药物-蛋白结合作用的分析方法研究

综述了定性和定量研究药物 蛋白结合作用的部分方法,包括色谱、毛细管电泳、核磁共振光谱、质谱等方法及一些传统方法如平衡透析、超滤等方法,并讨论了各自的优点和局限性。

格列美脲蛋白结合作用的高效液相色谱迎头分析法

目的 研究格列美脲与人血清白蛋白(humanserumalbumin,HSA)结合作用。方法 采用高效液相色谱 迎头分析法(highperformanceliquidchromatography frontalanalysis, HPLC FA)。色谱柱为内表面反相(internal surfacereversed phase,ISRP)硅胶柱PinkertonGFFII S5 80(1.50mm×4 .6mmID, 5μm);流动相为 67mmol·L-1磷酸盐等渗缓冲液 (pH 7. 4, I=0 17mol·L-1 );流速 0 2mL·min-1;检测波长 230nm;进样量 900μL;柱温37℃。结果应用非线性回归参数估算求得HSA分子上两类结合位点结合的格列美脲分子数及相应的结合平衡常数:n1 =1和K1 =5. 1 (μmol·L-1 )-1;n2 =7和K2 =0. 017 (μmol·L-1 )-1。结论 HPLC FA法操作简便,适用于研究格列美脲与HSA的结合作用。

毛细管电泳-迎头分析法测定血清或血浆中氯氮平的游离浓度

采用毛细管电泳 -迎头分析模式体外实验测定了人血清白蛋白溶液、人血浆、兔血清和血浆样品溶液中游离氯氮平的浓度 .根据前沿峰的峰高直接测定了样品溶液中的游离氯氮平浓度 ,并与传统超滤法进行了比较 .通过考察施加的电压和运行缓冲液的组成对氯氮平电泳峰平台形成的影响确定了最优分离条件 .

盐酸丙咪嗪-人血清白蛋白结合作用的毛细管区带电泳测定法

采用毛细管区带电泳(CZE)技术,研究了抗抑郁三环类碱性药物盐酸丙咪嗪与人血清白蛋白(HSA)的结合作用。通过经典方法(超滤法)对该方法进行了方法学确证。该法适宜于水溶性良好的碱性药物(迁移时间足够短,且与蛋白质形成的复合物较稳定) 蛋白系统中分子间相互作用的定量考察。应用SAS统计软件中非线性回归分析平台自编程序,求得了丙咪嗪与HSA的结合常数和结合位点数:K=0 18L/μmol;n=2 2。实验证明:该法可靠、简单、高效、低耗。

亲和毛细管电泳法测定茶碱人血清白蛋白的结合常数

目的 :测定茶碱与人血清白蛋白的结合平衡常数。方法 :亲和毛细管电泳法 ,以 2 0mmol/LpH7 4的磷酸盐缓冲液 (含氨基乙酸 0 . 5mol/L ,EDTA 1mmol/L)为运行缓冲液 ,茶碱作为运行缓冲液的添加剂 ,样品为含 5 %丙酮的 30 μmol/L人血清白蛋白溶液 ,采用更加可靠的描述性指标———淌度比 (M)估算了茶碱与人血清白蛋白的结合平衡常数 ,检测波长为 2 14nm。结果 :测得的茶碱与人血清白蛋白的结合平衡常数与文献值基本吻合。结论 :亲和毛细管电泳法可用于茶碱 蛋白结合常数的快速测定。

大肠杆菌O152中wfgD基因编码的β-1,3-葡萄糖基转移酶产物结构的质谱表征

大肠杆菌O152抗原的寡糖重复单位中含葡萄糖-β-1,3-N-乙酰葡萄糖胺(Glc-β-1,3-GlсNAc)连接键。本研究采用电喷雾离子化多级串联质谱技术对以人工合成的天然受体底物的结构类似物苯氧基十一烷二磷酸-N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc-β-PO3-PO3-(CH2)11-O-phenyl(GlcNAc-PP-PhU))为受体底物,尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-Glc)为给予体底物的酶促反应产物进行了详细的结构表征。电喷雾离子化多级串联质谱图中观察到的主要碎片源于磷酸二酯键部分和糖苷键的裂解。此外,由观察到的二糖产物非还原端碎片获得了序列信息;跨环断裂碎片及源于吡喃环取代基消除的‘内在’碎裂离子可提供组成产物的单糖残基连接方式信息。广泛的碎裂信息表明wfgD基因编码UDP-Glc:GlcNAc-pyrophosphate-lipid中的β-1-3葡萄糖基转移酶。

糖基转移酶反应的基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法监测

以wabD(大肠杆菌O77中O抗原基因簇内)编码的α-1,3-甘露糖转移酶、wfgD(大肠杆菌O152中O抗原基因簇内)编码的β-1,3-葡萄糖转移酶和wfeD(志贺氏菌鲍氏O14中O抗原基因簇内)编码的β-1,4-半乳糖基转移酶酶促反应产物为研究对象,尝试应用碰撞诱导解离(CID)负离子模式基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术建立简单、高效的糖基转移酶监测方法。该方法首先直接用质谱分析0.3μL未经色谱分离、除盐处理的反应混合物,随后应用CID串联质谱技术对酶活反应产物进行结构表征,实现酶活反应的快速检测。研究结果表明,CID MALDI-TOF MS平台适用于新建克隆的糖基转移酶酶活反应的监测,与现有的高通量方法相比,在速度、灵敏度、重现性、自动化和溶剂消耗方面具有绝对优势。

药物间置换相互作用的毛细管电泳迎头分析法研究

将 18 甲基炔诺酮加到人血清白蛋白 酮洛芬平衡溶液中,室温孵育达平衡后应用毛细管电泳 迎头分析法研究了 18 甲基炔诺酮和酮洛芬在人血清白蛋白分子上的置换相互作用。一大体积样品虹吸进样至未涂层毛细管(65cm×50μmi d ,有效长度 35cm),进样时间 80s,毛细管两端高度差 11cm,工作电压 10kV,运行缓冲液为67mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7 4),游离酮洛芬浓度由前沿峰的高度直接测定。当酮洛芬样品溶液中酮洛芬的总浓度分别为 100μmol/L和 200μmol/L时,随着 18 甲基炔诺酮加入量的增加 (18 甲基炔诺酮的浓度由 0增至 200μmol/L),游离酮洛芬的浓度分别从 22 4增至 26 4μmol/L和从 82 1增至 106 2μmol/L。由上面的结果可推论:高浓度的 18 甲基炔诺酮可将酮洛芬从它的第二类结合位点上置换出来。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法区分大肠杆菌糖基转移酶基因

采用高能碰撞诱导解离(CID)-负离子模式基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱技术(MALDITOF MS)区别wfgD(大肠杆菌O152中O抗原基因簇内)编码的β-1,3-葡萄糖转移酶和wfgD(大肠杆菌O77中O抗原基因簇内)编码的α-1,3-甘露糖转移酶酶促反应产物-两个脂寡糖非对应异构体。结果表明:由高能CID-MALDI TOF质谱图中产物离子[B3]/[Y3]丰度比率的差别可明确区别两个酶促反应产物。并发现碰撞能量为1.0kV时,碰撞靶气的压力变化可影响产物离子[B3]/[Y3]的丰度比率。推断MALDI-TOF质谱图中,两个脂寡糖非对应异构体的磷酸二脂键部分和糖苷键的裂解依赖于糖基给予体的立体化学。

格列本脲蛋白结合作用的HPLC-FA法研究

目的:建立高效液相色谱-迎头分析法(HPLC-FA)研究格列本脲与人血清白蛋白(HSA)的结合作用。方法:采用HPLC-FA法,色谱柱为 Pinkerton GFFⅡ-S5-80(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为67 mmol·L^(-1)磷酸盐等渗缓冲液(pH 7.4,I=0.17 mol·L^(-1)),流速0.2 mL·min^(-1),检测波长230 nm,进样量900μL,柱温37℃。结果:应用非线性回归参数估算求得 HSA 分子上两类结合位点结合的格列本脲分子数及相应的结合平衡常数:n_1,=1.5和 K_1=1.1(μmol·L^(-1))^(-1);n_2=3.8和 K_2=0.012(μmol·L^(-1))^(-1)。结论:HPLC-FA 法操作简便,适用于研究格列本脲与 HSA 的结合作用。本实验选定的进样体积为900μL。

基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法检测罕见单糖合成酶

以VioF(普罗威登斯菌O30中O抗原基因簇内)编码的甲酰基转移酶酶促反应产物为研究对象,采用碰撞诱导解离(CID)负离子模式基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术建立简单、高效的罕见单糖合成酶监测方法。本方法首先直接质谱分析0.3μL未经色谱分离、除盐处理的酶促反应混合物,随后应用CID串联质谱技术对酶活反应产物进行结构表征,实现酶活反应的快速监测。结果表明:高能CID MALDI-TOF/TOF-MS平台适用于新建克隆的单糖合成酶酶活反应的监测,与现有的监测方法相比,在速度、灵敏度、重现性、自动化和溶剂消耗方面具有绝对优势。

酮洛芬与蛋白结合作用的高效液相色谱-迎头分析法研究及其与高效毛细管电泳迎头分析法的比较

采用高效液相色谱 迎头分析法(HPLC FA),以67mmol/L(pH7 4,I=0.17mol/L)的等渗磷酸盐缓冲液为流动相,PinkertonGFFⅡ S5 80内表面反相柱(150mm×4 6mmi d ,5μm)为固定相,254nm下检测,研究了酮洛芬与人血清白蛋白(HSA)的结合作用,通过非线性回归参数估算求得酮洛芬与HSA的结合参数。与高效毛细管电泳 迎头分析法(HPCE FA)相比,HPLC FA法具有高灵敏度的优势,但进样量较大,分析时间较长。HPLC FA法的测定结果表明,HSA分子上酮洛芬的两类结合位点(第一类和第二类)共存。当酮洛芬与HSA的量比较低时,酮洛芬主要结合在第一类位点;当它们的量比较高时,结合才发生在第二类结合位点。

长链烷基锂与6,6-二烷基富烯的反应研究——取代茂钛、锆化合物的合成

研究了正庚基锂、正辛基锂同 6,6-二烷基富烯反应的立体和溶剂效应对反应类型的影响。在弱极性溶剂中 (方法 A,B) ,正庚基锂、正辛基锂同 6,6-二烷基富烯主要发生加成反应 ;在极性溶剂中 (方法 C) ,则倾向于加成和还原两种反应。利用上述反应形成的环戊二烯基阴离子同Ti Cl4、Zr Cl4反应 ,合成了一系列新的取代茂钛、锆化合物。

咖啡书屋阅读体验创新经营模式的探索

现代都市人精神资源匮乏,当代读者对时尚与知识并存的生活方式的追求不断提高,不同年龄阶段的读者对书籍种类的需求不断加大。通过搜集的资料以及问卷调查的结果的分析,发现现代都市人阅读严重缺乏,因此希望通过本项目,为广大读者营造一个安静、舒适的阅读环境,满足其精神和物质需要。

“化”繁为简求真知“学”以致用提素养——以大概念为统摄的单元情境化作业设计

要实现素养为本的教学,势必需要优化作业设计,向减负、提质两个方向进行优化。设计作业的过程中应注重大概念的统摄作用,并遵循作业设计的以下基本原则:紧紧围绕单元认知结构,以真实情境作为线索,对学生精准分层要求,有效发挥作业的育人功能。

浅析通货膨胀长期化原因及抑制对策

2011年,国际经济形势不容乐观,中东政治局势也相当严峻,投资者悲观情绪弥漫而导致大宗商品市场价格呈现区间震荡的走势。据此预见,2012年世界经济有可能再陷低谷。在此国际形势下,中国经济下行的风险有所加大,但我国近年来采取的精细化、微调节的宏观经济运行方式避免了大幅度经济波动带来的风险,取得了良好的稳定效果,通胀压力有所弱化。国内要素价格上涨的压力得到释缓,这能否说明通货膨胀已经渐渐离我们远去了呢?该文试从货币超发、国际原材料价格的变动,成本推进、季节性食品价格的攀升以及国内要素价格的变动这些因素来浅析我国通货膨胀的长期、持续存在性,继而浅层解读国家关于抑制、放缓通货膨胀的相关政策并提出一些个人观点和建议,仅供商榷。

海泡石的活化对湿法制备天然橡胶复合材料性能的影响

为提升海泡石补强橡胶的应用效果,首先采用有机酸活化制备高活性海泡石(MSep);比表面积、X射线衍射和光电子能谱测试结果表明,MSep的晶体结构完整,比表面积和表面活性明显增强;借助橡胶加工分析仪、扫描电镜和动态力学热分析等方法研究了经湿法乳液混合制备的不同活性及用量的海泡石/天然橡胶复合材料的结构与性能。结果表明,复合材料中的MSep分散性较好,界面相互作用增强;在MSep用量小于30 phr时,随用量增多,拉伸强度和300%定伸应力等逐渐提升,硫化效率则逐渐降低;MSep用量过多时,受填料聚集的影响,综合补强性能下降;此外,随海泡石用量的增多,复合材料储能模量逐渐增大,损耗因子最大值逐渐减小。

给学困生“求索”的数学课堂

在实施数学课程标准过程中，自主探索、小组讨论、合作交流已成为学生主要的导向的学习方式。学生在教师的引导下，学会自主学习，学会与人合作，学会主动交流。但是，在倡导自主学习的过程中，仍有部分学生不习惯自主学习，不能很好适应这种新型的学习方式，他们需要教师给予更多的帮助和个别指导。因此，我们要关注学生的个体差异和不同学生的学习需求。下面就谈谈我在这方面的一些做法。

dTDP-L-鼠李糖生物合成路径的电喷雾多级串联质谱法表征

本研究以2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-L-鼠李糖(dTDP-L-Rha)生物合成路径涉及的系列酶促反应产物为研究对象,建立了电喷雾碰撞诱导解离串联质谱(CID-ESI-MSn)对罕见单糖生物合成路径的表征方法。该方法首先通过ESI-MS技术分析2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-D-葡萄糖-4,6-脱氢酶(RmlB)、2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-4-酮-6-脱氧-葡萄糖-3,5异构酶(RmlC)和2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-4-酮-鼠李糖还原酶(RmlD)酶活产物的形成,随后应用CID-ESI-MSn技术对酶促反应终产物L-鼠李糖(dTDP-L-Rha)的结构进行表征。结果表明:dTDP-L-Rha的生物合成始于2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-D-葡萄糖(dTDP-DGlc),依次涉及RmlB、RmlC和RmlD三个酶的参与。这与传统的高效液相色谱法(HPLC)监测、纯化制备,核磁共振(NMR)及ESI-MS结构表征的分析结果一致。该方法简单、灵敏、快速,适用于重要罕见单糖生物合成路径的表征。

双（取代环戊二烯基）二氯化钛的晶体结构分析

报道了双（１－正戊基环己基茂）二氯化钛［（η５－Ｃ５Ｈ４Ｃ（ＣＨ２）５（Ｃ５Ｈ１１－ｎ］２ＴｉＣｌ２（Ｉ）及双（１－甲基－１－（α－噻吩基）乙基环戊二烯基）二氯化钛［η￣５－Ｃ５Ｈ４Ｃ（ＣＨ３）＿２－］２ＴｉＣｌ２（Ⅱ）的晶体结构和分子结构。二者均系单斜晶系，（Ｉ）的空间群为Ｐ２／ｎ，晶胞参数ａ＝１４．１８０（２），ｂ＝６．５６２（１），ｃ＝１７．０４６（３），β＝９９．６３（１）°，Ｚ＝２，Ｖ＝１５６３．８，Ｄｘ＝１．１８８ｇ／ｃｍ３，Ｆ（０００）＝５９６，Ｍｒ＝５５３．５６，λ＝０．７１０７３μ＝４．５９ｃｍ－１，Ｒ＝０．０５８，Ｒｗ＝０．０６６；（１）的空间群为Ｃ２／ｃ，晶胞参数ａ＝２５．７１３（１），ｂ＝６．６１７（１），ｃ＝１３．５９１（１），β＝９２．７８（２）°，Ｚ＝４，Ｖ＝２３０９．８，Ｄｘ＝１．４３０ｇ／ｃｍ３，Ｍｒ＝４９７．４１，λ＝０．７１０７３，μ＝７．８２２ｃｍ－１，Ｆ（０００）＝１０３２，Ｒ＝０．０５５，Ｒｗ＝０．０７２。茂环上取代基对茂环金属化合物的结构产生较大影响，空间阻碍的增大使得取代基与茂环相连Ｃ－Ｃ单键增长。