海藻酸钠-壳聚糖共固定化菠萝茎蛋白酶的研究

以海藻酸钠、壳聚糖为材料共固定化菠萝茎蛋白酶,并对固定化条件以及固定化酶的酶学特性进行了研究。通过单因素及正交实验确定固定化酶的最佳条件为:酶用量0.4mg/g、海藻酸钠浓度3.0%、壳聚糖浓度1.0%、CaCl2浓度5.5%、固化时间90min。固定化后的酶重复使用4次后,相对酶活力仍保留80%以上,固化效果较好。同时,固定化酶最适反应温度和热稳定性提高,反应pH向碱性偏移,酶学特性得到了改善。

人特异性CHRFAM7A基因抑制小鼠肾缺血再灌注损伤炎症反应

本研究探讨人特异性CHRFAM7A基因抑制小鼠肾缺血再灌注损伤早期炎症作用及其机制。12只野生型(wild type,WT) C57BL/6成年雄性小鼠随机分为2组:野生型假手术组(WT Sham)和野生型肾缺血再灌注损伤(WT RIRI)组。12只性别、年龄匹配的CHRFAM7A转基因(transgenic mice,GT)小鼠也随机分组为:转基因型假手术组(GT Sham)和转基因型肾缺血再灌注损伤(GT RIRI)组,每组各6只。除WT和GT假手术组仅行剖腹手术外,所有小鼠均夹闭双侧肾蒂40 min,再灌注24 h后,留取各组小鼠血清及肾组织标本。生化分析仪检测血清中的尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)水平; ELISA法检测白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和胱天蛋白酶7水平;免疫组织化学染色法检测高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达水平;苏木-伊红(HE)染色和原位末端标记法(TUNEL)染色观察肾组织病理损伤;流式检测HK-2细胞凋亡率。结果显示,与WT Sham组对比,WT RIRI组血清中,BUN、Scr、IL-8和TNF-α含量增加(P <0. 0001);肾组织中,胱天蛋白酶7水平增高(P<0. 001),HMGB1平均光密度值增加(P<0. 0001),肾组织细胞凋亡指数(AI%)增高(P<0. 0001)。与GT Sham组对比,GT RIRI组血清BUN、Scr、IL-8和TNF-α含量增加(P <0. 05,P <0. 0001,P<0. 01,P<0. 01);肾组织中,胱天蛋白酶7水平明显增高(P<0. 01),HMGB1平均光密度值增加(P<0. 0001),肾组织细胞AI%增高(P=0. 0005)。与WT RIRI组对比,GT RIRI组血清中的BUN、Scr水平降低(P<0. 0001),IL-8、TNF-α、HMGB1和胱天蛋白酶7的水平明显下降(P<0. 01,P<0. 0001,P<0. 0001,P<0. 01),肾组织细胞凋亡指数(AI%)下降(P=0. 0003).与pLVX空载质粒+氯化钴组相比,pLVX-CHRFAM7A+氯化钴组的凋亡率(19. 31%±1. 45 vs 34. 92%±4. 21,P <0. 001)明显下降。上述结果表明,人特异性CHRFAM7A基因在小鼠肾缺血再灌注损伤中,通过抑制早期的炎症反应,对肾组织发挥保护作用。