链霉亲和素的产生、纯化和鉴定

本文报道链霉亲和素(streptavidin.SA)的产生、纯化和主要特性鉴定。根据Streptomycesavidinii菌对碳、氮源的需求,配制成特定培养基,在28℃±1℃摇床培养S。avidinii 10天,SA产量为10～50mg/L。用2-亚氨基生物素琼脂糖凝胶层析纯化,每升培养上清平均可提取SA20～30mg。所得SA电泳出现2～3条区带,分子量为64562,等电点为6.0,紫外吸收扫描图谱与Sigma产品相似,SA活性平均为14.4 μg/ml,表明自制SA可供实际应用。

金褐霉素(Aureofuscin)在人工脂双层形成的离子通道

本工作利用双室系统观察了金褐霉素对平板脂双层(Planar lipid bilayer)的作用。双室系统包括一个带直径为700μm 小孔的 Teflon 薄膜中隔,和由它隔开的两个充满盐溶液的小室。用脂双层(成膜液为卵磷脂和胆固醇的正癸烷溶液,重量比4∶1)覆盖小孔,在电压箝位下,研究脂双层的电学和通透性质。记录金褐霉素产生的电导变化和单通道电流。实验观察到,在将金褐霉素(终浓度10—20μg/ml)加入小室,20min 左右可记录出通道样活动噪音,脂双层膜电阻下降。它们的发生不依赖于跨膜电位差和离子浓度梯度的存在。将加入的金褐霉素的浓度降低至1.4μg/ml,可获得离散的单位电导涨落的记录。在对称100mmol/L 的 KCl 溶液中,这种单通道活动的优势电导为4—6pS。通过改变两小室的离子浓度,测定平衡电位,可由 Goldmann-Hodgkin-Katz 电场方程推算出通道的离子选择性。结果表明,金褐霉素在脂双层形成的离子通道对 K^+比对 Cl~有较高的通透性(P_K:P_(Ol)≈5.2)。这些结果为金褐霉素增加神经末梢的递质释放,降低肌细胞膜电位,以及为它在临床上的抑菌作用提供了解释。

高效液相色谱在生物医药研究中的应用——第九讲 抗生素的分离与测定

抗生素是一类微生物次级代谢活性产物。目前工业上大都采用发酵法进行生产,或将发酵产物经化学修饰后形成产品。至今从土壤微生物中发现的抗生素已超过7000种,其中成为临床药品的约90余种,年产值达160亿美元,是临床上一类重要药物。 在考虑与选择抗生素药物的测定方法时,需考虑它们的以下几个特点: 1.抗生素产生菌的发酵过程是一个复杂的生物合成过程。有众多的酶参与各级反应。

微生物耐抗菌素的研究进展(三)

氨基糖甙抗菌素的失活酶载有 R

自制链霉亲和素的纯化和特性

应用生物素亲和层析法从streptomyces avidinii菌培养液中纯化链霉亲和素(SA),经反复试验.1L培养液中平均约含36mgSA,2-亚氨基生物素琼脂糖珠4B凝胶的结合客量为3.8～5.2mg/ml,解离波为pH 4.0 50mmol/L醋酸铵,从凝胶上解离回收的纯化SA量为20～42mg,平均回收率为80.5％,蛋白活性为14.4U/mg。经鉴定所得SA的分子量为63241,比消光系数为E^(1％)_(280)=33.56,每分子SA可结合4分子生物素,制备的SA-HRP用于ELISA所得P/N值比AV-HRP提高一倍,酶结合物的效价在8个月中保持80％以上。

微生物次级代谢活性产物

生物活性物质的探索与研究是生命科学的重要一环。在自然界生态体系中,包括人类在内的生物群体(动物、植物、微生物)以及个别生物个体内,均存在着影响其自身与异体的某些介质(mediator)。这种介质通常称之谓生物活性物质。如各种激素、抗生素、信息素、毒素以及高等动物与植物机体内各种内源性活性物质等。微生物在自然界物质再循环中起着重大的作用。尤其是土壤微生物在生物降解中扮演重要角色。如不少嗜热放线菌可产生纤维素酶、木聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶与木质素酶而具有降解木质素、纤维素等多聚物的能力。近期研究表明:某些链霉菌具有液化褐煤的活性。