先天性巨结肠症发病机制的分子遗传学研究进展

先天性巨结肠症（HD）是一种小儿常见神经嵴源性肠道异常性疾病，病因复杂，而遗传因素是影响其发病的主要因素，现将HD分子遗传学的发病机制和研究进展作一综述。

InnVit基因对永生化黑素细胞B10BR迁移的影响

目的分析InnVit基因对永生化黑素细胞B10BR迁移的影响,探讨InnVit基因对黑素细胞生物学功能的调控情况。方法化学合成InnVit基因特异性SiRNA,构建InnVit基因表达载体P3XF-P120,lipofectamineTM2000转染B10BR细胞。半定量RT-PCR鉴定抑制和过表达效率;Transwell观察InnVit基因抑制和过表达后黑素细胞的迁移能力,明胶酶谱分析MMP2和MMP9的活性。结果成功在永生化黑素细胞B10BR中抑制和过表达InnVit基因。细胞处理20h后,抑制和过表达组Transwell滤膜下层黏附细胞数与对照组相比无显著性差异(P>0.05),MMP2和MMP9活性较对照组也无显著性差异(P>0.05)。结论InnVit基因对黑素细胞的迁移无明显调控作用。

白癜风与氧化-抗氧化失衡

白癜风是一种较常见的色素脱失性疾病,临床上以表皮黑素细胞破坏缺失而出现色素脱失斑为主要特征,严重影响患者的外观美容。白癜风的病因学分子机制目前尚无定论,存在多种假说。近年来,对白癜风患者机体抗氧化水平的研究日益增多,越来越多证据提示,机体氧化-抗氧化平衡失调,导致局部微环境中活性自由基大量聚集,引起氧化应激,造成细胞损伤,是引起白癜风发病的一个重要因素。

EDNRB基因编码区点突变及多态性在浙江地区散发性先天性巨结肠症中的检测与分析

本实验应用聚合酶链反应-单链构象多态性(single strand confbrmation polymorphism analysis of polymerase chain reaction products,PCR-SSCP)和DNA直接测序技术,对75例浙江地区散发性先天性巨结肠病例EDNRB基因编码区的全部7个外显子,进行了点突变与单核苷酸多态性的检测与分析,探讨浙江地区先天性巨结肠患者EDNRB基因的突变特征,阐明EDNRB基因与散发性先天性巨结肠症发病之间可能存在的关系。结果有6例患者在第4外显子上检测到密码子277位点 CTG→CTA的置换,导致亮氨酸的同义突变(L277L),属于单核苷酸多态性,发生率为8％(6/75)。有 2例患者在第2外显子上检测到密码子185位点GTG→ATG的置换,导致缬氨酸到蛋氨酸的错义突变(V185M),此突变型未在国内外文献中报道过,认为是新的基因突变型,突变率2．7％(2/75)。研究结果表明,浙江地区先天性巨结肠群体可发生EDNRB基因的杂合性突变,提示EDNRB基因与先天性巨结肠症的发病存在一定程度的关联。

高职英语智慧课堂研究——以智慧树平台为例

新时代背景下,先进的信息化技术为英语教学工作带来了全新的机遇,高职英语教学的开展可以积极利用智慧树平台,建立全新的英语教学模式,充分发挥信息技术的积极作用,进而不断满足学生的学习需求以及教师的教学需求。以智慧树平台为载体,以英语教学模式为研究对象,提出了“智慧课堂”的理念和策略,旨在构建以学生为中心的教学模式,以此来不断提高高职英语教学质量,同时也为“智慧课堂”的实践提供了思路与理论支撑。

跨文化英语教学下学生自主学习能力培养研究

在当前经济全球化背景下,现代社会的快速发展有赖于从事各行业的高素质人才,同时对人才所具备的英语口语和表达能力也提出了更高的要求。文化多元背景促使信息交流日益密切和频繁,推广国家特色文化成为未来的主要方向。在开展英语教学工作的过程中,应注重引导学生明确自己与本科院校学生英语水平存在的差距,注重满足社会日益发展的需求,提高参与课堂和参与训练的积极性,由此能够更好地培养学生的自主学习能力。

教学能力视域下“高职英语”课程教学改革研究

英语教学是高职院校教育工作中的重要组成部分,这个学科具有一定的难度,需要教师对学生进行正确的指导,始终将提高学生的综合素质能力作为各项教学工作开展的核心,深入剖析现今存在的英语教学问题,结合问题进一步创新教学手段,让学生既能掌握扎实的英语理论基础,又具备良好的英语应用能力,进而为社会输送更多优秀的人才。对“高职英语”课堂教学改革工作进行了深入分析,以期为高职院校英语教学工作的开展提供相应参考。

黄芩苷对H_2O_2氧化损伤人黑素细胞的保护机制研究

目的:探讨黄芩苷对H_2O_2氧化损伤正常人黑素细胞的保护作用及其机制研究。方法:构建H_2O_2氧化损伤黑素细胞模型,通过观察不同浓度的黄芩苷处理H_2O_2氧化损伤正常人黑素细胞,采用倒置显微镜观察黄芩苷对黑素细胞形态的影响;cell counting kit-8(CCK-8)法检测黄芩苷对黑素细胞增殖活力作用;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测黄芩苷对黑素细胞LDH表达的影响,并通过流式细胞仪检测活性氧(ROS)水平,荧光实时定量RT-PCR检测过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶1(peroxidase 1,GPX1)m RNA表达情况,通过ELISA试剂盒检测黄芩苷和H_2O_2处理黑素细胞后分泌的热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)。结果:镜下观察黄芩苷给药后细胞较对照组形态明显改变,细胞数增多;黄芩苷作用黑素细胞后增殖率较对照组升高(P<0.05);黄芩苷明显抑制黑素细胞中LDH表达,呈剂量-效应关系(P<0.05)。黄芩苷能显著促进CAT和GPX1m RNA表达,且明显抑制HSP70分泌。结论:黄芩苷对H_2O_2氧化损伤的正常人黑素细胞具有明显保护作用,可为临床白癜风的治疗提供参考。

天然药物对细胞免疫的影响作用

天然药物主要是指来源于动植物及其他生物,具有明确治疗作用的单一成分或多组分药物,包括来源于植物、微生物、海洋生物、内源性生物活性物质等药物。除直接供药用的天然产品或简单加工品外,它也包括从中提取的化学药物、提取物或浸出物。临床发现天然药物及其提取物与免疫功能,尤其是细胞免疫密切相关,就天然药物及其提取物与与细胞免疫的关系做一综述。

敏感性皮肤的分类

敏感性皮肤是一种特殊的皮肤类型,主要发生在面部,大多有灼热、刺痛、瘙痒及紧绷等主观症状。敏感性皮肤临床有逐年增多的趋势,研究也逐渐深入。对敏感性皮肤的分类目前有按发生因素、敏感程度、临床症状、生理参数等多个标准。本文对现有的敏感性皮肤的分类标准和与临床的关系作一综述。

复方倍他米松注射液联合治疗后进展期非节段型白癜风稳定率及影响因素分析

目的探讨复方倍他米松注射液联合治疗进展期非节段型白癜风患者后病情稳定率及影响因素。方法回顾性收集2022年10月至2023年4月杭州市第三人民医院皮肤科白癜风专病门诊就诊并接受复方倍他米松注射液联合治疗的进展期非节段型白癜风患者,记录治疗后3个月的皮损稳定率。分析发病特征、病程、病情或治疗方法等因素对白癜风稳定率的影响。计数资料的组间比较采用χ2检验。采用logistic回归分析治疗效果的影响因素。结果纳入145例复方倍他米松注射液联合治疗的进展期非节段型白癜风患者,男56例,女89例,14~67(35.43±11.54)岁。18例接受1次注射,稳定10例(55.6%);105例注射2次,稳定62例(59.0%);22例注射3或4次,稳定12例(54.5%)。治疗后总体稳定率为57.9%(84例)。白斑面积<1%体表面积的患者治疗稳定率(42/47,89.4%)高于白斑面积≥1%的患者(42/98,42.9%,P<0.001);病程≤2年的患者治疗稳定率(32/41,78.0%)高于病程>2年的患者(52/104,50.0%,P<0.05);伴特殊临床标记(同形反应、三色白癜风、纸屑样外观、炎症性白癜风等)的患者(4/21,19.0%)治疗稳定率低于无临床标记组(80/124,64.5%,P<0.001)。快速进展期患者复方倍他米松注射液治疗同时联合光疗组的稳定率高于未联合光疗组[(33/44,75.0%)比(21/44,47.7%),χ^(2)=6.90,P=0.009]。白斑面积≥1%且复方倍他米松注射液治疗2次的患者中,联合光疗组的稳定率(21/36,58.3%)也高于未联合光疗组(12/37,32.4%;χ^(2)=4.94,P=0.026)。是否为初发、是否有发病诱因、是否有家族史、不同白癜风疾病活动度评分、不同治疗次数和间隔时间的患者组间,治疗后稳定率差异无统计学意义(均P>0.05)。多因素logistic回归分析显示,白斑面积大小(OR=8.11,95%置信区间:2.74~24.04)、病程长短(OR=0.26,95%置信区间:0.07~0.99)、有无特殊临床标记(OR=6.37,95%置信区间:1.72~23.57)和是否联合光疗(OR=0.34,95%置信区间:0.15~0.77)均为影响患者治疗效果的因素(均P<0.05)。结论复方倍他米松注射液可能适用于轻中度进展期白癜风,尤其适合白斑面积<1%,不适用于面积>5%的白癜风患者,且联合光疗可提高进展期白癜风的治疗稳定率。

关于大数据时代高职英语混合式教学模式

在新的历史发展阶段,我国的教育事业已经取得了很大的成绩,但是传统教学模式的弊端仍然存在,在一定程度上对学生的学习产生了消极影响。英语是高职院校的一门重要基础课程,对学生的未来学习和发展具有重要意义。针对当前高职英语教学中暴露出的突出问题,教师一定要引起重视,树立发展意识和创新意识,尝试将混合式教学模式应用到课堂教学中,充分发挥其教学优势,从而达到推动高职英语教学快速发展的目的。

“互联网+”背景下高职英语融入思政元素路径探究

随着社会的快速发展,我国积极推行素质教育,更加注重学生综合素质和综合能力的培养和发展。在高职院校的教育中,英语教学逐渐受到重视,更加侧重培养学生的英语综合应用能力。在“互联网+”视域下,在开展英语教学时注重运用多元化的教学方式,将思政元素融入高职英语教学中,推动高职院校现代化教育教学的快速发展。

中国人散发性先天性巨结肠症内皮素受体B基因的研究

目的研究中国人散发性先天性巨结肠症内皮素受体B基因的特征,探讨内皮素受体B基因与先天性巨结肠症发病的关系。方法收集散发性先天性巨结肠症病例75例和正常对照40例,通过盐析法从外周血中提取DNA,应用聚合酶链反应-单链构象多态性和变性高效液相色谱技术,对内皮素受体B基因的第1a、1b和4外显子进行分析,并通过DNA测序确定阳性样本的碱基改变方式。结果6个病例在第4外显子上存在多态性改变,改变方式均为碱基75487位点上G→A的置换(Leu277→Leu),发生率为8.0%(6/75)。正常对照样本该位点没有此种变化。所有病例的第1a、1b外显子均无异常改变。结论中国人散发性先天性巨结肠症患儿中可检测到内皮素受体B基因的多态性改变,内皮素受体B基因是先天性巨结肠症的易感基因。

白癜风患者病程与抗酪氨酸酶抗体的相关分析

白癜风是一种获得性皮肤色素缺失性疾病，以局部黑素细胞部分或完全缺失导致皮肤白斑为主要特征，其发病机制复杂，目前自身免疫学说被多数研究者认同。有研究显示，白癜风患者体内存在抗酪氨酸酶抗体，且其水平与病情活动性相关。我们在纯化表达人酪氨酸酶优势抗原表达肽TYR240—479并进行白癜风抗体检测系统优化的基础上，检测大样本白癜风患者血清抗酪氨酸酶IgG抗体，分析不同病程与患者抗体水平的相关性。

女贞子及其单体促进小鼠成黑素细胞迁移的研究

目的体外研究女贞子及其单体酪醇、齐敦果酸对小鼠成黑素细胞系NCCmelb4M5迁移的影响。方法培养小鼠成黑素细胞NCCmelb4M5，用MTT法检测中药对成黑素细胞增殖的影响，应用细胞划痕实验和Transwell小室迁移实验分析中药对成黑素细胞迁移的作用。结果0．125mg／mL组女贞子、O．08mg/mL组酪醇以及0．0625mg／mL组齐敦果酸无明显细胞毒性且不明显刺激细胞的增殖，选择工作浓度作用于NCCmelb4M5细胞，女贞子和酪醇作用组可明显促进细胞划痕的愈合。Transwell实验中成黑素细胞穿膜数也显著增加（P〈0．05）。而齐敦果酸对成黑素细胞的迁移无明显刺激作用。结论女贞子可明显刺激小鼠成黑素细胞迁移，酪醇可能是女贞子促进成黑素细胞迁移的有效成分之一。

卵巢滤泡激素在干扰素γ介导的黑素细胞凋亡以及趋化因子分泌中的作用研究

目的研究卵巢滤泡激素(FLCN)在干扰素γ(IFN-γ)介导的黑素细胞凋亡及趋化因子分泌中发挥的作用。方法从正常人包皮环切组织及白癜风移植患者正常部位的吸疱表皮分离正常原代黑素细胞及白癜风原代黑素细胞。采用Western印迹检测正常原代黑素细胞、白癜风原代黑素细胞及人原代黑素细胞系PIG1细胞中FLCN蛋白的表达。以10 ng/ml IFN-γ刺激48 h的PIG1细胞为诱导组,未经处理的PIG1细胞为对照组,采用qRT-PCR检测两组细胞FLCN及自噬相关微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、Beclin基因mRNA表达,Western印迹检测FLCN、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ水平及腺昔酸激活蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化水平。进一步对采用10 ng/ml IFN-γ刺激的黑素细胞感染FLCN抑制病毒进行不同的处理,分为阴性对照组、FLCN抑制组、抑制FLCN及添加mTOR抑制剂的自噬增强组和抑制FLCN及添加AMPK抑制剂的自噬抑制组。采用流式细胞仪检测各组PIG1细胞凋亡,酶联免疫吸附实验检测各组细胞上清液中趋化因子CXCL10和CCL20的浓度。多组间计量资料比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD-t检验。结果正常原代黑素细胞(0.850±0.120)、白癡风原代黑素细胞(1.507±0.170)和PIG1细胞(0.697±0.130)FLCN蛋白的相对表达差异有统计学意义(F=50.09,P<0.001),白癜风原代黑素细胞高于正常原代黑素细胞和PIG1细胞(t=4.06、5.89,均P<0.01)。诱导组FLCN mRNA及蛋白相对表达均高于对照组(均P<0.01),LC3Ⅱ、Beclin mRNA及蛋白相对表达均低于对照组(均P<0.01);诱导组PIG1细胞LC3Ⅱ/Ⅰ水平(0.72±0.02),AMPK磷酸化水平(0.714±0.023)低于对照组(1.13±0.02、1.176±0.002,t=7.34,6.67,均P<0.01),mTOR磷酸化水平(1.051±0.023)高于对照组(0.451土0.016,t=3.81,P=0.009)。对照组、诱导组及各处理组PIG1细胞凋亡率及CXCL10、CCL20浓度差异均有统计学意义(均P<0.001),诱导组高于对照组,FLCN抑制组低于阴性对照组,自噬增强组低于FLCN抑制组,自噬抑制组高于FLCN抑制组(均P<0.05)。结论白癜风黑素细胞中高表达FLCN,FLCN表达以及下游信号通路受IFN-γ调控,FLCN可通过调节自噬参与IFN-γ介导的黑素细胞凋亡和趋化因子分泌。

黑素生成素诱导小鼠成黑素细胞增殖和分化的研究

目的观察从胎盘中提取的黑素生成素对小鼠成黑素细胞NCCmelb4M5增殖和分化的影响，从诱导成黑素细胞增殖和分化的角度，探讨其治疗白癜风的可能机制。方法NCCmelb4M5细胞的增殖应用常规MTT法检测；倒置显微镜直接观察黑素生成素作用后细胞形态的变化。RT-PCR检测不同浓度黑素生成素作用后细胞表面分子表达的变化。结果50，100，200μg／mL的黑素生成素均可促进NCCmelb4M5细胞的增殖（P〈0．001），100μg/mL作用效果最为明显；50，100μg/mL黑素生成素可以刺激表面分子c-Kit和酪氨酸酶在NCCmelb4M5细胞中的表达由阴性转为阳性，并增加小眼畸形相关转录因子（MITF）在细胞内的表达。100μg／mL的黑素生成素可明显诱导NCCmelb4M5细胞的形态从成黑素细胞向黑素细胞改变。结论从胎盘中提取的黑素生长素可诱导NCCmelb4M5细胞由成黑素细胞向黑素细胞分化，这种诱导作用可能是使白斑复色的途径之一。

Nrf2基因启动子区多态性与白癜风的发病风险

目的分析Nrf2基因启动子区多态性与白癜风发病风险的关联性，探索Nrf2基因在白癜风发病中的作用。方法应用DNA直接测序的方法分析300例健康样本和300例白癜风样本Nrf2基因的-686A／G、-684G／A和-650C／A多态性位点，-20bp和-6bp之间的（CCG）n数目可变串联重复序列（VNTR）多态性则通过基因扫描进行分型。基因型频率和等位基因型频率分析应用Χ^2检验，并通过计算OR值和95％可信区间分析基因与疾病的关联强度。结果各位点的对照组和病例组样本均符合Haray—Weinberg遗传平衡定律。白癜风组-650C／A位点的带A等位基因的基因型（CA型＋AA型）的频率为59．0％，高于健康对照组（43．3％）（Χ^2=7．933，P〈0．05）；A等位基因频率（36．5％）也明显高于健康对照组（25．0％）（Χ^2=18．096，P〈0．01），该位点的A等位基因与白癜风发病风险之间存在有统计学意义的关联性（OR=1．724，95％可信区间：1．345～2．211，P〈0．01），AA纯合子基因型可使白癜风的发病风险明显增加（OR=2．902，95％可信区间：1．624～5．188，P〈0．01）。其余位点基因型及等位基因频率二组间差异无统计学意义。结论Nrf2基因启动子区的-650C／A多态性位点与白癜风发病有一定的关联性，该位点处A等位基因可能是影响白癜风发病的一个危险因素。

Fam114A1蛋白对黑素细胞生物学功能影响的初步研究

目的初步探讨Fam114A1对黑素细胞生物学功能的影响。方法以黑素瘤细胞A375为工具细胞株,通过慢病毒转染的方式构建稳定过表达和抑制Fam114A1蛋白的细胞株,即过表达组和表达抑制组,以转染空载慢病毒的A375细胞作为对照组。实时荧光定量PCR检测Fam114A1对黑素合成相关基因酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1)、前黑素小体蛋白(PMEL)、小眼畸形相关转录因子(MITF)和多巴色素异构酶(DCT)mRNA表达的影响,Western印迹法检测TYR、MITF蛋白的表达,MTT法、Transwell迁移和黏附实验分别检测Fam114A1对A375细胞增殖活性、迁移细胞数及黏附能力的影响。统计分析采用单因素方差分析和Dunnett-t检验。结果荧光显微镜观察慢病毒转染效率均在90%左右。与对照组A375细胞Fam114A1相对表达水平(0.850±0.120)相比,过表达组显著升高(1.507±0.170,t=5.888,P=0.001),而表达抑制组显著降低(0.397±0.120,t=4.065,P=0.007),成功构建稳定过表达和抑制Fam114A1的A375细胞株。实时荧光定量PCR及Western印迹结果显示,表达抑制组TYR和MITF mRNA及蛋白表达均显著低于对照组(均P<0.01),而过表达组TYR和MITF mRNA及蛋白表达与对照组差异无统计学意义(均P>0.05)。与对照组相比,表达抑制组细胞增殖活性和黏附能力显著增强(P=0.009、0.001),细胞迁移能力显著减弱(P=0.005),而过表达组仅细胞迁移能力显著增强(P=0.021)。结论Fam114A1可影响A375的增殖活性、迁移和黏附能力,且影响黑素合成相关蛋白TYR和MITF的表达,可能是一种参与调控黑素细胞生物学活性的功能蛋白。