自噬对B细胞淋巴瘤细胞耐药性的影响

目的:探讨细胞自噬对不同种人源淋巴瘤细胞耐药性的影响。方法:以人Burkitt’s淋巴瘤细胞Daudi、人B淋巴瘤细胞SUDHL-4和人套细胞淋巴瘤细胞Je Ko-1为研究对象,通过自噬抑制剂处理细胞和慢病毒稳定感染干扰Atg5基因的表达,改变B细胞淋巴瘤细胞的自噬活性,并观察淋巴瘤细胞对ADR和VCR的耐药性的变化。结果:Je Ko-1细胞对ADR和VCR具有较强的耐药性,SUDHL-4次之,Daudi细胞对ADR和VCR的耐药性最弱。同时,Je Ko-1细胞自噬活性也最强,SUDHL-4次之,Daudi细胞自噬活性最弱。自噬抑制剂处理或稳定干扰Atg5基因的表达后,淋巴瘤细胞对ADR和VCR的耐药性显著降低,且耐药性降低程度与淋巴瘤细胞本身自噬活性呈正相关。结论:自噬可以增强淋巴瘤细胞Daudi、SUDHL-4和Je Ko-1对ADR和VCR的耐药性,自噬活性越高,淋巴瘤细胞的耐药性越强。

Jeko-1细胞株中边群细胞的免疫表型、干细胞基因和集落形成能力的生物学特点

目的:初步探讨套细胞淋巴瘤中边群细胞的体外细胞生物学特性。方法:利用流式细胞术分选结合连续培养富集JeKo-1细胞中的边群细胞,并对其进行CD19、IgM免疫表型分析;用qRT-PCR进行基因验证及集落形成实验了解边群细胞及非边群细胞基因表达及体外自我更新能力的差异。结果:通过连续分选结合培养的方法可以富集JeKo-1细胞株中的边群细胞,且边群细胞中包含比例不同的4群细胞:CD19^-/IgM^-为(2.79±0.82)%,CD19^-/IgM^+为(70.99±13.61)%,CD19^+/IgM^-为(0.55±0.25)%,CD19^+/IgM^+为(25.67±14)%。Bmi-1、CD133、C-MYC、Nanog基因在边群细胞高表达,而在非边群细胞中低表达(P<0.05)。边群细胞具有更强的体外集落形成能力(P<0.05)。结论:套细胞淋巴瘤JeKo-1细胞株含有边群细胞,该群细胞可通过连续分选及培养进行富集后用于研究;JeKo-1中的边群细胞具有更强的干性基因及体外自我更新能力,并含有4种免疫表型不同的细胞群体:CD19^-/IgM^-、CD19^-/IgM^+、CD19^+/IgM^-、CD19^+/IgM^+。

miRNA-18a和miRNA-4802通过自噬抑制淋巴瘤细胞耐药性的机制研究

目的研究miRNA-18a和miRNA-4802通过自噬对淋巴瘤细胞耐药性的调控机制。方法以人Burkitt’s淋巴瘤细胞Daudi和人套细胞淋巴瘤细胞JeKo-1为研究对象,阿霉素(ADR)、长春新碱(VCR)为实验药物。以ADR、VCR处理后,采用CCK-8法考察上述2种细胞的相对活性,采用Western blot法检测凋亡标志蛋白活化型胱天蛋白酶9(cleaved caspase-9)和cleaved caspase-6的表达,考察2种细胞对ADR、VCR的耐药性。采用自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62表达水平检测、自噬流实验和透射电镜观察考察2种细胞自噬活性的差异;采用荧光定量聚合酶链式反应考察2种细胞中miRNA-18a、miRNA-4802及unc-51样激酶(ULK1)、自噬相关蛋白7(ATG7)mRNA的表达差异,并检测ULK1、ATG7蛋白表达差异。再以JeKo-1细胞为研究对象,考察经2种模拟生物体内源的miRNAs(miRNA-18a mimics、miRNA-4802 mimics)处理后,细胞自噬活性和耐药性的变化情况。结果以ADR和VCR处理后,JeKo-1细胞比Daudi细胞具有更强的耐药性和自噬活性。JeKo-1细胞中miRNA-18a、miRNA-4802表达水平均显著低于Daudi细胞,ULK1、ATG7 mRNA和蛋白表达水平均显著高于Daudi细胞(P<0.001)。以miRNA-18a mimics和miRNA-4802 mimics处理JeKo-1细胞后,细胞的自噬活性和耐药性均显著降低。结论miRNA-18a和miRNA-4802可分别通过降低自噬启动基因ULK1和ATG7的表达,抑制淋巴瘤细胞的自噬活性,从而降低淋巴瘤细胞对ADR和VCR的耐药性。

敲低Sec23a基因对人乳腺癌寡灶型转移细胞株体外细胞生物学特性的影响

针对来源于乳腺癌细胞MDA-MB-435的小鼠肺癌寡灶型转移肿瘤细胞株MDA-435-OL,利用慢病毒感染的方法建立稳定敲低Sec23a基因表达的细胞株MDA-435-OL-Sec23a-GFP和其阴性对照细胞株MDA-435-OL-LV3NC-GFP,通过CCK-8(Cell Counting Kit-8)增殖实验、Transwell小室细胞迁移实验、侵袭实验和琼脂克隆斑形成实验探索敲低Sec23a基因后,寡灶型转移肿瘤细胞株体外细胞生物学特性的改变。在寡灶转移细胞株中敲低Sec23a基因后,细胞生长曲线与倍增时间并没有显著差异(28.23 h和28.32 h,P>0.05),但Transwell小室迁移细胞数量(58.50±2.81和39.60±3.21)、侵袭细胞数量(54.40±3.33和34.60±1.44)和细胞体外克隆形成率(0.67±0.05和0.37±0.03),均较阴性对照组显著增加(P<0.001)。该研究结果表明,乳腺癌寡灶型细胞株稳定敲低Sec23a基因后,细胞的增殖特性并没有明显变化,但细胞的迁移、侵袭能力和克隆形成能力均增强。

Sec23a基因对人乳腺癌类肿瘤干细胞的干性抑制作用研究

该文使用新型悬浮细胞连续培养法从人乳腺癌细胞MDA-MB-435中分离出类肿瘤干细胞株(MDA-435-spheroid enrichment,MDA-435-SE),并通过流式细胞术检测细胞表面标志物以及裸鼠皮下成瘤实验,对MDA-435-SE细胞的类肿瘤干细胞特性进行了验证。然后对MDA-435-SE细胞进行慢病毒感染,建立了稳定敲低Sec23a基因表达的细胞株MDA-435-SE-sh Sec23a和阴性对照细胞株MDA-435-SE-LV3NC,通过Cell Counting Kit-8增殖实验、96孔板单克隆成球实验和裸鼠皮下成瘤实验探索Sec23a基因对乳腺癌类肿瘤干细胞MDA-435-SE的干性调控作用。在乳腺癌类肿瘤干细胞MDA-435-SE中敲低Sec23a基因后,细胞的增殖曲线和倍增时间并没有明显改变,但细胞的体外成球直径和单细胞克隆效率均显著增强。动物实验表明,Sec23a基因的敲低可以显著提高乳腺癌类肿瘤干细胞MDA-435-SE的体内成瘤能力。该研究使用新型悬浮细胞连续培养的方法获得来源于人乳腺癌的类肿瘤干细胞株,并使用体内和体外干性相关实验验证了敲低Sec23a基因后,可以显著提高乳腺癌类肿瘤干细胞MDA-435-SE的干性,对肿瘤干细胞的研究具有重要的参考意义。

S100A8通过自噬促进B细胞淋巴瘤耐药性的机制研究

B细胞淋巴瘤是起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤,是由分化过程中淋巴细胞恶性转化的复杂过程引起的。B细胞淋巴瘤细胞的耐药性是制约B细胞淋巴瘤治疗的关键因素。自噬是细胞成分降解和再循环的重要细胞生物学过程,近年来其与肿瘤耐药性的相关性受到越来越多的关注。S100A8是钙结合蛋白S100家族的重要成员,其在淋巴瘤的的耐药调控中发挥重要作用,但具体机制尚不清楚。在该研究中,以人Burkitt淋巴瘤细胞Daudi、人B淋巴瘤细胞SUDHL-4和人套细胞淋巴瘤细胞JeKo-1为研究对象,揭示了B细胞淋巴瘤细胞的耐药性与S100A8的表达水平密切相关,且S100A8可以显著激活淋巴瘤细胞的自噬进程。慢病毒感染稳定敲低S100A8的表达后,一方面,淋巴瘤细胞内质网和线粒体内的BNIP3蛋白的表达水平显著降低,自噬受到抑制;另一方面,自噬起始复合物BECN1-PI3KC3的表达显著降低,而BCL2与BECN1的结合显著增多,进而抑制细胞自噬。