超声测量肝门处囊肿最大宽度鉴别囊肿型胆道闭锁与先天性胆管扩张症的应用价值

目的探讨超声测量肝门处囊肿最大宽度鉴别囊肿型胆道闭锁(cystic biliary atresia,CBA)与先天性胆管扩张症(congenital biliary dilatation,CBD)的应用价值。方法回顾性分析2013年1月至2022年1月遵义医科大学附属医院收治的34例年龄小于150 d的肝门处囊肿患儿临床资料,根据术中胆道造影结果分为CBA组和CBD组,比较两组患儿一般情况、生化指标、术前超声特征、术中胆道造影及术中发现。采用受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线对各项指标诊断CBA的价值进行分析。结果34例肝门囊肿患儿中,CBA组14例,CBD组20例。两组间丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示术中测量肝门处囊肿最大宽度的诊断效能最高,其最佳截断值为2.4 cm;ROC曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)为0.98,敏感度和特异度分别为91.0%和95.2%;术中测量肝门处囊肿最大长度的最佳截断值为3.1 cm,AUC为0.95,敏感度和特异度分别为91.0%和85.2%。超声测量胆囊宽度的最佳截断值为0.7 cm,AUC为0.95,敏感度和特异度分别为91.0%和89.6%;超声测量肝门处囊肿最大宽度的最佳截断值为2.3 cm,AUC为0.92,敏感度和特异度分别为80.2%和85.9%;超声测量肝门处囊肿最大长度的最佳截断值为3.1 cm,AUC为0.89,敏感度和特异度分别为90.2%和78.8%。结论超声测量肝门处囊肿最大宽度有助于从出生后肝门处存在囊肿的黄疸患儿中诊断出CBA。若超声发现胆囊宽度较小且肝门处囊肿的最大宽度≤2.3 cm,患儿被诊断为CBA的可能性大,需早期进行胆道造影及手术治疗。

MEG3调控Rac1/Cdc42/PAK1信号通路在先天性巨结肠发病机制中的作用

目的 探讨LncRNA-MEG3及Rac1/Cdc42/PAK1信号通路在先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HSCR)发病机制中的作用及机制。方法 收集2016年1月至2018年12月在遵义医科大学附属医院病理确诊HSCR并手术治疗的患儿结肠组织标本30例为实验组(HSCR组),其中男23例,女7例;年龄为(18.86±1.78)个月;体重为(4.56±0.19)kg。收集非先天性消化道畸形、非肠神经相关疾病手术切除肠管患儿14例组织标本为对照组(Normal组),包括坏死性小肠结肠炎、嵌顿疝和肠套叠造瘘患儿在闭瘘手术时吻合处正常肠管,其中男10例,女4例;年龄为(16.73±1.03)个月,体重为(5.01±0.20)kg。采用qRT-PCR和Western blot检测HSCR组与Normal组中MEG3和Rac1/Cdc42/PAK1信号通路各蛋白的表达水平。在SH-SY5Y细胞中通过转染MEG3过表达质粒以及加入通路抑制剂AZA1构建细胞模型,并分为4组:①空白对照组(Control组),仅有SH-SY5Y细胞;②空载体组(pcDNA3.1组),SH-SY5Y细胞+pcDNA3.1质粒;③MEG3过表达组(MEG3组),SH-SY5Y细胞+pcDNA3.1-MEG3质粒;④抑制剂组(MEG3+AZA1组),SH-SY5Y细胞+pcDNA3.1-MEG3+AZA1抑制剂。采用Western blot、CCK-8和Transwell方法检测各组细胞中Rac1、Cdc42、PAK1及P-PAK1蛋白表达量以及细胞增殖和迁移能力。两组间数据在进行方差同质性检验后采用两独立样本t检验比较,多组数据之间的比较采用单因素方差分析。若总体方差不齐,采用修正的界限值或Tamhane's T2检验;非正态分布的计量资料,采用多独立样本比较的秩和检验。结果 HSCR患儿狭窄段肠管组织中MEG3、Rac1、Cdc42、PAK1和P-PAK1蛋白表达量均较Normal组低(Rac1:0.20±0.05比0.78±0.05,t=8.37;Cdc42:0.38±0.08比1.03±0.08,t=5.68;PAK1:0.27±0.02比1.10±0.06,t=13.52;P-PAK1:0.24±0.03比1.07±0.06,t=12.99;P均<0.01);在细胞模型中,MEG3组细胞中Rac1、Cdc42、PAK1和P-PAK1蛋白相对表达量均高于Control组和MEG3+AZA1组(Rac1:0.96±0.05比0.36±0.11比0.75±0.20,F=3.46,P<0.05;Cdc42:1.12±0.08比0.53±0.19比0.68±0.10,F=5.37,P<0.01;PAK1:1.02±0.09比0.55±0.14比0.47±0.14,F=5.60,P<0.05;P-PAK1:0.97±0.07比0.66±0.08比0.47±0.03,F=15.66,P<0.05),MEG3组细胞中MEG3表达量明显高于Control组和pcDNA3.1组(1.00±0.20比0.14±0.04比0.02±0.01,F=20.56,P<0.01),Control组和pcDNA3.1组中MEG3相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。MEG3组细胞增殖能力高于Control组及MEG3+AZA1组(12 h:0.19±0.00比0.19±0.00比0.18±0.00,P>0.05;24 h:0.21±0.00比0.19±0.01比0.17±0.00,F=12.00,P<0.01;48 h:0.30±0.02比0.26±0.00比0.22±0.01,F=9.60,P<0.05)。MEG3组细胞迁徙数量明显高于Control组(141.67±11.93比96.33±8.02,t=3.15,P<0.05),MEG3+AZA1组细胞迁徙数量低于MEG3组和Control组(71.00±7.00比141.67±11.93比96.33±8.02,F=15.04,P<0.01)。结论 低表达的MEG3可能通过调控Rac1/Cdc42/PAK1信号通路抑制神经嵴细胞增殖和迁移能力,可能与HSCR发生有关。

Ras相关的C3肉毒素底物1在神经嵴细胞中的作用研究进展

Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)是Rho三磷酸鸟苷(GTP)酶家族的成员,具有GTP酶活性,是多种细胞信号转导过程中的"分子开关",可参与细胞迁移、黏附、增殖及凋亡等过程。Rac1可通过调控神经嵴细胞的肌动蛋白的聚合、膜突起的形成等过程影响神经嵴细胞的迁移,进而可能与先天性巨结肠、心脏流出道缺陷等神经嵴迁移异常的疾病有关。现就Rac1的主要生物学功能及其在肠神经嵴细胞发育机制中的研究进行综述。

LncRNA-MEG3及Rac1/Limk1/Cofilin信号通路在先天性巨结肠中的作用机制

目的探讨母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)及Rac1/Limk1/Cofilin信号通路在先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HD)中的作用机制。方法应用qRT-PCR、Westernblot方法检测2018年1月至2021年1月在遵义医科大学附属医院治疗并确诊为HD的30例患儿HD狭窄段、30例移行段组织和14例正常肠管组织中MEG3和Rac1/Limk1/Cofilin表达情况,并通过建立MEG3过表达组、溶剂组、对照组及Rac1、Limk1、Cofilin抑制组细胞模型,观察Rac1、Limk1及Cofilin蛋白表达情况及细胞迁移和增殖能力。结果狭窄段、移行段MEG3、Limk1和Cofilin的RNA相对表达量较正常肠管组织低(P<0.05),而移行段与狭窄段比较,差异无统计学意义(P>0.05);Rac1的相对表达量比较:正常肠管>移行段>狭窄段,差异有统计学意义(P<0.05)。狭窄段、移行段Rac1、Limk1和Cofilin蛋白表达水平与正常肠管组织比较均明显降低(P<0.05),而移行段与狭窄段比较,差异无统计学意义(P>0.05)。MEG3过表达组MEG3的表达量明显高于对照组及溶剂组(P<0.05);MEG3过表达组Rac1、Limk1的相对表达量均明显高于对照组及溶剂组(P<0.05);MEG3过表达组Cofilin相对表达量与对照组、溶剂组比较无明显差异(P>0.05)。MEG3过表达组Rac1和Cofilin蛋白的相对表达量明显高于溶剂组和对照组(P<0.05),MEG3过表达组Limk1的表达量与对照组比较无明显差异(P>0.025);MEG3过表达组细胞的迁移数量明显高于对照组和溶剂组(P<0.05)。对照组Rac1、Limk1、Cofilin的蛋白表达量明显高于Rac1、Limk1和Cofilin抑制组(P<0.05),对照组细胞的迁移数量明显高于Rac1、Limk1、Cofilin抑制组(P<0.05)。结论MEG3可通过促进Rac1、Limk1和Cofilin基因表达影响神经嵴细胞的迁移,进而与先天性巨结肠发病有关。