11名);对照组采用传统教学,研究组采用小组式教学授课。通过理论考试、实操应用(包括文献检索、统计软件)和问卷调查对比分析2组教学效果。结果研究组学生的理论考试和实操能力方面优秀和合格率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);相较于对照组,研究组学生对小组式教学科研提升能力课程的感兴趣程度、对科研思维的启发程度及对教学方式的满意程度更高,差异有统计学意义(P<0.05),提示学生对科学研究的兴趣更加浓厚,且可有效地提高学生的科研创新思维。结论相较于传统教学,小组式教学方式可提高学生的科研兴趣,更好的培养学生的科研创新能力。

结合胃食管反流病特征建立实验动物模型在培养医学研究生科研能力教学中的应用

目的探讨结合胃食管反流病特征建立实验动物模型及相关基础实验技术在提高医学研究生科研能力教学中的应用。方法选取2017年9月至2021年7月在新疆维吾尔自治区人民医院进行规范化培训的医学专业硕士研究生23名和博士研究生3名纳入为培养对象。所有学生在教师的指导下进行培训,培训课程包括实验动物模型的建立、常规麻醉、采血解剖取组织,标本处理、苏木精-伊红染色及实时定量RT-PCR等实验技术和SPSS统计软件的理论原理和应用操作。通过采用理论及操作能力考试和教学满意度问卷调查等方法分析教学效果。结果经过实验理论知识和实操技能培训后,学生的优秀率和合格率,与培训前相比,显著提高,差异均有统计学意义(P<0.05)。培训后所有研究生对上述实验技术的应用能力大大提升。培训后学生对实验理论和操作培训课程的感兴趣程度、对统计软件、实验操作步骤的掌握及应用程度、对科研思维的启发程度以及对教学方式的满意度得分值明显提高,与培训前相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论动物模型建立和基本实验技术的掌握和应用有效帮助专业硕士研究生的实验动手能力,同时更好的培养学生的科研创新能力。

免疫标志物在338例胃肠道间质瘤患者肿瘤组织中的表达及其临床意义

目的 分析胃肠道间质瘤（GIST）患者肿瘤组织中CD117、CD34、平滑肌肌动蛋白（SMA）、DOG-1和结蛋白的表达及其临床意义。 方法 纳入2008年5月至2016年12月收治的338例GIST患者，收集其临床病理特征信息。采用免疫组织化学法检测纳入患者肿瘤组织中CD117、CD34、SMA、DOG-1和结蛋白的表达。统计学方法采用卡方检验和秩和检验。 结果 338例GIST患者中，CD117、CD34、SMA、DOG-1和结蛋白阳性者分别为332例（98.2%）、308例（91.1%）、133例（39.3%）、322例（95.3%）和48例（14.2%）。CD34在不同肿瘤最大径、危险度分级和肿瘤原发部位之间差异均有统计学意义（Z＝－3.085、－3.064，χ2＝57.110；P均〈0.05），CD117在不同民族之间差异有统计学意义（χ2＝10.641，P〈0.05），结蛋白在不同肿瘤最大径、危险度分级和核分裂象计数之间差异均有统计学意义（Z＝－2.343、－2.625、－2.005，P均〈0.05）。338例GIST患者中，CD117阴性表达6例，其中5例CD34表达阳性，3例SMA表达阳性，5例DOG-1表达阳性。CD117与CD34、SMA、DOG-1、结蛋白共同阳性表达率分别为89.6%（303/338）、38.5%（130/338）、93.8%（317/338）、14.2%（48/338）。 结论 CD117是GIST诊断必要的免疫标志物。对于CD117表达阴性的GIST患者，CD34、SMA、DOG-1有助于提高GIST诊断及鉴别诊断的准确性。

慢性束缚应激对小鼠食管内脏敏感性的影响及其诱导食管炎症和氧化应激的作用

目的建立小鼠慢性束缚应激模型,探讨心理应激对食管高敏感性及食管炎症发生的作用,以及氧化应激所产生的影响。方法20只雄性SPF级昆明小鼠随机分2组(每组10只),即慢性束缚应激(CRS)组和正常对照(NC)组。CRS组小鼠每天在自制式束缚器中限制活动2h,其余时间两组小鼠在相同环境中自由饮水摄食,实验持续14d。通过HE染色在光学显微镜下观察食管组织病理学改变并进行组织损伤评分。采用免疫组化方法检测瞬时电位香草酸亚型1(TRPV-1)与还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX-4)在小鼠食管中的表达,进一步通过Western印迹检测TRPV-1蛋白表达量,并通过实时定量PCR法检测食管组织中TRPV-1、氧化蛋白、抗氧化蛋白及相关炎症因子微RNA的表达量。结果HE染色镜下观察可见,CRS组小鼠食管黏膜可见基底细胞增生,中性粒细胞及浆细胞浸润等炎症性改变,NC组未见明显异常,并且两组小鼠食管黏膜组织上皮细胞损伤及黏膜下炎症细胞评分有差异均有统计学意义(均P<0.05)。免疫组化结果显示,TRPV-1和NOX-4阳性着色细胞在大部分标本中均可见到,但TRPV-1和NOX-4免疫染色阳性着色细胞在CRS组小鼠组织中表达较NC组染色深且丰富。Western印迹检测结果表明,CRS组食管标本中TRPV-1蛋白质表达量较NC组高(1.0±0.0比1.6±0.2),差异有统计学意义(t=-7.06,P<0.001)。实时定量PCR实验结果表明,CRS组TRPV-1及氧化蛋白NOX-4mRNA表达水平较NC组高,分别为1.0±0.0比2.0±0.2、1.0±0.0比2.0±0.2,差异均有统计学意义(t=-13.44、-14.32,均P<0.001);与NC组比较,CRS组抗氧化蛋白锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)mRNA表达水平较高,分别为1.0±0.0比0.7±0.1、1.0±0.0比0.7±0.1,差异均有统计学意义(t=8.39、7.36,均P<0.05);CRS组炎症相关因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素8(IL-8)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平较NC组高,分别为1.0±0.0比2.4±0.4、1.0±0.0比1.8±0.2、1.0±0.0比2.5±0.4,差异均有统计学意义(t=-10.06、-13.24、-12.40,均P<0.001)。结论心理应激可能通过致敏TRPV1受体介导小鼠食管高敏感性的形成,并引起食管炎症的发生。心理应激诱导的氧化应激可能参与小鼠食管高敏感性的产生。

蛋白激酶受体2在慢性束缚应激小鼠食管中的表达及其意义

目的研究蛋白激酶受体2(proteinase-activated receptor-2,PAR-2)在慢性束缚应激(chronic restraint stress,CRS)模型小鼠食管中的表达水平,探讨PAR-2在心理应激诱导食管高敏感性及食管炎症中的作用。方法20只雄性无特定病原体(specific pathogen free,SPF)昆明小鼠随机分2组(每组10只),即CRS组和正常对照(normal control,NC)组。CRS组小鼠每天在自制式束缚器中限制活动2 h,其余时间两组小鼠在相同环境中自由饮水摄食,实验持续14 d。通过HE染色在光学显微镜下观察食管组织病理学改变并进行组织损伤评分。采用免疫组化,Western blot法,逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)方法检测蛋白激酶受体2(proteinase-activated receptor-2,PAR-2)在小鼠食管中的表达,并通过RT-PCR法检测食管组织中相关炎症因子mRNA的表达量。结果CRS组小鼠体重增加量显著低于NC组,差异有统计学意义(t=4.28,P<0.05)。HE染色镜下观察发现CRS组小鼠食管粘膜上皮层增生,中性粒细胞及浆细胞浸润等炎症性改变,NC组未见明显异常;此外CRS组小鼠上皮细胞损伤及粘膜下炎症细胞评分均高于NC组,两组差异有统计学意义(t值分别为-4.16,-3.58,P值均<0.05);NC组与CRS组粘膜下水肿评分差异无统计学意义。免疫组化结果显示,PAR-2阳性着色细胞在大部分标本中均可见到,但CRS组小鼠组织中阳性着色较NC组染色深且丰富。Western blot法检测结果表明,CRS组食管标本中PAR-2蛋白质表达量显著高于NC组,差异有统计学意义(t=-19.67,P<0.05)。RT-PCR实验结果表明,CRS组PAR-2 mRNA表达水平高于NC组,差异有统计学意义(t=-15.40,P<0.05);与NC组相比,CRS组炎症相关因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、白IL-8及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-αmRNA表达水平升高,差异有统计学意义(t值分别为-7.94,-17.82,-25.54,P值均<0.05)。通过Pearson相关性分析得知,CRS组小鼠食管中PAR-2 mRNA相对表达倍数分别与炎症细胞因子IL-1β,IL-8,TNF-α之间有正相关关系,相关性具有统计学意义(r值分别为0.90、0.95、0.98,P值均<0.05)。结论心理应激可能通过致敏PAR-2受体介导食管高敏感性的形成,并引起食管炎症的发生。

腹腔镜手术治疗食管裂孔疝合并缺铁性贫血26例临床报告

目的评价食管裂孔疝合并缺铁性贫血患者腹腔镜下修补食管裂孔疝后纠正贫血效果。方法回顾性分析2006年6月至2014年2月,新疆维吾尔自治区人民医院26例食管裂孔疝合并缺铁性贫血患者,施行腹腔镜下食管裂孔疝修补手术前、后血红蛋白变化的临床资料,并根据术后定期随访复查血常规结果,了解贫血纠正情况。结果 26例食管裂孔疝合并缺铁性贫血患者均施行食管裂孔疝修补术,无中转开腹,术后1、3、6、12个月门诊随访复查血常规,26例患者贫血均有明显改善,其手术前、后血红蛋白含量分别为(82.73±14.04)g/L,(120.88±8.94)g/L,2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论食管裂孔疝是缺铁性贫血的病因之一,腹腔镜下食管裂孔疝修补术可有效地治疗食管裂孔疝合并缺铁性贫血。

抗反流手术对体重的影响

目的观察腹腔镜Nissen胃底折叠术对体重的影响。方法回顾性分析2017年11月至2018年12月,新疆维吾尔自治区人民医院收治的73例食管裂孔疝合并胃食管反流病患者接受腹腔镜Nissen胃底折叠术后对体重的影响。结果本组患者顺利完成手术,无中转开腹;平均手术时间71.5(62~95)min,术后平均住院时间4.3(4~7)d。73例患者术后胃食管反流症状明显缓解,均停用抑酸药物。73例患者术前,术后3、6、12个月体重分别为(76.78±12.16)、(72.19±10.91)、(70.33±10.62)、(70.63±10.33)kg;术前,术后3、6、12个月体质量指数(BMI)分别为(27.40±4.17)、(25.77±3.85)、(25.11±3.76)、(25.22±3.68)kg/m^2。在整个随访期间总平均减重6.15kg。结论腹腔镜Nissen胃底折叠术具有显著的减重效果。

不同亚型胃食管反流病食管黏膜下层炎症因子变化特点研究

目的分析3种亚型胃食管反流病患者与对照组食管黏膜的组织变化和局部IL-4、IL-6表达,探讨Th2型炎症因子在胃食管反流病发生发展中的作用。方法选取2016年12月至2017年12月新疆维吾尔自治区人民医院69例患者临床资料,根据Gerd Q评分和内镜结果将所有入选研究者分为Barrett食管(BE)、糜烂性食管炎(EE)、非糜烂性反流病(NERD)和对照4组,利用食管24 h pH监测法评价胃食管反流病(GERD)患者食管酸暴露及反流特点;通过食管组织HE染色进行组织病理学评分,使用免疫组化法和酶联免疫吸附剂测定法检测食管局部及血清中IL-4、IL-6表达情况。结果食管24 h pH监测结果中,3亚组间DeMeester指数、弱酸反流次数、反流总事件数比较,差异均无统计学意义(P均>0.05),NERD组酸反流次数较其余2组低,差异有统计学意义(P均<0.05);4组样本食管黏膜组织病理学评分中发现,BE组、EE组与其余2组相比均明显升高,差异有统计学意义(P均<0.05),BE组与EE组评分之间亦有显著差异(P<0.05),NERD组与对照组间差异不明显;IL-4在4组食管标本中均有不同程度表达,但4组间IL-4阳性率的比较并无显著差异(P均>0.05);IL-6在NERD组和对照组表达量较低甚至不表达,EE组IL-6阳性率明显高于对照组(P<0.05),但与NERD组间无显著差异,BE组阳性率与对照组和NERD组之间均有明显差异(P均<0.05)。结论 GERD食管黏膜上皮组织学炎症等级随食管炎的恶化而升高,其中NERD的食管组织学已出现炎性化趋势,但尚不足以与正常食管区别;IL-4在不同亚型GERD食管黏膜组织中的表达差异不及IL-6显著。

Nox-4在慢性束缚应激致小鼠胃黏膜炎症损伤发生中的作用

目的探讨NADPH氧化酶Nox-4在慢性束缚应激诱导胃黏膜炎症损伤发生中的作用。方法雄性SPF级昆明小鼠随机分2组(每组10只),即慢性束缚应激(Stress)组和正常对照(Control)组。Stress组小鼠每天在自制式束缚器中限制活动2 h,其余时间两组小鼠在相同环境中自由饮水摄食,实验持续14 d。通过HE染色在光镜下观察胃黏膜组织病理学改变,采用免疫组化方法观察Nox-4在小鼠胃黏膜中的表达,实时定量RT-PCR和Elisa法检测胃黏膜组织中Nox-4、抗氧化蛋白(Mn-SOD、GSH、Catalase)及炎性因子(IL-8、IL-1β、TNF-α)等指标的mRNA相对表达量及其在血液释放浓度。结果Stress组小鼠胃黏膜固有层和腺体上皮内出现基底细胞增生,中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及浆细胞浸润反应和炎性改变,而Control组小鼠胃黏膜未发现明显异常。Nox-4免疫染色阳性细胞在Stress组小鼠胃黏膜中表达较Control组染色深且丰富,主要表达于黏膜固有层及腺体上皮内。Stress组小鼠胃黏膜组织中Nox-4 mRNA表达水平是Control组的(2.42±0.51)倍,其血清释放浓度为Control组的(2.23±0.67)倍,差异有统计学意义(t=-46.32,P<0.001)。两组小鼠胃黏膜抗氧化蛋白的RT-PCR实验结果显示,Stress组Mn-SOD、GSH、Catalase的mRNA转录水平明显低于Control组的分别为[Mn-SOD:(0.59±0.10),GSH:(0.58±0.11),Catalase:(0.57±0.09)倍],差异有统计学意义(t=13.51,11.67,15.01,P<0.01)。两组小鼠胃黏膜炎性因子的RT-PCR实验结果显示,Stress组IL-8、IL-1β、TNF-α的mRNA转录水平显著高于Control组的分别为(IL-8:1.47±0.34,IL-1β:1.48±0.42,TNF-α:1.51±0.37)倍,差异有统计学意义(t=-18.45,-19.14,-20.85,P<0.001)。两组炎性因子(IL-8、IL-1β、TNF-α)的Elisa结果显示;Stress组炎性因子血清中释放水平明显上升,分别是Control组的(2.25±0.37)、(3.59±0.45)、(3.41±0.34)倍,均差异具有统计学意义(t=-47.11,-79.36,-96.32,P<0.01)。Pearson相关性分析结果显示,Stress组Nox-4血清浓度与炎性因子(IL-8、IL-1β、TNF-α)血清浓度之间存在正相关(r=0.97,0.99,0.98,均P<0.01)。Spearman等级相关分析胃黏膜炎症分级与血清Nox-4及炎性因子指标(IL-8、IL-1β、TNF-α)浓度呈正相关(r=0.96,0.92,0.91,0.94,均P<0.01)。结论慢性束缚应激引起Nox-4高水平表达,进而导致胃黏膜炎症性损伤。

慢性束缚应激诱导脂肪Nox-4表达及其在脂肪炎症发生中的作用

目的探讨慢性束缚应激诱导脂肪组织NADPH氧化酶4(Nox-4)表达及其在脂肪炎症发生中的作用。方法雄性SPF级20只昆明小鼠随机分2组(每组10只),即束缚应激组和正常对照组。束缚应激小鼠每天在自制式束缚器中限制活动2h,持续14天。采用HE染色、免疫组化、RT-PCR及ELISA等试验方法检测脂肪组织和血液中Nox-4,巨噬细胞表面标志物(CD11b、CD68、F4/80),抗氧化蛋白(Mn-SOD、GSH-Px、Catalase),脂肪细胞因子(脂联素、MCP-1、IL-6、TNF-α)等指标的表达。结果应激小鼠腹股沟脂肪垫白色脂肪组织(WAT)与对照组相比显著缩小。应激组WAT出现大量的单核细胞、中性粒细胞浸润反应和炎症性改变。应激组WAT组织中CD11b阳性细胞的比例及F4/80、CD68的mRNA表达水平显著升高。应激组FFA释放的浓度显著增高,约对照组的2倍(P<0.01)。Nox-4主要表达于脂肪细胞中,应激组Nox-4的mRNA表达和血清浓度显著高于对照组(P<0.01);应激组WAT组织中脂联素的mRNA表达与对照组相比显著降低(P<0.01);应激组WAT组织中MCP-1、IL-6及TNF-α的mRNA表达与对照组相比显著增高(P<0.01)。结论心理应激导致脂肪氧化、抗氧化系统破坏,使得脂肪细胞因子表达异常,进而引起脂肪组织炎症。

丙二醛在胃食管反流病食管黏膜炎症发生中的表达及作用机制

目的探讨丙二醛(MDA)在不同类型胃食管反流病(GERD)患者食管黏膜中的表达及其在食管炎症发生中的意义。方法按照纳入、排除标准选取2017年12月至2018年10月间在新疆维吾尔自治区人民医院住院治疗的42例GERD患者设为研究组,同期完成体检的8例健康受试者设为健康对照组。GERD组行GERDQ评分、24 h pH监测、高分辨率食管测压监测并内镜下取食管齿状线上3 cm处的局部黏膜作为标本,研究组根据检查结果分为非糜烂性反流病(NERD)组(17例)和糜烂性反流病(RE)组(25例),后续采用HE染色、免疫组化、qRT-PCR、ELISA等方法检测组织炎症程度、MDA、抗氧化酶[锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)]以及促炎因子[单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]的相对表达量。结果三组之间BMI差异无统计学意义(P> 0. 05)。食管24 h pH监测比较得知,RE组患者弱酸反流(4 0. 05)。RE组食管黏膜组织出现不同程度的免疫细胞(中性粒细胞,嗜酸性粒细胞)的浸润、乳头延长、水肿等炎症性改变;RE组炎症评分达到高峰,并高于NERD组,差异有统计学意义(P <0. 001)。NERD、RE两组MDA阳性表达的细胞数多于对照组,其中RE组MDA表达几乎覆盖全层食管;NERD组和RE组中血清MDA浓度明显高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 001),而RE组血清MDA浓度达到高峰,与NERD组比较差异有统计学意义(P <0. 01)。抗氧化酶(Mn SOD、GSH、CAT)的mRNA相对表达量在NERD组、RE组中明显降低,三组之间差异有统计学意义(P <0. 001)。与NERD组比较,RE组Mn SOD和CAT mRNA表达水平明显降低(P <0. 01)。促炎因子(MCP-1、IL-8、TNF-α)的mRNA相对表达量在NERD、RE两组中明显升高,三组之间差异有统计学意义(P <0. 001)。与NERD组比较,RE组促炎因子的表达显著升高(P <0. 01)。结论 MDA在不同类型GERD患者中表达量明显升高,可能与酸反流引起食管炎症的发生密切相关。

纤维化因子及NADPH氧化酶在心理应激诱导小鼠的食管纤维化中的表达及意义

目的研究胶原蛋白1(colla-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX-4)在慢性束缚应激(CRS)模型小鼠食管中的表达水平,探讨心理应激诱导食管纤维化的发生及氧化应激所产生的影响。方法 20只雄性SPF级昆明小鼠随机分2组,即CRS组和对照组。CRS组小鼠每天在自制式束缚器中限制活动2 h,其余时间两组小鼠在相同环境中自由饮水摄食,实验持续14 d。通过Masson染色在电子显微镜下观察食管组织纤维化改变。采用免疫组化、实时定量RT-PCR、ELISA法检测NOX-4在小鼠食管中的表达,并通过实时定量RT-PCR法检测食管组织中纤维化因子colla-1、TGF-β1及α-SMA mRNA的表达量。结果与对照组小鼠相比,CRS组小鼠体重增加量低于对照组[(8.75±1.69)g vs (12.69±3.16)g],差异有统计学意义(t=3.11,P<0.05)。Masson染色镜下观察可见:CRS组小鼠食管黏膜上皮细胞间明显的纤维化表现,而对照组未见明显异常;免疫组化结果显示:NOX-4阳性着色细胞在大部分标本中均可见到,CRS组小鼠食管组织中阳性着色较对照组染色深且丰富;ELISA法检测结果表明,CRS组小鼠血清中NOX-4表达量明显高于对照组(1.42±0.05 vs 0.49±0.08),差异有统计学意义(t=-27.32,P<0.01)。实时定量RT-PCR实验结果表明,CRS组纤维化标志物(colla-1,TGF-β1,α-SMA)及NOX-4 mRNA表达水平是对照组的(2.43±0.36、2.78±0.13、2.24±0.18、2.48±0.40)倍,差异有统计学意义(t=-11.19、-38.86、-19.90、-10.37,P<0.01)。结论 colla-1、TGF-β1、α-SMA参与心理应激诱导食管纤维化的形成,而氧化应激在食管纤维化产生中具有重要的作用。

心理应激诱导NADPH氧化酶Nox-4在食管炎症发生中的作用

目的探讨心理应激诱导还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NADPH oxidase 4,Nox-4)介导的炎症因子表达及其在食管炎症发生中的作用。方法雄性SPF级20只昆明小鼠随机分为慢性束缚应激(Stress)组和正常对照(Control)组,每组10只。Stress组小鼠每天在自制式束缚器中限制活动2 h,其余时间两组小鼠在相同环境中自由饮水摄食,实验持续14 d。HE染色在光镜下观察食管黏膜组织病理学改变,免疫组化法和蛋白质印迹(WB)法检测小鼠食管中氧化应激指标Nox-4蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测食管黏膜组织中Nox-4、抗氧化蛋白[核因子E2相关因子2(Nrf-2)、Ⅰ型血红素氧合酶(HO-1)]及炎症因子[单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α]等mRNA的相对表达量。结果 HE染色光镜下发现,Stress组小鼠食管黏膜层出现基底细胞增生,中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及浆细胞等免疫细胞出现浸润反应和炎症性改变,而Control组小鼠食管全层未发现明显异常。食管黏膜组织损伤评分结果显示,Stress组小鼠食管黏膜损伤及黏膜下炎症细胞评分明显高于Control组(P<0.01)。免疫组化结果显示,Nox-4主要表达于食管固有层、黏膜及黏膜下层,Nox-4免疫染色阳性着色细胞在Stress组小鼠组织中较Control组染色深且丰富。Stress组小鼠食管黏膜中Nox-4 mRNA水平是Control组的(2.45±0.58)倍,其蛋白表达水平为Control组的(2.39±0.43)倍(P均<0.01)。Control组Nrf-2 mRNA表达水平为Stress组的(1.75±0.24)倍,HO-1的mRNA水平为Stress组的(1.81±0.31)倍(P均<0.01)。Real-time PCR实验结果显示,Stress组食管组织炎症因子MCP-1、IL-6、IL-8、TNF-α等mRNA表达水平明显上升,分别是Control组的(1.68±0.33)、(2.42±0.41)、(2.39±0.28)和(2.47±0.52)倍(P均<0.01)。结论心理应激可能直接导致食管氧化/抗氧化系统的平衡失调,使得促炎因子过量表达,进而引起食管炎症反应。

8-羟基脱氧鸟苷在胃食管反流病合并房颤患者食管组织中的表达及作用

目的探讨8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)以及炎症因子在胃食管反流病(GERD)合并心房颤动(AF)患者食管黏膜中的表达及其在AF发生中的意义。方法按照纳入、排除标准选取2017年1月至2018年11月间在新疆维吾尔自治区人民医院收治的90例患者设为研究组。同期完成体检的23例健康受试者设为对照组。研究组均行24 h动态心电图、24 h pH值监测、高分辨率食管测压监测并内镜下取食管齿状线上3 cm处的局部黏膜作为标本,后续采用HE染色、免疫组化、RT-PCR、ELISA等方法分析组织炎症程度、氧化损伤标记物8-OHdG及炎症因子[单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素(IL)-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α]的表达及血清浓度。结果根据患者的临床表现,内镜及24 h动态心电图检查,将其分为GERD合并AF组(AF组)、GERD不合并AF组(非AF组)和对照组。食管24 h pH监测比较显示,AF组弱酸反流(40.05)。光镜下观察发现,对照组黏膜组织形态基本完整,未见水肿或中性粒细胞等免疫细胞的浸润;非AF组可见中度中性粒细胞的浸润和炎症反应;而AF组食管黏膜组织出现不同程度的中性粒细胞,嗜酸性粒细胞等免疫细胞的浸润、乳头延长、水肿等炎症性改变。AF组炎症评分达到高峰,并显著高于非AF组(P<0.01)。免疫组化结果发现,对照组8-OHdG主要表达在食管上皮层、黏膜及黏膜下层,而AF组8-OHdG的表达几乎覆盖全层黏膜,表示严重的组织氧化损伤。RT-PCR和ELISA实验发现,与对照组相比,8-OHdG、MCP-1、IL-8、TNF-α的mRNA相对表达量以及其血清浓度,在非AF组和AF组中明显上升,且AF组中达到高峰,三组之间差异具有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关性分析得出,AF组中8-OHdG血清浓度分别与Demeester评分及MCP-1、IL-8、TNF-α血清浓度之间具有正相关关系(P<0.01)。结论 8-OHdG以及炎症因子(MCP-1、IL-8、TNF-α)在GERD合并AF患者食管黏膜的表达及血清浓度显著增高,可能与酸反流诱发AF的产生密切相关。

NADPH氧化酶Nox-4在不同亚型GERD患者食管上皮中的表达及DIS发生中的作用

目的探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶4(Nox-4)在不同亚型胃食管反流病(GERD)患者食管上皮中的表达及其在食管上皮细胞间隙增宽(DIS)发生中的意义。方法选取2017年10月至2018年8月在新疆维吾尔自治区人民医院住院的36例GERD患者设为研究组,同期完成体检的健康受试者9例设为对照组。GERD组行24hpH监测、高分辨率食管测压监测并内镜下取食管齿状线上3cm处的局部黏膜作为标本,后续采用HE染色、免疫组化、实时荧光定量反转录-聚合酶链式反应(real-timeRT-PCR)、酶联免疫吸附测定(ELISA)等方法检测细胞间隙、氧化应激(Nox-4)、核因子红系相关因子2(Nrf-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)以及紧密连接蛋白(TJ蛋白)[咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白-1(Claudin-1)、闭合蛋白-4(Claudin-4)及带状闭合蛋白-1(ZO-1)]的相对表达量。结果食管24hpH监测显示,RE组酸反流(pH≤4)次数以及DeMeester评分明显高于NERD组,差异有统计学意义(P<0.05)。RE组食管下段括约肌(LES)长度、LES静息压、LES残余压及食管远端收缩积分(DCI)等指标略高于NERD组,但两组比较无统计学差异(P>0.05)。对照组、NERD、RE组GERD患者光镜下测量的细胞间隙分别为(0.64±0.08)μm、(1.14±0.11)μm和(1.27±0.10)μm,两两相比均有统计学差异(P<0.01)。对照组、NERD、RE组三组间Nox-4mRNA和血清Nox-4浓度比较有统计学差异(P<0.01),RE组Nox-4mRNA和血清Nox-4浓度最高,对照组最低。Nrf-2、HO-1、Occludin、Claudin-1、Claudin-4及ZO-1mRNA表达水平在NERD组、RE组分别低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论TJ蛋白在不同亚型GERD患者中表达量明显降低,而这些蛋白的低表达可能与酸反流引起食管Nox-4的过量产生有关。

无症状髂静脉压迫的发生率及其临床特征

目的:探讨髂静脉压迫(IVC)在无症状人群中的发生率及其临床特征。方法:回顾性分析2018年8月至2019年8月香港大学深圳医院收治的无血管疾病而行全腹增强CT检查的患者的影像学及临床资料,于不同水平面测量髂静脉前后径,并根据公式计算出髂静脉受压程度。以受压程度50%为界分狭窄组与非狭窄组,分析比较两组在性别、年龄、体重指数(BMI)和凝血功能方面的差异。结果:共有692例患者纳入该研究,男性351例(50.7%),年龄(38.76±10.90)岁(范围:18~71岁),BMI(22.79±3.72)kg/m^(2)。IVC总体受压百分比中位数为43(19,65)%,不同受压程度所占的比例分别为:<25%者74例(10.7%),≥25%且<50%者368例(53.2%),≥50%且<75%者196例(28.3%),≥75%者54例(7.8%)。狭窄组与非狭窄组相比,性别、年龄、BMI、凝血酶时间及活化部分凝血酶时间在两组间有统计学差异(P均<0.05)。结论:髂静脉受压程度≥50%者在无症状人群中较为多见。男性、高龄、肥胖可能与髂静脉受压的发生相关。