CAFs条件培养基影响EC9706细胞能量代谢的分子机制探索

目的通过收集癌相关成纤维细胞(CAFs)的条件培养基,探索CAFs促进EC9706细胞能量代谢的分子机制。方法通过MTT检测细胞活性,以DMEM高糖培养基培养的EC9706作为对照,筛选最适合间接共培养的CAFs条件培养基(CAFM);比色法检测EC9706细胞上清中乳酸及葡萄糖含量;Seahorse系统能量代谢分析系统检测EC9706细胞在DMEM与CAFM中能量代谢情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time quantitative PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测能量代谢相关分子mRNA及蛋白的表达。结果细胞融合度为50%-60%、70%-80%的CAFs条件培养基(CAFM)组与正常食管成纤维细胞条件培养基(NFM)相比,均有促进EC9706细胞增殖的作用(P<0.01),且在细胞融合度达70%-80%的CAFM各组中,与对照组相比,CAFM含量为60%时,对EC9706细胞的增殖作用显著升高(P<0.01)。与DMEM相比,CAFM可以上调EC9706细胞葡萄糖摄取、上清乳酸含量、基础呼吸值、基础糖酵解、补偿糖酵解(P<0.05),非线粒体耗氧、最大呼吸值、合成ATP耗氧量、备用呼吸能力(P<0.01)。RT-qPCR结果显示,CAFM还可上调EC9706细胞的低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、己糖激酶2(HK2)、单羧酸转运蛋白1(MCT1)(P<0.05),葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、丙酮酸激酶2(PKM2)(P<0.01)mRNA的表达。蛋白免疫印迹法结果显示,与DMEM相比,HK2、PKM2、MCT1、GLUT1的蛋白表达均显著提高(P<0.01)。结论CAFM能够通过促进EC9706细胞HK2、PKM2、HK2、GLUT1、MCT1、MCT4的mRNA和蛋白的表达,促进EC9706细胞的能量代谢。

六君子汤乙酸乙酯提取物干预CAFs条件培养基下EC9706细胞能量代谢的机制研究

目的探索六君子汤乙酸乙酯提取物(EAELD)对癌相关成纤维细胞(CAFs)条件培养基下食管癌EC9706细胞能量代谢影响的分子机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测EAELD对EC9706增殖活性的影响;比色法检测EAELD对CAFs条件培养基(CAFM)下EC9706细胞上清中乳酸及葡萄糖含量的影响;Seahorse能量代谢分析系统检测EAELD对CAFM下EC9706细胞能量代谢的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测EAELD对能量代谢相关分子mRNA及蛋白表达的影响。结果与DMEM相比,除10μg/mL组外,EAELD对EC9706细胞增殖活性均有明显抑制作用(P<0.05),选取抑制浓度(IC30)25μg/mL,半抑制浓度(IC50)40μg/mL,作为低、高剂量组进行后续实验。在CAFM培养的EC9706细胞各组中,EAELD低、高剂量组都能显著降低非线粒体耗氧、基础呼吸值、最大呼吸值、合成ATP耗氧量、备用呼吸能力、基础糖酵解、补偿糖酵解、糖酵解潜能(P<0.01),减少EC9706细胞上清乳酸含量(P<0.01),下调GLUT1的mRNA表达(P<0.05,P<0.01),下调p-PKM2、HK2、PKM2、MCT1蛋白表达(P<0.01);EAELD高剂量组能够下调EC9706细胞的线粒体耗氧与基础糖酵解比值(P<0.05),减少EC9706细胞葡萄糖摄取(P<0.05),下调p-PKM2、GLUT1的蛋白表达(P<0.01,P<0.05);EAELD低剂量组能够下调MCT1的mRNA表达(P<0.05)。结论六君子汤乙酸乙酯提取物能够干预CAFs条件培养基下EC9706细胞的能量代谢,其机制可能与EAELD调控HK2、PKM2、GLUT1、MCT1、MCT4的mRNA和蛋白表达相关。

基于《中华医典》挖掘调理三焦的组方用药规律

目的:研究古代医家调理三焦的组方用药规律。方法:以三焦为关键词,检索《中华医典》收录的中医药专著中关于三焦的方药论述;纳入符合标准的文献,采用SPSS Statistics 21、SPSS Modeler 18.0对纳入的3333首古方、995味中药进行聚类、关联、因子分析。结果:生姜、人参、茯苓、陈皮、大黄使用频率最高,药物性味以苦、辛、甘、温、寒为主,药物归经主要为脾、肺、胃、心。关联分析发现木香与槟榔常搭配使用,聚类发现高频次药物可聚为五类,因子分析得出7个可调理三焦的核心方。结论:中药调理三焦主要从三焦运化水谷、运行诸气、主水液代谢的功能出发,将其作为气、血、火、津液运行的通道,治法以行气导滞、解表泻热、燥湿益气、清热解毒、滋阴、温阳为主,根据其用药规律与核心方的总结,可指导临床从三焦论治疾病的辨证与用药。

三焦形质评议

“三焦”一词最早见于《黄帝内经》,但其中对三焦的描述较模糊,定位、功能也说法各异。文中就近年来各个医家对三焦的理解和描述进行梳理总结,包括三焦的有形无形、三焦的实质,结合西方医学对三焦的解读等。在总结的基础上,对三焦的形质进行评议,从中国古代哲学、文字、中医学到中西医结合、西医学角度等提出了新的见解,以期为三焦理论的临床应用提供新的思路和方法。

基于本草类文献整理探讨调理三焦中药的功能属性特点

目的:通过对本草类文献整理归纳分析,探讨调理三焦中药的性味、归经及功能属性特点,为临床治疗三焦疾病遣方用药提供理论参考。方法:以“三焦”为关键词,检索中华医典数据库本草类中关于三焦的中药,筛选明确记载具有调节三焦功效的中药,采用Excel表格对纳入文献数据进行频数分析,统计各味中药出现的频数,并对其调节三焦功能、记载年代、功效、性味、归经进行频数分析,初步归纳出具有调节三焦功能中药的特点。结果:共筛选出91味中药。其中,通行三焦之气的中药材共31味;通调三焦水道功能的中药共10味;清三焦之火的中药有28味;具有补三焦功效的中药共19味,包括补气药、补阴药、补阳药、安神药、固精缩尿药以及清热药;治疗三焦血病的中药3味,为硇砂、凌霄花、忍冬藤。记载调理三焦中药的文献以明清时期居多。从四气来看,治疗三焦病的中药药性以温性、寒性药为主。从五味来看,药味频次较高的分别是甘、苦、辛。从归经角度看,治疗三焦中药以肺、脾、肾、胃、肝、心经居多。调节三焦功能主要包括畅达三焦之气、清三焦火(热)、补三焦、通利三焦水道、治疗三焦血病。结论:以三焦为依据治疗疾病的文献以明清为主,调理三焦的中药在四气、五味、归经属性上具有一定规律。

心包-三焦-膜系统初探

通过对三焦、心包理论的再梳理,发现三焦作为六腑之一,具有一定的形质结构和特定的生理功能,认为三焦应当是位于体腔内部由膜围成的独立存在的潜在腔隙。对心包-三焦-膜系统进行理论梳理,提出心包主膜,心包与三焦的表里关系通过膜和经络系统来实现功能上的互相联通,病理上的相互影响,由此指导临床实践。并阐述心包-三焦-膜系统相关疾病的治法与方药。

猪苓汤合四逆散治疗肾结石的思考

肾结石为临床常见泌尿系疾病,其发病多引起疼痛,为患者生活带来极大不适。猪苓汤、四逆散均出自《伤寒论》,临床上两方合用治疗肾结石具有一定疗效。现从肾结石病因病机及症状入手,对猪苓汤和四逆散的药物作用进行分析,并举此法治疗肾结石的案例,指出两方合用具有调畅气机、利水通淋、缓急止痛的作用,对治疗肾结石病具有重要意义,为此病的治疗提供一定的思路。

影响燃气管道施工焊接质量的具体因素及改善措施

影响燃气管道施工焊接质量的具体因素主要包括焊接技术、焊接工艺、焊接管理、焊接材料。焊接技术较为落后,缺乏先进性,至使焊接技术人员无法保质保量地完成燃气管道的连接工作。在燃气管道焊接过程中往往出现管道焊接处气密性不足的问题。焊接工艺设置与其他施工工艺呈现出不协调的发展状态,会影响到燃气管道的后期使用,还会引发燃气泄露事故。施工企业在燃气管道焊接施工过程中缺乏一个完善的管理机制,以至于在焊接和焊接处的检测过程中出现各种误差。提出了提升燃气管道焊接质量的有效措施,如对焊接管道进行提前观察,对焊接过程进行管理规划,做好焊后细节处理,对焊接材料进行质量把控,做好人员管理工作。

PPARγ信号通路对香烟烟雾所致COPD模型小鼠肺泡巨噬细胞的影响

目的观察过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)对香烟烟雾诱导的小鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型体质量、肺功能、炎症因子、凋亡指数、PPARγ相关蛋白表达水平等的影响。方法选择24只SPF级C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为正常对照组、模型组、PPARγ激动剂组、PPARγ抑制剂组,每组6只。采用香烟熏吸法复制COPD小鼠模型。制模后PPARγ激动剂组给予生理盐水灌胃同时腹腔注射PPARγ激动剂吡格列酮(给药量为10 mg·kg^(-1)·d^(-1));PPARγ抑制剂组给予生理盐水灌胃同时腹腔注射PPARγ抑制剂GW9662(给药量为1 mg·kg^(-1)·d^(-1)),模型组和正常对照组给予生理盐水灌胃(雄鼠每次0.25 mL,雌鼠每次0.2 mL)及腹腔注射(雄鼠每次0.2 mL,雌鼠每次0.15 mL),均每日1次,每周6次,连续给药8周。给药后观察各组小鼠体质量、肺功能、肺组织病理变化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)水平;采用原位末端缺刻标记试验(TUNEL)检测肺组织凋亡细胞凋亡情况;采用免疫组化法检测肺组织巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD163,PPARγ的蛋含量。结果与正常对照组相比,模型组体质量明显减轻(g:21.05±0.84比27.12±1.13,P<0.05),最终潮气量(TV)、每分钟呼气量(MV)、呼气峰流速(PEF)、50%潮气量呼气流量(EF50)、PPARγ的蛋白表达水平均明显降低〔TV(mL):0.28±0.03比0.39±0.02,MV(mL/min):120.35±13.01比179.32±17.70,PEF(mL/s):5.72±0.38比9.99±0.67,EF50(mL/s):0.27±0.05比0.49±0.04,PPARγ(A值):12.69±0.85比18.85±0.39,均P<0.01〕;TNF-α、IL-4、肺组织细胞凋亡指数、小鼠肺泡巨噬细胞iNOS、CD163的蛋白含量均明显升高〔TNF-α(ng/L):642.16±146.03比325.99±84.63,IL-4(ng/L):431.39±50.17比343.24±48.87,细胞凋亡指数:(61.68±4.37)%比(41.34±1.69)%,iNOS(A值):17.06±1.16比8.58±0.84,CD163(A值):15.11±0.44比9.04±0.39,均P<0.01〕;光镜下可见小鼠肺泡壁断裂融合,泡腔增大,支气管管壁厚度增加,周围纤维组织增生。与模型组比较,PPARγ激动剂组体质量、TV、MV、PEF、EF50均明显升高〔体质量(g):25.35±0.70比21.05±0.84,TV(mL):0.34±0.01比0.28±0.03,MV(mL/min):151.24±9.37比,120.35±13.01,PEF(mL/s):6.84±0.59比5.72±0.38,EF50(mL/s):0.36±0.05比0.27±0.05,均P<0.05〕,肺组织细胞凋亡指数、iNOS、CD163均明显下降〔肺组织凋亡指数:(38.78±3.65)%比(61.68±4.37)%,iNOS(A值):9.07±0.78比17.06±1.16,CD163(A值):9.36±0.35比15.11±0.44,均P<0.01〕,PPARγ水平明显升高(A值:19.14±0.36比12.69±0.85);而PPARγ激动剂组和PPARγ抑制剂组TNF-α、IL-4均明显降低〔TNF-α(ng/L):286.57±44.66、354.93±88.40比642.16±146.03,IL-4(ng/L):237.05±32.05、285.58±50.47比431.39±50.17,均P<0.01〕。光镜下可见PPARγ激动剂组肺组织病理学改变均有所改善,PPARγ抑制剂组则无明显变化。结论PPARγ通路参与了COPD的病理生理过程;PPARγ信号通路激动剂可改善COPD模型小鼠的一般情况、肺功能、炎症因子、肺组织凋亡指数,抑制肺泡巨噬细胞的极化。

基于Rac1信号通路研究淫羊藿苷对慢性阻塞性肺疾病模型小鼠肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬功能的影响

目的探讨淫羊藿苷基于Rac1信号通路改善慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型小鼠肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬功能障碍的作用机制。方法40只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、Rac1抑制剂(2.5 mg/kg)组和淫羊藿苷低、高剂量(40、80 mg/kg)组,每组8只,除空白组外其余各组小鼠采用香烟烟雾熏吸8周的方法制备COPD模型,造模后ip Rac1抑制剂或ig淫羊藿苷,1次/d,每周给药6次,连续4周。检测小鼠体质量、肺功能指标;ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-6、乳脂球表皮生长因子8(milk fat globule EGF factor 8,MFG-E8)和生长停滞特异性蛋白6(growth arrest specific protein 6,GAS6)含量;流式细胞术检测肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬能力、小鼠全血巨噬细胞M1/M2分型;苏木素-伊红染色(hematoxylineosin staining,HE)观察肺组织病理变化及肺泡平均截距(mean linear intercept,MLI)、单位面积平均肺泡数(mean alveolar numbers,MAN);qRT-PCR和Western blotting分别检测肺组织Rac1、P21蛋白激活激酶(P21 activated kinase,PAK)m RNA和蛋白表达;激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞吞噬及骨架结构变化。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、肺功能指标、吞噬及胞葬功能降低(P<0.05、0.01),MLI上升(P<0.01),MAN降低(P<0.01),肺组织中炎症因子IL-4、IL-6、TNF-α水平上升(P<0.05、0.01),胞葬辅助因子MFG-E8、GAS6水平降低(P<0.05),M1型巨噬细胞增多(P<0.05),肺组织Rac1、PAK mRNA及蛋白表达上调(P<0.05、0.01);与模型组比较,Rac1抑制剂及淫羊藿苷干预后小鼠肺功能指标好转(P<0.05、0.01),吞噬及胞葬功能均有改善(P<0.05、0.01),炎症因子水平降低(P<0.05、0.01),胞葬辅助因子水平增加(P<0.05),M2型巨噬细胞增多(P<0.05、0.01),肺组织Rac1、PAK m RNA及蛋白表达降低(P<0.05、0.01)。结论淫羊藿苷可以调控Rac1信号通路介导巨噬细胞骨架重排,改善COPD小鼠肺泡巨噬细胞吞噬及胞葬功能障碍。

基于AKT/mTOR通路探讨六君子汤抑制EC9706生长的作用机制

目的:探讨六君子汤对食管癌细胞EC9706的生长抑制作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)法检测六君子汤对EC9706细胞的活性抑制作用,流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期分布,Seahorse能量代谢分析系统检测细胞糖酵解速率和线粒体压力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和蛋白激酶B1(AKT1)mRNA相对表达,Western Blot检测各组细胞磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、mTOR和AKT1/2/3蛋白相对表达。结果:六君子汤浓度为200、300、400μg/mL时可显著抑制EC9706细胞活性(P<0.01)。选定六君子汤150、200μg/mL用于后续实验。流式细胞术结果表明,六君子汤可显著促进EC9706细胞凋亡(P<0.01),六君子汤200μg/mL可显著延长细胞S期,缩短G2/M期(P<0.05);糖酵解速率检测结果显示,六君子汤200μg/mL可显著抑制EC9706细胞的基础糖酵解、补偿糖酵解和糖酵解潜能(P<0.05);线粒体压力测试结果显示,六君子汤150μg/mL可显著抑制EC9706细胞ATP合成耗氧、基础呼吸值和非线粒体耗氧(P<0.05,P<0.01),六君子汤200μg/mL可显著抑制EC9706细胞的ATP合成耗氧、线粒体最大耗氧能力、基础呼吸值、非线粒体耗氧和备用呼吸能力(P<0.01);qRT-PCR结果显示,六君子汤150、200μg/mL可使EC9706细胞mTOR mRNA相对表达显著降低(P<0.05,P<0.01);六君子汤200μg/mL使EC9706细胞AKT1mRNA相对表达显著降低(P<0.01)。Western Blot结果显示,六君子汤150、200μg/mL可显著抑制p-mTOR和AKT1/2/3蛋白相对表达(P<0.05,P<0.01),六君子汤200μg/mL可显著抑制mTOR蛋白相对表达(P<0.01)。结论:六君子汤可通过干预AKT/mTOR通路促进食管癌细胞EC9706凋亡,诱导细胞周期阻滞,抑制细胞的能量代谢和生长。

六君子汤干预4NQO诱导食管癌模型小鼠的血清代谢组学研究

基于血清代谢组学探讨六君子汤治疗4-硝基喹啉-N-氧化物(4-nitroquinoline-N-oxide,4NQO)诱导食管癌模型小鼠的作用机制。选取35~45日龄小鼠100只,随机分为空白组、模型组、六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组、六君子汤高浓度组。除空白组外,其余小鼠自由饮用100μg·mL^(-1)的4NQO溶液16周,构建食管癌小鼠模型。六君子汤低、中、高浓度组分别用药物质量分数为18.2、36.4、54.6 g·kg^(-1)的定制饲料喂养,称量各组小鼠体质量和脏器质量计算脏器指数;采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察各组小鼠食管组织病理改变;超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS/MS)进行小鼠血清样本的代谢物采集,筛选潜在生物标志物及分析相关代谢通路。结果显示,模型组小鼠脾脏、胃脏器指数明显降低,肺、食管、肾的脏器指数明显升高,与模型组相比,六君子汤各浓度脏器指数无明显变化;HE结果显示,六君子汤能改善小鼠食管癌细胞浸润性生长及癌变情况;血清代谢组学分析筛选出9种六君子汤干预食管癌小鼠的潜在生物标志物,分别为尿刊酸(urocanic acid,UCA)、1-油酰甘油磷酸丝氨酸(1-oleoylglycerophosphoserine)、11-脱氧前列腺素E1(11-deoxy prostaglandin E1)、多肽链Leu-Glu-Lys-Glu、(±)4-羟基-5E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z-二十二碳六烯酸[(±)4-HDHA]、脲基琥珀酸(ureidosuccinic acid)、泛酸[(2R)-2,4-dihydroxy-3,3-dimethylbutanoic acid]、犬尿酸(kynurenic acid)和双环前列腺素E2(bicyclo prostaglandin E2),涉及的通路包括组氨酸、嘧啶、丙氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、泛酸和色氨酸代谢及辅酶a生物合成等。六君子汤对4NQO诱导的食管癌模型小鼠发挥治疗作用,其作用机制可能与调节小鼠体内氨基酸代谢、炎症反应和免疫功能有关。

六君子汤治疗食管癌的研究进展

六君子汤是健脾和胃的代表方,在晚期食管癌的辅助治疗中发挥着重要作用,能够联合放化疗减毒增效,降低化疗胃肠道不良反应,改善术后相关并发症,同时增强患者免疫力,提高患者生存质量,预防食管癌前病变。实验研究亦证实六君子汤可以调节炎症因子,阻断肿瘤细胞免疫逃逸,抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进食管癌细胞凋亡和自噬,逆转对化疗药物的耐药性,缓解胃肠高敏状态。但目前六君子汤治疗食管癌的机制研究多集中于单体成分、基因、蛋白等分子水平,需进一步明确其活性成分之间及活性成分与机体间的作用关系,深入诠释中药复方的系统性疗效;其次,亟需加强证据等级较高的大样本、随机、双盲的临床试验研究,以期为中医药治疗食管癌提供更多的理论和临床依据。

基于PPARγ信号通路探讨淫羊藿苷改善香烟烟雾提取物干预下肺泡巨噬细胞胞葬功能障碍的作用机制

目的:探讨淫羊藿苷基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路改善香烟烟雾提取物(CSE)诱导下肺泡巨噬细胞胞葬功能障碍及炎症反应的作用机制。方法:大鼠肺泡巨噬细胞NR8383分为空白组、10%香烟烟雾提取物干预后分为模型组、淫羊藿苷低、中、高浓度组(10、20、40μmol·L^(-1))、PPARγ抑制剂组、PPARγ抑制剂联合淫羊藿苷低、中、高浓度组。Alamar Blue法检测淫羊藿苷对NR8383细胞增殖及抑制作用;流式细胞术检测NR8383细胞胞葬功能;酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、乳脂球表皮生长因子8(MFG-E8)含量;蛋白免疫印迹法检测PPARγ、CD36、Ras相关C3肉毒菌毒素底物1(Rac1)蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测PPARγ、CD36、Rac1 mRNA的表达。结果:香烟烟雾提取物建立NR8383细胞胞葬功能障碍模型,与空白组比较,模型组胞葬率降低(P<0.05),TNF-α表达明显升高(P<0.05),TGF-β1、MFG-E8表达显著降低(P<0.01),明显下调PPARγ、CD36、Rac1 mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,应用淫羊藿苷后各组胞葬率明显升高(P<0.05,P<0.01),TNF-α表达显著降低(P<0.01),TGF-β1、MFG-E8表达明显增加(P<0.05),上调PPARγ、CD36、Rac1蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01);与淫羊藿苷单独用药组比较,PPARγ抑制剂联合淫羊藿苷组胞葬率明显降低(P<0.05),PPARγ蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),低浓度联合组CD36蛋白显著降低(P<0.01)低浓度及中浓度联合组Rac1蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论:淫羊藿苷改善香烟烟雾提取物导致的肺泡巨噬细胞胞葬功能障碍,其机制与调控PPARγ信号通路及细胞骨架结构重排相关。

丹参酮ⅡA抑制STAT3通路调节食管癌EC109细胞的周期与凋亡

目的:观察丹参酮ⅡA能否通过抑制信号传导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路影响食管癌EC109细胞的周期与凋亡。方法:对数生长期的EC109细胞分为空白组、不同浓度丹参酮ⅡA组、不同浓度stattic组及丹参酮ⅡA和stattic联合用药组,MTT法检测丹参酮ⅡA、stattic及联合用药对EC109细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;从70只4周龄SPF级BALB/c雌鼠中随机抽取10只作为空白组,其余小鼠右胁部皮下注射2×106个Ec109细胞建立食管癌模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组、丹参酮ⅡA低浓度组(20 mg·kg^(-1))、丹参酮ⅡA高浓度组(40 mg·kg^(-1))、stattic组(25 mg·kg^(-1))、stattic(25 mg·kg^(-1))+丹参酮ⅡA高浓度(40 mg·kg^(-1))组、顺铂组(1 mg·kg^(-1)),腹腔注射给药,每2天进行1次,连续35 d。给药期间每7天测量一次瘤体大小与小鼠体质量,考察药物对小鼠肿瘤生长的抑制作用;ELISA法检测移植瘤裸鼠血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的水平;Western Blot、RT-PCR检测食管癌EC109细胞与小鼠肿瘤组织细胞周期、凋亡相关蛋白及mRNA的表达水平。结果:细胞实验发现,与空白组比较,丹参酮ⅡA、stattic均可明显抑制EC109细胞增殖(P<0.01);丹参酮ⅡA能显著促进细胞进入G2期,促进其凋亡(P<0.05)。Western Blot及RT-PCR结果显示,丹参酮ⅡA能够抑制STAT3、p-STAT3、c-Myc、CyclinB1蛋白及mRNA的表达,促进凋亡因子Caspase-3、Caspase-9蛋白及mRNA的表达(P<0.05)。体内动物实验结果表明,与模型组比较,丹参酮ⅡA、stattic均能明显抑制裸鼠移植瘤生长(P<0.01),降低血清IL-6水平(P<0.05),抑制STAT3、p-STAT3、c-Myc蛋白及mRNA的表达(P<0.05),促进凋亡因子Caspase-3、Caspase-9蛋白及mRNA的表达(P<0.05);与stattic比较,联合用药组Caspase-3 mRNA、Caspase-9蛋白及mRNA的表达水平显著降低(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA能够诱导食管癌细胞EC109的G2期阻滞,促进其凋亡,其机制可能与抑制STAT3通路有关。

肿瘤相关巨噬细胞在食管癌发展中的作用

肿瘤相关巨噬细胞是肿瘤微环境的重要成员,在肿瘤发生发展中发挥重要作用。肿瘤相关巨噬细胞通过促进肿瘤发生和增殖、加速血管生成、促进侵袭和转移、促使转移前微环境形成、引发治疗耐药性和免疫抑制等方式密切参与多种肿瘤相关过程。鉴于其功能多样性和表型异质性,肿瘤相关巨噬细胞现在已成为肿瘤治疗的潜在靶点,主要包括抑制肿瘤相关巨噬细胞的募集,加速肿瘤相关巨噬细胞的耗尽或凋亡,激活肿瘤相关巨噬细胞的吞噬作用,以及调节肿瘤相关巨噬细胞抗肿瘤极化等。中医药靶向干预肿瘤相关巨噬细胞的策略在抑制肿瘤的发展方面颇具潜力,有望成为临床治疗食管癌新的手段与切入点,为肿瘤患者带来新的希望。

从“心包-三焦-膜”系统探析膜原理论

膜原是分布在躯体之内、脏腑之间,覆盖在脏腑、分肉等处,能够联络其他部位并汇聚气血津液且具有防御功能的膜状组织,是正邪转化及交争之地,具有约束肌肉、脏腑,抵御外邪入侵,布散气血津液的作用。膜原作为三焦运输气血津液的通路,与三焦在生理上相互联通,病理上相互影响,在“心包-三焦-膜”系统中具有重要意义。膜原属于正邪出入及交争之地,对疾病的转归及预后具有重要意义。

启膈散乙酸乙酯部位提取物通过抑制TGF-β_(1)信号通路干预食管癌细胞的迁移和侵袭

目的:探讨启膈散(QGS)对食管癌细胞TE-1迁移和侵袭能力的影响机制。方法:利用基因芯片技术筛选正常组和启膈散组差异表达基因,分析差异基因的本体功能和信号通路。噻唑蓝(MTT)比色法检测QGS对TE-1细胞活性的影响。后续验证实验分为空白组、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))组、TGF-β_(1)+QGS组、TGF-β_(1)+SB431542组。显微镜观察各实验组细胞形态,细胞划痕实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组细胞E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、果蝇母本抗生存因子2(Smad2)和果蝇母本抗生存因子7(Smad7)m RNA的表达水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞E-Cadherin、Vimentin、p-Smad2/3、Smad2/3和Smad7蛋白的表达。结果:QGS组与空白组之间有1487个差异基因,其中1080个下调,407个上调,下调基因占差异基因的72.63%。下调基因涉及的主要生物学过程有细胞骨架蛋白结合、ATP结合、腺苷酸核苷酸结合、腺苷酸核糖核苷酸结合等,涉及的京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路主要包括TGF-β信号通路、细胞周期、细胞外基质-受体相互作用蛋白、肿瘤中的通路、卵母细胞减数分裂等;上调基因主要参与RNA结合、DNA结合、转录调节子活性、转录激活子活性、核苷酸结合等生物学过程,涉及的KEGG通路主要包括丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、膀胱癌、肾细胞癌、癌中通路、p53信号通路等。与空白组比较,QGS(20、30、40、60、80 mg·L^(-1))干预TE-1细胞12、24、36、48、60 h后,细胞活性抑制率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),抑制率呈时间和浓度依赖性。与空白组比较,TGF-β_(1)组细胞变长,呈成纤维细胞表型。与TGF-β_(1)组细胞比较,TGF-β_(1)+QGS组细胞变短,形态恢复正常,呈上皮细胞表型;TGF-β_(1)+SB431542组细胞形态与TGF-β_(1)+QGS组相似。与空白组比较,TGF-β_(1)组细胞的迁移和侵袭能力增强,差异有统计学意义(P<0.05)。与TGF-β_(1)组比较,TGF-β_(1)+QGS组和TGF-β_(1)+SB431542组细胞迁移和侵袭能力受到抑制而减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。但TGF-β_(1)+QGS组和TGF-β_(1)+SB431542组之间的迁移和侵袭能力差异无统计学意义。与空白组比较,TGF-β_(1)组Vimentin和Smad2 m RNA的表达水平升高(P<0.05),E-Cadherin和Smad7m RNA表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与TGF-β_(1)组比较,TGF-β_(1)+QGS组和TGF-β_(1)+SB431542组的Vimentin和Smad2 m RNA表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),E-Cadherin和Smad7 m RNA的表达水平升高(P<0.05)。与空白组比较,TGF-β_(1)组Vimentin、p-Smad2/3和Smad2/3的蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),E-Cadherin和Smad7蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与TGF-β_(1)组比较,TGF-β_(1)+QGS组和TGF-β_(1)+SB431542组的Vimentin、p-Smad2/3和Smad2/3蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),E-Cadherin和Smad7蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:QGS乙酸乙酯提取物通过TGF-β_(1)途径抑制TE-1细胞的上皮-间质转化过程,减少TE-1细胞的迁移和侵袭。

健脾和胃法代表方六君子汤对4NQO诱导的食管癌模型小鼠治疗作用机制研究

目的探究六君子汤对食管癌模型小鼠治疗作用机制。方法采用4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitroquinolin-1-oxide,4NQO)诱导法构建食管癌小鼠模型。实验分为空白组、模型组、六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组和六君子汤高浓度组。苏木素伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察小鼠食管病理改变;免疫组化检测小鼠食管组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达;实时定量基因扩增荧光检测系统(real-time quantitative PCR detecting system,qPCR)检测小鼠食管组织葡萄糖转运蛋白-1(Glucose transporters-1,GLUT1)和尿路上皮癌相关基因1(urothelial cancer associated 1,UCA1)mRNA相对表达;蛋白印迹(Western blot,WB)检测小鼠食管组织丙酮酸激酶M2(Pyruvate kinase-M2,PKM2)、磷酸化丙酮酸激酶M2(phospho-PKM2,p-PKM2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phospho-mTOR,p-mTOR)、单羧酸转运蛋白2(monocarboxylate transporter 2,MCT2)、癌基因c-Myc、葡萄糖转运蛋白-1(Glucose transporters-1,GLUT1)蛋白相对表达。结果模型组有癌灶形成,肿瘤细胞突破上皮基底膜,浸润至粘膜下固有层,肿瘤细胞有明显异型性伴角化珠形成,部分呈乳头状,主要以高分化鳞状细胞癌为主,与正常组织之间界限不清;模型组小鼠食管组织α-SMA、Vimentin、PKM2、p-PKM2、MCT2、c-Myc、GLUT1蛋白相对表达和GLUT1 mRNA相对表达显著升高(P<0.05或P<0.01),UCA1 mRNA相对表达降低(P<0.05)。与模型组相比,六君子汤各浓度组小鼠食管癌变程度减轻,六君子汤中浓度食管组织α-SMA、Vimentin、p-PKM2、PKM2、MCT2、mTOR、c-Myc蛋白相对表达显著降低(P<0.05或P<0.01),UCA1 mRNA相对表达显著升高(P<0.05);六君子汤高浓度食管组织α-SMA、Vimentin、p-PKM2、PKM2、MCT2、p-mTOR、mTOR、c-Myc、GLUT1蛋白相对表达和GLUT1 mRNA相对表达显著降低(P<0.05或P<0.01),UCA1 mRNA相对表达显著升高(P<0.01)。结论六君子汤对4NQO诱导的食管癌模型小鼠治疗作用,可能是通过干预肿瘤微环境能量代谢实现的。

腠理玄解

根据《黄帝内经》对腠理的论述,以及中医古籍资料可知,腠理为位于肌肉之上、表皮之下,为气血充斥的具有一定纹理的筋膜组织及其间隙。腠理具有“开”“闭”特性,有留存卫气营血并供其出入以及主司行津出汗的功能。腠理与三焦的关系为三焦确为一腑,其应在腠理;腠理得三焦充养,三焦傍腠理出入。腠理在卫气营血及津液代谢中发挥着重要的作用。