结直肠癌发病危险因素研究进展

近年来,消化道肿瘤的发生率居高不下,其中结直肠癌(CRC)发病率和病死率不断升高,且呈年轻化趋势。CRC的发生发展由很多因素导致,遗传、年龄、性别、饮食、代谢综合征等都是CRC发生的高危因素。CRC治疗费用高昂,给社会带来了巨大的经济压力,目前已成为卫生经济学的研究热点之一。大量研究表明,减少高危因素可以降低CRC的发病率和病死率,本文就CRC的危险因素作一综述。

小鼠LRRC10腺病毒载体构建及其在心肌细胞中的表达

目的:构建含有小鼠Lrrc10(Leucine-rich Repeat Containing protein10)基因的重组腺病毒表达载体。方法:设计小鼠Lrrc10特异性引物,以小鼠cDNA为模板,通过PCR扩增出mLrrc10的编码区,并引入HA标签蛋白和SalΙ酶切位点。该片段经凝胶电泳纯化后插入pMD-18T载体。测序后,用SalΙ和Hind III酶切,将目的片段亚克隆至pAd-track-cmv穿梭载体中。用PmeΙ线性化后,用100 ng转化细菌BJ5183,在细菌内同源重组后得到pAd-Lrrc10质粒。pAd-Lrrc10经PacⅠ线性化后用LipofectamineTM 2000转染293A细胞,包装得到含Lrrc10基因的病毒重组子。将病毒重组子在293A细胞中扩增后,反复冻融得到滴度较高的含Lrrc10的病毒液。将收集的病毒液感染心肌细胞,绿色荧光观察GFP、免疫印迹检测Lrrc10-HA蛋白的表达。结果:用病毒液感染原代心肌细胞,24小时后在荧光显微镜下可观察被感染的细胞发出绿色荧光,提取心肌细胞总蛋白,Western可检测到Lrrc10-HA融合蛋白的表达。结论:小鼠Lrrc10腺病毒载体构建成功,并可将编码Lrrc10-HA的目的片段导入心肌细胞中表达。

斑马鱼有氧运动能力评估方法的探究

为了探究斑马鱼有氧运动能力的评估方法,为模式动物斑马鱼在运动医学、环境监测、遗传、药理等领域的应用研究奠定基础,本研究利用泳道呼吸仪设计测试方案,测定不同年龄野生型斑马鱼的最大耗氧量和相对临界游泳速度,同时利用微量血乳酸测试仪检测递增游泳速度下斑马鱼的血乳酸水平。结果显示:3月龄、8月龄、14月龄斑马鱼的最大耗氧量和相对临界游泳速度随着年龄的增长而降低;3月龄、8月龄、14月龄斑马鱼的血乳酸阈分别是(2.98±0.86)mmol/L、(2.47±0.29)mmol/L和(3.83±0.25)mmol/L,且分别在其临界游泳速度的60%、80%、80%处出现。本研究建立的斑马鱼最大耗氧量和血乳酸阈检测技术,可作为一种精确评估斑马鱼有氧运动能力的方法。

Txt5腺病毒载体构建及其在心肌细胞中的表达

设计小鼠Txt5基因的特异性引物,将小鼠c DNA作为模板,用PCR扩增出m Txt5编码区,并加入HA标签序列.将这一片段插入p MD-18T载体,再亚克隆至p Adtrack-cmv穿梭载体上.线性化后,转化BJ5183感受态细胞,在BJ5183中发生同源重组获得p Ad-Txt5质粒.p Ad-Txt5线性化后转染293A细胞,包装得到含Txt5基因的病毒.将病毒溶液感染大鼠原代心肌细胞,一段时间后观察绿色荧光,然后通过RT-PCR和免疫印迹法检测HA标签蛋白的表达.结果表明成功构建小鼠Txt5腺病毒表达载体并实现在大鼠原代心肌细胞中的表达.