尼古丁乙酰胆碱受体基因CHRNA3的多态性和中国汉族人群肺癌风险关系的研究及其在晚期非小细胞肺癌中的预后分析

目的：研究编码尼古丁乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptors，nAChRs）的候选基因CHRNA3的多态性与中国汉族人群肺癌风险的关系，进一步探讨其对晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cance，NSCLC）患者预后的影响。方法：对就诊于上海交通大学附属上海市胸科医院的547例肺癌患者，和上海市浦东新区和宝山区的567例健康人群进行病例．对照研究。选取候选基因CHRNA3上的3个SNPs位点（rs3743073．rs3743076和rs3743078），运用Taqman荧光定量基因分型技术，对该1114例中国汉族人进行基因型分析。采用非条件logistic回归分析法，比较各基因型在病例组与对照组中分布频率的差异，探讨其与肺癌的关系。进一步在101例不可手术ⅢB期／Ⅳ期NSCLC患者中探讨基因CHRNA3的多态性变化与预后的关系。

缺血性脑卒中发生及疗效相关的血清分子标志物研究

目的本研究系统分析了炎性细胞因子与急性缺血性脑卒中发生、发展以及预后的相关性。方法选择2018年8月~2019年3月上海市第八人民医院神经内科收治的急性缺血性脑卒中(AIS)患者54例(AIS组),短暂性脑缺血发作(TIA)患者32例(TIA组)。另选同期与AIS组年龄和性别匹配的健康体检者54例(对照1组),与TIA组年龄和性别匹配的健康体检者32例(对照2组)。使用Bio-Plex Pro平台系统分析血清中15种细胞因子水平的变化,包括白细胞介素(IL)1β,IL-4,IL-6,IL-10,IL-17A,TNF-α,干扰素ɡ,IL-17F,IL-21,IL-22,IL-23,IL-25,IL-31,IL-33,可溶性细胞表面分化抗原40配体(sCD40L)。进而建立疾病发生预测模型,并在TIA患者中检验其可靠性。最后评估AIS患者出院3个月及6个月的2次随访记录。结果AIS组血清IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、干扰素ɡ、TNF-α、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-23、IL-31、IL-33、sCD40L水平明显高于对照1组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。TIA组IL-1β、IL-4、IL-10、IL-17A、干扰素ɡ、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-23、IL-25及IL-33水平明显高于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。IL-21作为AIS发生最合理的生物标志物,敏感性为93.8%,特异性为53.1%,曲线下面积为0.777(95%CI:0.659~0.895,P=0.000)。AIS患者IL-1β与脑梗死面积呈正相关(r=0.322,P=0.005),与NIHSS评分呈负相关(r=-0.390,P=0.003)。随访3个月,9例患者复发再次入院,IL-17A水平明显低于未复发患者,差异有统计学意义(P=0.001)。结论缺血性脑卒中患者血清多种细胞因子水平显著变化,在脑卒中的临床诊断、疾病严重程度及预后判断等方面具有潜在的临床应用价值。

急性脑梗死患者细胞色素P4502D6基因多态性对阿托伐他汀调脂疗效的影响

目的探讨急性脑梗死患者细胞色素P450(CYP)2D6rs1065852位点基因多态性与阿托伐他汀疗效的相关性。方法选择2015年11月~2016年3月我院收治的急性脑梗死患者192例为观察组,另选择同期门诊体检者192例为对照组。检测所有研究对象rs1065852位点基因多态性分布。分析阿托伐他汀治疗3个月后,观察组血脂水平的变化情况。结果观察组高血压、冠心病、饮酒、吸烟及TG水平明显高于对照组(P<0.01),HDL-C水平明显低于对照组[(1.11±0.31)mmol/L vs(1.17±0.35)mmol/L,P=0.049]。2组的等位基因分布及基因型比较无差异,且2组男性携带等位基因A频率与女性比较无差异(P>0.05)。与治疗前比较,阿托伐他汀治疗3个月后观察组GG、GA、AA基因型患者TC、TG及LDL-C水平明显下降,而HDL-C水平明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗3个月后,GG基因型LDL-C水平明显低于GA和AA基因型[(1.05±0.25)mmol/Lvs(1.87±0.45)mmol/L和(1.89±0.12)mmol/L,P<0.01]。结论 CYP2D6rs1065852基因多态性与急性脑梗死患者阿托伐他汀调脂疗效有关,监测该基因多态性有助于预测阿托伐他汀的疗效。

前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9抑制剂的研究现状及进展

脑血管病目前已跃升为国民死亡原因之首，其中卒中是单病种致残率最高的疾病［1］。根据国内外研究，卒中可防可控；高脂血症是动脉粥样硬化性心血管疾病的主要危险因子，60％的冠状动脉粥样硬化性心脏病、40％的缺血性卒中都是由低密度脂蛋白胆固醇（ LDL-C）长期升高所致［2］。目前临床上他汀类药物仍是降低LDL-C的主力军，但是即便给予推荐的最大剂量的他汀类药物治疗，仍有60％～70％的患者的LDL-C未达到理想水平［3］。另外，部分患者对高剂量他汀类药物不耐受或因不良反应（如肌痛和横纹肌溶解等）难以足量服用。因此研发可供这部分患者选择的新型降血脂药物对于心血管疾病的防治具有重大意义。前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9（ proprotein convertase subtilisin／kexin type 9，PCSK9）是目前发现的降脂新靶点，因而PCSK9抑制剂为我们提供了一种继他汀药物之后对抗LDL-C 的新治疗模式。因此，我们对新降脂靶点PCSK9及目前PCSK9抑制剂的研究现状和进展进行综述。

一种基于多重PCR的人类线粒体基因组高通量测序方法

人类线粒体基因组DNA(mtDNA)是一个16569 bp的双链闭合环状DNA分子,具有母系遗传、多拷贝、高异质性及高变异率等特点,是研究人类遗传和进化上广泛使用的分子标记.近几年,高通量测序技术的出现,使得在短时间内准确测定mtDNA序列成为可能;但目前常用的高通量测序建库方法操作复杂、研究费用相对较高.基于多重PCR扩增的测序方法具有高效率、高灵敏度、低成本的特点,因而适用于大规模线粒体基因组的变异检测分析.利用73个相互重叠的扩增子通过多重PCR方法来扩增中国人的线粒体全基因组,在扩增片段两端连接特定的接头序列,然后在IlluminaHiSeq X Ten平台上进行高通量测序.对获得的测序数据分析发现,mtDNA每个位点的测序深度均达到2000×以上;当测序深度为100×时,所有样本的序列覆盖度都达到100%;数据质量适用于后续的变异检测分析.利用本研究建立的基于多重PCR的二代测序方法无需片段化即可直接上机测序,在复杂遗传病的研究中有着广泛的应用前景.

基于数据库挖掘分析微RNA-129-1在结肠癌中的表达和意义

目的探讨微RNA(miRNA)-129-1在结肠癌中的表达、调控、潜在作用机制和临床意义。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库中结肠癌的甲基化、mRNA表达和miRNA表达数据,分析miRNA-129-1表达和甲基化的变化。利用miRwalk 2.0和TargetScan数据库联合预测miRNA-129-1靶基因,采用DAVID 6.7在线软件对靶基因进行基因本体和京都基因与基因组百科全书富集分析,利用STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用网络分析,并再次利用TCGA数据库对miRNA-129-1的关键靶基因进行表达差异分析和预后分析。统计学方法采用配对t检验、独立样本t检验,通过受试者操作特征曲线(ROC)评估miRNA-129-1甲基化对结肠癌的诊断价值,采用Kaplan-Meier法和log-rank检验分析miRNA-129-1表达对患者生存的影响。结果miRNA-129-1在各物种之间序列保守。对TCGA数据库所有结肠癌肿瘤样本和对照样本进行分析,结果显示肿瘤样本中miRNA-129-1的表达与对照样本比较降低(0.98±0.81比5.74±0.59),cg04524088、cg04840800、cg11364290、cg20734982、cg24044186位点的甲基化水平与对照样本比较均降低(0.321±0.130比0.563±0.051、0.432±0.123比0.624±0.064、0.475±0.153比0.768±0.033、0.659±0.180比0.816±0.037、0.862±0.096比0.916±0.019),差异均有统计学意义(t=14.95、11.36、9.39、11.74、5.32、3.47,P均<0.01)。ROC分析结果显示,miRNA-129-1上述5个位点的甲基化水平对结肠癌有较高的诊断效能[曲线下面积分别为0.946、0.915、0.950、0.758、0.667,P均<0.01]。生存分析结果显示,miRNA-129-1低表达与不良预后有关(风险比为0.55,P=0.018)。生物信息学分析发现miRNA-129-1的靶基因显著富集于丝氨酸/苏氨酸激酶受体、丝裂原活化蛋白激酶等与肿瘤密切相关的功能基因簇,其靶基因编码蛋白质之间存在复杂的相互作用网络。miRNA-129-1的潜在关键靶基因肝配蛋白B型受体2(EPHB2)基因高表达与总生存期和无病生存期短有关(风险比分别为1.9和1.6,P均<0.01)。结论miRNA-129-1的表达和甲基化在结肠癌的发生、发展中起着重要调控作用,miRNA-129-1甲基化在结肠癌诊断中具有潜在价值,miRNA-129-1是结肠癌患者预后的影响因素。EPHB2可能是miRNA-129-1的潜在关键靶基因。