量子点标记肺炎支原体重组蛋白抗体检测抗原方法的建立

目的建立一种用CdSe/ZnS量子点标记技术用于肺炎支原体检测的方法。方法用重组Mp P1蛋白免疫动物制备免疫血清,硫酸铵沉淀法及离子层析法纯化IgG抗体,纯化抗体用CdSe/ZnS量子点标记,离心沉淀法纯化标记产物。用标记抗体检测Mp抗原。结果量子点标记抗体直接玻片荧光法检测Mp抗原具有较高的敏感性(检测灵敏度在0.001μg/mL),且与呼吸道常见病原菌无交叉反应。结论成功建立量子点标记技术检测肺炎支原体抗原方法,具有操作简单、检测快速的优良,适用于Mp感染的早期诊断。

重组肺炎支原体CARDS毒素蛋白临床检测应用的初步研究

目的初步探讨肺炎支原体CARDS毒素蛋白在检测肺炎支原体感染中的应用价值。方法 PCR扩增CARDS毒素基因并连接到PMD-19-T载体,经酶切、PCR及核苷酸测序分析后,将CARDS毒素基因片段克隆到pGEX-6p-1表达载体内并转入受体菌。IPTG诱导大肠埃希菌BL21重组株(pGEX-6p-1-CARDS)的表达。GST柱层析纯化重组CARDS毒素蛋白,以该重组蛋白和重组P1蛋白为抗原建立间接ELISA方法,检测85份感染肺炎支原体的血清标本,并与重组P1蛋白的ELISA结果进行比较。结果 CARDS毒素蛋白表达载体构建成功并表达大小为43kDa的重组蛋白,Western blot测定其能与兔抗Mp多价抗血清发生反应。ELISA结果显示,CARDS毒素蛋白的阳性率为70.59%(60/85),重组P1蛋白的阳性率为63.53%(54/85)。结论本研究成功构建了CARDS毒素蛋白表达载体并获得了稳定表达的重组菌株;在诊断肺炎支原体感染的血清学ELISA试验中,重组CARDS毒素蛋白的敏感性高于重组P1蛋白,为Mp感染的诊断提供了新的可用抗原。