建立酶切图谱法从日本历年本土基因型麻疹病毒株中鉴别中国输入株H1基因型麻疹病毒

目的本文主要研究建立一种酶切图谱法从日本历年本土C1、D3、D5基因型麻疹病毒中鉴别中国输入株H1基因型麻疹病毒,即逆转录多聚酶链式反应—限制性片段长度多态性分析方法(RTPCRRFLP)。方法对C1、D3、D5及H1基因型麻疹病毒H基因全长的序列进行分析,寻找能够从日本本土株中鉴别出输入株H1基因型麻疹病毒的限制性内切酶酶切位点,建立RTPCRRFLP方法。同时,我们又应用多株已经过序列分析确定为C1、D3、D5、H1基因型的麻疹病毒用该RTPCRRFLP方法进行验证。结果应用该RTPCRRFLP方法所得结果与序列分析方法结果一致。结论该RTPCRRFLP方法是一种简单、快速又实用的从日本本土株中筛查H1基因型输入株的方法。

三价口服脊髓灰质炎减毒活疫苗效价监测分析

基础免疫工作是维护儿童健康成长,提高全民身体素质的重要途径之一。口服脊灰减毒活疫苗(OPV),是脊灰免疫的首选疫苗。为了解疫苗在储存、运输过程中各环节的效价变化,减少无效接种,提高免疫成功率,对疫苗效价进行监测是很有必要的。现将吉林省1996～1999年监测结果报告如下:

应用简便的逆转录环介导等温扩增方法检测腮腺炎病毒核酸

流行性腮腺炎（简称腮腺炎）是由腮腺炎病毒（Mumps Virus,MuV）感染引起的急性呼吸道传染病,经空气飞沫传播,全年均可发病,以冬春季高发,人类是该病毒的惟一宿主,好发于儿童和青少年,传染性仅次于麻疹和水痘,是一种在全球流行的急性传染病,临床以腮腺非化脓性肿胀、疼痛伴发热为主要症状。2004-2006年我国的腮腺炎爆发占公共卫生事件的20%左右[1,2]。

麻疹监测系统运转状况分析

麻疹监测系统为加速控制麻疹发病奠定了良好的基础,现对2002年麻疹监测系统运转状况进行分析.

乙型肝炎病毒基因型与临床流行病学相关性研究

目的本研究旨在为乙型肝炎病毒(HBV)的基因型分布与临床流行病学的关系提供证据。方法采用多对型特异性引物套式聚合酶链反应对吉林省194份来自慢性肝炎、肝硬化及肝癌患者中的HBV阳性血清进行基因分型,并采用卡方检验分析基因构成比的差异。结果在194例HBV阳性血清样品中B型16例、C型172例、BC混合型6例,未发现其它型别的病毒。肝硬化与肝癌患者中乙肝病毒的基因型构成比的差异无统计学意义,而慢性肝炎与肝硬化患者中乙肝病毒的基因型构成比的差异有统计学意义,男女患者所携带的病毒基因型差异无统计学意义。结论肝硬化和肝癌患者中C基因型构成比无差异,但二者均高于慢性肝炎患者。男女患者中C基因型构成比无差异。

吉林省2009-2010年引起手足口病流行的肠道病毒71型基因特性的研究

目的分析引起吉林省2009--2010年手足口病（hand foot and mouth disease，HFMD）流行的肠道病毒71型的基因进化特征。方法选择31株2009-2010年分离于吉林省8个地市（州）HFMD病例的EV71代表株，对VP1编码区基因进行逆转录．聚合酶链反应扩增、扩增产物的序列测定，使用Bioedit软件和MEGA4．0软件对VP1基因进行同源性、基因亲缘关系分析。结果吉林省2009-2010年的31株EV71分离株均属于C4a基因亚型，3l株EV7t株在VP1区的核苷酸的同源性在94．5％～100％之间，分属于5个分支，其中25株病毒（分离于8个地市）形成一个大的分支，属于绝对优势传播链，其余6株形成4个小分支。结论2009-2010年在吉林省内有多个EV71C4a基因型的传播链同时存在，其中分支1为绝对优势传播链，在8个地市持续传播，引起HFMD的暴发流行。

吉林省2009年麻疹病毒流行株核蛋白抗原表位变异分析

目的研究吉林省2009年麻疹病毒流行株的核蛋白(Nucleoprotein,N)抗原表位变异。方法对吉林省2001～2009年麻疹病例的咽拭子标本,用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)扩增N蛋白基因片段后测序,分析2001～2009年麻疹病毒株核苷酸、氨基酸变异以及抗原表位变异。结果吉林省2001～2009年流行的麻疹病毒均属于H1基因型,但2009年的麻疹病毒流行株在基因树上处于一个相对独立的小分支。与2001～2008年的麻疹病毒相比,其N蛋白基因序列推导的氨基酸均有共同的3个氨基酸变化,其中在457位点由丝氨酸至甘氨酸的变异,恰好是N蛋白的抗原决定簇之一。结论吉林省2001～2008年流行的麻疹病毒在N蛋白基因上无明显差别,2009年所有麻疹病毒N蛋白在抗原表位第457位点均发生氨基酸变异,提示要关注N蛋白氨基酸变异状况以及变化趋势、N蛋白氨基酸变异与抗原变异的关系以及由其产生的影响。

吉林省2001～2008年麻疹病毒血凝素蛋白基因特征和氨基酸变异分析

目的研究吉林省2001～2008年麻疹病毒代表株的血凝素蛋白基因(Hemagglutinin,HA)特征和氨基酸变异。方法从吉林省2001～2008年流行的麻疹野病毒中选取5株代表株,提取核糖核酸,用逆转录-聚合酶链反应扩增HA基因片段,对扩增产物进行核苷酸序列分析,并与基因库中的中国麻疹疫苗病毒株沪191以及所有23种麻疹野病毒基因型代表株的H基因序列,进行基因亲缘关系、同源性、氨基酸变异以及糖基化位点变异比较。结果吉林省5株麻疹病毒分离株均属于H1基因型H1a基因亚型,5株病毒H基因之间有6～17个核苷酸差异(0.3%～0.9%),3～9个氨基酸差异(0.5%～1.5%)。与中国现行疫苗病毒株沪191H基因相比,有89～95个核苷酸差异(4.8%～5.1%),25～30个氨基酸差异(4.1%～4.8%)。与H1a基因亚型代表株China93-4H基因相比,有9～17个核苷酸差异(0.5%～0.9%),3～7个氨基酸差异(0.5%～1.2%)。吉林省5株麻疹病毒分离株的H蛋白均保留了4个糖基化位点,第5个糖基化位点在氨基酸第240位由丝氨酸突变成天冬酰胺,导致一个潜在糖基化位点NLS238～240的缺失。结论吉林省2001～2008年流行的5株麻疹病毒,均丢失了一个可能影响抗原性的糖基化位点。5株麻疹病毒的核苷酸、氨基酸差异均不大,但无论与H1a基因亚型代表株China93-4相比,还是与疫苗株S191相比,核苷酸和氨基酸的同源性均呈逐年递减趋势,吉林省麻疹野病毒H基因的变异仍在逐年增加、逐年积累。

中国麻疹野病毒基因型快速诊断方法的建立

研究建立了一种适用于中国现流行麻疹野病毒基因型的基因型别筛查、定型的分析方法 ,即逆转录 聚合酶链反应 限制性内切酶片段长度多态性分析 (RT PCR RFLP)。首先对RT PCR方法的敏感性和特异性进行了实验证明 ,对 1 1株麻疹病毒提取核糖核酸 (RNA) ,逆转录套式PCR扩增后全部出现阳性特异条带。在同样的反应条件下 ,扩增 6种不同基因型麻疹病毒 9株 ,同时又扩增其它非麻疹病毒。结果 9株 6种基因型麻疹病毒RT PCR均呈现阳性条带 ,说明本研究采用的RT PCR方法敏感。而非麻疹病毒RT PCR结果为阴性 ,均未见阳性条带 ,说明该RT PCR方法特异。根据H1 和H2 基因型麻疹病毒分别被不同的限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ切割成不同大小的基因片段 ,建立RFLP快速基因定型方法。之后 ,对建立的RFLP方法的特异性和敏感性进行了实验证明。利用该方法对吉林省连续两年分离到的 9株麻疹野病毒 [已经过中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家麻疹实验室脱氧核糖核酸 (DNA)序列分析证实为H1 基因型 ]进行验证 ,结果均为H1 基因型麻疹病毒 ,证实该PCR RFLP结果与序列分析结果一致 ,也说明该方法敏感。同时 ,又对 7种不同基因型麻疹病毒应用PCR RFLP方法进行实验 ,结果只有H1 和H2 基因型麻疹病毒被限制性内切酶SalⅠ和BamH?

限制性片段长度多态性分析方法应用于中国麻疹野病毒基因型别的鉴定

目的 建立和应用麻疹野病毒基因型快速诊断方法 ,及时监测麻疹流行株基因型动态 ,尽早发现异型输入病例。方法 应用一种适用于我国现流行麻疹野病毒的基因型别筛查、定型的分析方法 ,即逆转录 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析方法 (RT PCR RFLP) ,对吉林省 2 0 0 1～ 2 0 0 3年分离到、经中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家麻疹实验室用脱氧核糖核酸 (DNA)序列分析证实为H1基因型的 9株野病毒进行验证。结果 9株麻疹病毒分离阳性株的RT PCR-RFLP基因分型结果与核酸序列分析结果完全一致 ,均为H1基因型。并应用该方法对吉林省 2 0 0 3年分离的 2株麻疹病毒进行基因型别鉴定 ,亦为H1基因型。同时对 2 0 0 1～ 2 0 0 3年的 46份麻疹病例的临床标本 ,应用新建立的RT-PCR-RFLP方法直接进行麻疹病毒核糖核酸 (RNA)提取、RT-PCR反应及基因型别鉴定。 46例临床标本经直接RT-PCR扩增后的 31例RT-PCR阳性产物 ,经RFLP法酶切、电泳结果均为H1基因型。结论 RFLP分析方法是一种快速、简便又经济实用的中国麻疹野病毒基因定型筛查方法 ,对快速掌握麻疹病毒基因型流行动态及地理分布 ,以及麻疹野病毒的输入、变异情况 。

应用简便逆转录环介导等温扩增方法检测麻疹病毒核酸

目的应用简便快速的核酸检测新方法——逆转录环介导等温扩增方法（RT-LAMP）检测麻疹病毒核酸，并与巢式逆转录多聚酶链式反应（nest-RT-PCR）方法进行比较。方法比较RT-LAMP方法与nest-RT-PCR方法对吉林省历年麻疹病毒分离株以及临床疑似麻疹咽试子中麻疹病毒核酸检测的检出率。结果两种方法对23株麻疹分离株麻疹病毒核酸阳性检出率均达到100％。针对18份麻疹病毒分离阴性的临床疑似麻疹咽试子分别利用RT-LAMP和巢式RT-PCR两种方法进行麻疹核酸检测，RT-LAMP方法阳性率为56．52％，巢式RT-PCR方法阳性率为47．83％。结论RT-LAMP方法比巢式nest-RT-PCR方法更敏感。

中国麻疹病毒疫苗株与野毒株鉴别方法的建立

目的研究建立一种简便快速的鉴别中国麻疹病毒疫苗株与野病毒的方法。方法在血凝素(Hemagglutinin)蛋白基因(H基因)上,寻找能将中国麻疹病毒疫苗株区别于野毒株的限制性内切酶酶切位点,并在包含此酶切位点的基因片段上设计逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)引物,同时对所建立的RT-PCR方法进行敏感性和特异性实验证明,对RT-PCR产物利用限制性片段长度多态性分析方法(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)进行酶切鉴定。结果该一步法RT-PCR方法比较敏感,至少能够检测4.64TCID50(50%组织培养感染剂量,Median Tissue Culture Infective Dose)麻疹病毒。而非麻疹病毒RT-PCR结果均未见阳性条带,说明RT-PCR方法特异。PCR产物经Af1Ⅱ酶切作用后,中国麻疹病毒疫苗株沪191与长47PCR产物均能被切成两个片段,分别为287bp和151bp,2株麻疹野病毒代表株均不能被Af1Ⅱ酶切。结论新建立的RT-PCR-RFLP是一种快速、简便的鉴别中国麻疹病毒疫苗株与野毒株的方法。

麻疹病毒H_1和H_2基因型快速鉴定方法的改进

目的简化麻疹病毒H1和H2基因型快速鉴定方法的步骤,使之操作更加简单快速。方法将逆转录-套式聚合酶链反应(Reverse Transcription-Nested Polymerase Chain Reaction,RT-nPCR)改进为一步法RT-PCR,使用原方法中的一对内引物,将扩增后的PCR产物用限制性片段长度多态性分析进行基因型鉴定,同时电泳检测也用较安全的荧光染料GeneFinder代替了有致癌性的溴化乙锭染色。结果该研究中使用的已知为H1基因型的3株麻疹病毒,其核酸全部能被改进的一步法RT-PCR有效扩增,并且PCR产物被内切酶SalⅠ有效切开,而且保持了原方法较好的敏感性和特异性。结论改进的麻疹病毒H1和H2基因型快速鉴定方法是一种更加快速、简便又实用的基因定型方法。

吉林省2009-2012年肠道病毒71型VP1编码区氨基酸位点的变异分析

目的分析2009--2012年引起吉林省手足口病（handfootandmouthdisease，HFMD）流行的肠道病毒71型（EV—A71）的VP1区氨基酸位点的特征性变异位点。方法对2009--2012年分离于吉林省HFMD病例的70株EV—A71分离株的VPl编码区进行逆转录．聚合酶链反应，然后对扩增产物进行核苷酸序列测定，使用Bioedit软件和MEGA4．0软件分析VPl区氨基酸位点的变异特征以及基因亲缘关系。结果2009--2012年在吉林省分离到的70株EV—A71均属于C4a基因亚型，其中69株与2008年安徽阜阳的分离株亲缘关系最近，并且这69株病毒在VPl编码区第22位氨基酸位点均由谷氨酰胺转变为组氨酸（Q—H），与2008年安徽阜阳株一致。结论引起2009-2012年吉林省HFMD流行的EV-A71可能：来源于安徽阜阳流行株延续传播。

麻疹病毒中国株与日本株的H蛋白及抗原性比较

198 4年以来日本分离的本土麻疹野病毒为C1、D3、D5基因型 ,中国自 1993年以来流行的绝大多数麻疹野病毒为H1基因型。 2 0 0 0年在日本东京检测到 1株由中国输入的H1基因型麻疹野病毒。对该中国株H1基因型与日本株C1、D3、D5基因型的H蛋白及抗原性进行了比较 ,结果表明 :H1基因型H蛋白的分子量为 78kD ,与A、C1基因型相似 ;D3、D5基因型的H蛋白的分子量为 80～ 82kD ,一些D3基因型在 39℃与在 33℃、37℃生长一样好 ,但其它基因型在 39℃生长却减少到 33℃、37℃的 1/ 10 0或 1/ 10 0 0。实验证实 ,一些D3、H1基因型能从较低的中和抗体水平逃逸 ,证明最近流行的麻疹病毒有轻微的抗原改变。

吉林省2009-2011年柯萨奇病毒A组16型基因亲缘关系研究

目的 分析致吉林省2009-2011年手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）流行的柯萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus group A type 16,CA16）分离株的基因亲缘关系.方法 对吉林省2009-2011年分离获得的54株CA16分离株的VP1编码区基因进行逆转录-聚合酶链反应扩增以及基因序列测定,使用MEGA 4.0软件进行基因亲缘关系分析.结果 吉林省2009-2011年54株CA16分离株有28株属于B1a基因亚型,26株属于B1b基因亚型;2009-2011年每年B1a基因亚型所占比例分别为86.7％、47.1％、31.8％,B1b基因亚型所占比例分别为13.3％、52.9％、68.2％.28株B1a基因亚型CA16形成了一个优势传播链和一个小传播链,26株B1b基因亚型CA16形成了一个优势传播链和两个小传播链.结论 B1a基因亚型所占比例呈现逐年下降趋势,B1b基因亚型所占比例呈现逐年增加趋势.吉林省2009-2011年呈现两个基因亚型各有一个优势传播链为主、各有1～2个小传播链为辅的共流行传播模式.

吉林省2001～2014年麻疹病毒血凝素蛋白基因变异分析

目的研究吉林省2001-2014年麻疹病毒血凝素（H）蛋白的变异情况。方法选取吉林省2001-2014年21株麻疹病毒株,通过病毒分离、核酸提取、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增得到H蛋白基因片段,测序并拼接全序,用生物信息学软件进行变异分析。结果吉林省2001-2014年21株麻疹病毒株均为H1a基因亚型,与中国疫苗株S191相比,H蛋白的核苷酸变异率由2001年的4.69%逐年上升到2013年的5.34%,氨基酸变异率由4.05%逐年上升到5.02%。与H1a中国代表株China93-4相比,核苷酸变异率从0.38%逐步上升为1.14%,氨基酸变异率从0.49%逐步上升为1.41%。吉林省麻疹病毒株均保留了4个糖基化位点,第240位氨基酸均由丝氨酸变为天冬酰胺,导致第5个糖基化位点NLS238-240缺失。21株麻疹病毒H蛋白氨基酸的334、397、493、574、592、603、613和614位点熵值相对偏高,可变性相对较大。结论吉林省2001-2014年麻疹病毒的核苷酸和氨基酸变异率均呈逐年升高趋势,需持续监测关键区域位点变异情况。

基于血清学和分子流行病学证实的麻疹爆发研究

目的分析5起麻疹爆发的调查结果,确证5起麻疹爆发间分子水平的关联,探讨麻疹爆发规模与血清学诊断时限、调查接种率水平及应急免疫完成情况等之间的可能关联,为修订控制麻疹措施提供数据。方法利用Excel2007对来自麻疹监测系统的5起爆发的资料及现场调查的资料进行统计整理,对5起麻疹爆发的病毒分离株代表株,用逆转录-聚合酶链反应扩增核蛋白(Nucleoprotein,NP)基因片段后测序,分析其NP基因亲缘关系及其核苷酸同源性。结果从血清学和分子生物学角度证实了5起麻疹爆发,确证了一个麻疹病毒传播链循环传播致5起大小不同的麻疹爆发。如果血清学诊断和应急免疫能在短时间内完成,那么调查接种率和应急免疫接种率越高,其爆发规模越小,爆发持续时间越短。结论控制麻疹爆发需要维持高水平的常规免疫接种率;当出现麻疹爆发时需提供早期快速的实验室诊断,并依据爆发调查结果科学选择合适目标人群,并快速完成高水平的应急免疫接种。

吉林省2005-2019年麻疹时空分布特征

目的分析吉林省2005-2019年麻疹发病的时空分布特征。方法通过中国麻疹监测信息报告管理系统收集2005-2019年吉林省麻疹发病数据,采用局部空间自相关分析和时空扫描分析以发现麻疹发病热点区域和时空聚集性。结果吉林省2005-2019年麻疹报告发病率在0.08/10万-17.41/10万之间。局部空间自相关分析发现100个麻疹发病热点区域,共涉及43个县(市、区);时间扫描分析发现1个发病时间聚集,发生在2005-2006年(RR=6.43,P<0.01);空间扫描分析发现11个空间聚集(RR=1.29-3.28,P<0.01);时空扫描分析发现1个时空聚集,发生在2005-2009年,涉及27个县(市、区)(RR=6.54,P<0.01)。结论吉林省2005-2019年麻疹发病具有时空聚集性,需加强热点区域和时空聚集区域的麻疹防控。