基于CRISPR-Cas9系统构建LEU1基因缺失酿酒酵母用于酿造低醉酒度米酒

为探究酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)异丙基苹果酸合成酶基因LEU1的缺失对酿造米酒生成高级醇的影响,该研究构建重组质粒p414-Cas9-BleoR和p426-gRNA.LEU1-kanMX后电转化酿酒酵母XF0,利用成簇规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR-Cas9)系统构建LEU1基因缺失的酿酒酵母XF0-L。将出发菌株XF0和重组菌株XF0-L进行培养基模拟发酵和米酒发酵,测定发酵酒的理化指标和高级醇含量。结果表明,菌株XF0-L与XF0模拟发酵酒的理化指标无显著差异(P>0.05),说明LEU1基因的缺失对酿酒酵母发酵性能无影响。相较于出发菌株XF0,重组菌株XF0-L模拟发酵酒中正丙醇(26.27 mg/L)和异丁醇含量(88.64 mg/L)分别提高21.96%和85.25%,异戊醇含量(141.82 mg/L)、异戊醇/正丙醇(5.39)、异戊醇/异丁醇(1.60)分别降低15.53%、30.99%、54.42%;相较于出发菌株XF0,重组菌株XF0-L发酵米酒中正丙醇(268.67 mg/L)和异丁醇含量(992.33 mg/L)分别提高14.17%、52.90%,异戊醇含量(1016.33 mg/L)、异戊醇/正丙醇(3.78)、异戊醇/异丁醇(1.02)分别降低13.58%、24.40%、43.65%,说明重组菌株XF0-L能够显著降低发酵酒中的异戊醇/正丙醇、异戊醇/异丁醇从而降低醉酒度(P<0.05)。

果胶甲酯酶抑制剂的异源表达及其在果酒降甲醇中的应用

该文从猕猴桃中克隆出果胶甲酯酶抑制剂(Pectin Methylesterase Inhibitor,PMEI)基因,经EcoRI/XbaI双酶切后连接到表达载体pPICzαA上,电转化到毕赤酵母GS115筛选出阳性菌株GS115/pPICzαA-PMEI,并将重组酵母表达的PMEI浓缩纯化后应用于果酒发酵。研究结果表明:重组毕赤酵母表达菌株GS115/pPICzαA-PMEI成功构建,PMEI的发酵表达量为35.38 mg/L。将PMEI应用到果酒发酵中,桔子酒甲醇降低47.54%,含量由189.75 mg/L降低到99.55 mg/L;苹果酒甲醇降低21.52%,含量由118.15 mg/L降低到91.20 mg/L;葡萄酒甲醇变化不显著,含量均低于20.00 mg/L,表明PMEI对果胶丰富且内源性果胶酶强的桔子具有明显的降甲醇效果。桔子酒发酵工艺优化的PMEI最低抑制质量浓度8.84 mg/L,最适温度18℃,此时桔子酒中的甲醇降低66.40%到89.10 mg/L。这为低甲醇果酒的发酵提供了新的技术路线。

盐藻生长及其β-胡萝卜素累积的作用因子和最适条件探讨

从收集到的 3株盐藻中筛选到一株 β 胡萝卜素含量最高的品系 ,对其进行正交实验的结果表明 ,环境因子影响细胞生长的顺序为NaHCO3 >光照 >盐度 >FeCl3 >KNO3 >K2 HPO4>微量元素 >温度 ,影响细胞 β 胡萝卜素累积顺序为光照 >盐度 >K2 NO3 >温度 >K2 HPO4>NaHCO3 >FeCl3 >微量元素。获得了细胞生长、β 胡萝卜素累积和 β 胡萝卜素最大产量的 3个最适作用条件。

酒曲中生香酵母的分离鉴定与产酯工艺优化

用添加30U/mL硫酸链霉素抑制霉菌方法从酒曲中富集和筛选出具有典型酵母菌落特征的菌株,通过鉴定实验确定为生香酵母。选取其中10株进行发酵,比较它们发酵酒的酒精度、总酸和总酯,筛选出酒精度和总酯含量最高的菌株是Y2-7。通过发酵条件优化和小试,得到蒸馏酒(60%,v/v)中总酯含量达2.1g/L,酒液酯香明显。

二步法培养盐藻生产天然β-胡萝卜素的研究

将盐藻在最适生长条件下培养4～5天后，逐渐过渡到β－胡萝卜素最适累积条件下，结果表明；二步法培养所获得的β－胡萝卜素比最适条件下直接培养的高出46％，二步露天培养的β－胡萝卜素产量达到38．5mg／L，比高密度粗放直接培养所得到的产量高出1倍以上，说明二步法的实际应用是可行的。

利用盐藻(Dunaliella)培养生产β-胡萝卜素

盐藻是一种高含β胡萝卜素的广盐性微藻。本文介绍了β胡萝卜素的功能、生产方法、盐藻的生物学特征。

甘蔗麦芽蒸馏酒酿酒工艺的研究

本文对用甘蔗汁与麦芽汁酿造蒸馏酒的工艺进行了研究。结果表明用甘蔗原汁含量为650mL/L、麦芽汁浓度为6oP、糖度为170g/L的发酵液在18℃发酵7d(酿酒酵母的接种量为1x107 cfu/mL),效果最好。蒸馏两次可将原酒的酒精度由10%vol提高到70～75%vol,再用纯净水或软化水将酒稀释到酒精度53%vol或40%vol,然后进行1年以上的陈酿可获得甘蔗香、麦芽香和酒香协调的新型蒸馏酒。

海洋微生物天然活性物质的开发应用进展

综合课题研究和国内外文献资料报道概括了海洋微生物及其天然活性物质的开发和应用现状、海洋微生物天然活性物质的研究开发方法及其开发和应用前景。

海洋微生物药物的开发和应用

概要介绍了海洋微生物药物的开发和应用现状、海洋微生物药物的研究开发技术和方法 ,并展望了海洋微生物药物及其资源的开发和应用前景。

固定化酿酒酵母发酵香蕉酒的研制

介绍了以香蕉为原料采用固定化酿酒酵母发酵香蕉酒的工艺 。

人源抗HBsAg单链抗体与干扰素嵌合基因的构建及表达

采用重叠PCR技术 ,将人源性抗HBsAg单链抗体基因与干扰素 γ 基因用柔性肽段碱基连接成单一基因 .序列测定结果表明 ,克隆的基因与理论上的一致 ,并将此基因成功构建到酵母表达载体pPICZαA上 ,进而转化到巴斯德毕赤酵母 (PichiaPastoris)X33中 .筛选出的菌落经甲醇诱导培养 ,对上清液进行SDS PAGE和WESTERNBLOT分析 ,在 4 20 0 0处可见蛋白表达带 。

发酵型杨梅酒的研制

研究了杨梅酒发酵的工艺及关键参数 ,结果为 :驯化果酒酵母的接种量为 8% ,偏重亚硫酸钾 4 0mg/L ,主发酵 2 0℃ 4d 。

金樱子酒的研制

研究了金樱子酒发酵的工艺及其关键参数,结果为60℃、80℃和100℃下连续浸提果汁,接种量2%,主发酵20℃,4d,后酵15℃,10d,可获得具有金樱子果香和酒香的金樱子酒。

工程酵母X4分泌表达HBscFv-IFNγ的发酵工艺优化

为提高工程菌-毕赤酵母X4诱导表达HBscFv-IFNγ(抗乙肝病毒表面抗原单链抗体-γ干扰素,single-chain Fv against HBVsurface antigen-γ-interferon)的量,本实验通过单因素和正交实验来优化发酵工艺,确定了X4表达HBscFv-IFNγ的最优工艺条件:150mL摇瓶培养84h,甲醇添加量2.2%(v/v),接种后的OD600=6.5,装液量20mL。使HBscFv-IFNγ的产量由起始的15mg/L提高到21.14mg/L,提高达40.9%。这为进一步对HBscFv-IFNγ的纯化、药效研究和高密度培养奠定了基础。

HBscFv-IFNγ在毕赤酵母X33中的表达、纯化及鉴定

为了有效治疗乙肝病而研究了将抗乙肝病毒表面抗原单链抗体(single-chain Fv against HBV surface antigen,HBscFv)与临床治疗乙肝常用的γ-干扰素(γ-interferon,IFNγ)连接的融合蛋白(HBscFv-IFNγ)。采用重叠PCR法将基因hbscfv与ifnγ连接成hbscfv-ifnγ,再构建成多拷贝重组质粒pPICZαA/(hbscfv-ifnγ)1,2,4,然后转入巴斯德毕赤酵母X33。从中筛选出的工程菌株X4能够分泌表达目的蛋白HBscFv-IFNγ,并用SDS-PAGE、Western blotting和ELISA方法进行了初步鉴定,结果表明组成HBscFv-IFNγ的HBscFv和IFNγ仍具有生物学活性。用14F7亲合层析纯化X4的发酵液可获得纯度达95%～98%的HBscFv-IFNγ。它可中和HBV转基因小鼠血清中27.9%的乙肝病毒表面抗原(HBV surface antigen,HbsAg),这表明HBscFv-IFNγ上的抗体能够与生物体内的HBV有效结合。可见,HBscFv-IFNγ将是一种防治乙肝病而有开发前景的靶向新药。

中国啤酒发展的预测模型及分析

通过分析中国啤酒发展历史、影响因素和具体数据 ,建立了中国啤酒发展的预测模型 ,并计算出预测结果 。

控制啤酒中高级醇含量的研究

研究和分析了啤酒中高级醇的生成和控制措施,主要通过改良酿酒酵母、优化发酵工艺和培养基组成等措施来降低啤酒中的高级醇,达到提高啤酒质量和降低生产成本的目的。

从广东市场看中国啤酒的发展及策略

广东啤酒市场作为中国啤酒市场发展的典型代表之一,这要求企业家为了啤酒市场的持续繁荣发展,应对主要影响企业发展的市场策略、市场拓展策略、利润最大化策略等进行深入的分析研究和优化。

酿酒酵母的基因改良

酿酒酵母的发酵性能直接影响到酒的质量与生产成本。利用基因工程改良酿酒酵母可提高其生产性能。基因改良酿酒酵母的研究和应用有:①增加酿酒酵母发酵性能的基因改良,如:构建含α-乙酰乳酸脱羧酶基因的低双乙酰工程酵母;含乙醇乙酰酶基因的高生香工程酵母;含糖化酶、葡聚糖酶等基因的高发酵度工程酵母;高絮凝性工程酵母和嗜杀酵母。②增强或缺失酵母自身基因的菌种改良,如构建高级醇低生成量的工程酵母和构建双乙酰低生成量的工程酵母。