抑制细菌碳酸酐酶作为应对细菌耐药性的新策略

细菌对抗生素的多重耐药和交叉耐药亟需联合其他有效的靶向替代策略进行控制。碳酸酐酶(carbonic anhydrases,CAs)是催化CO_(2)水合生成HCO_(3)-和H+的可逆反应的一组金属酶超家族,其活性影响细菌的增殖、生物合成及其在宿主体内的持续感染。靶向抑制CAs活性可降低细菌的生存和适应性,并且不会产生与传统抗生素相同的耐药性。细菌CAs有望成为开发尚无临床耐药性的新型抗菌药物靶标。本文对细菌CAs的分类和结构、生理功能以及细菌现有的CA抑制剂(CA inhibitors,CAIs)的研究进展进行了综述,可为新型抗菌药物研发、解决临床耐药问题提供参考。

生物科学专业人体解剖生理学课程思政的实践与思考

课程思政建设是提高大学生思想政治水平的重要方法,是切实落实习近平总书记关于高等教育改革讲话精神的重要举措。人体解剖生理学是研究人体基本结构和功能的基础课程,是生物科学专业学生的核心必修课。该文通过生物科学专业人体解剖生理学课程思政的改革与探索,介绍课程思政建设的方法和经验,践行立德树人-知识传授-能力培养-价值引领的课程思政育人理念,为培养高素质生物科学专业技术人才奠定良好基础。

混合教学模式下基于雨课堂的药理学课程改革

该文充分利用雨课堂平台、网络微课慕课资源、小组合作学习,改进传统教学中学生参与度低、滥竽充数,学习效果反馈弱等问题,使学生从课前预习、投票调查到课中互动随堂测试以及课后补充复习,每一个阶段都有相应的辅助措施,教师在整体教学过程中始终掌握学生的学情动态;在授课中采用问题启发式教学,教学层层推进,激发学生对各种疾病的起因、用药治疗方法、药物的特性等方面的兴趣并加入案例,对药理学研究进展前沿、药物的发现事件的讲解既能调动学生的学习兴趣,也使其对整个的药理学发展有非常清晰的了解;在讲解中对思政内容合理设计引入,从而使学生的学习态度由被动转为主动,引导学生不仅掌握药学的专业知识,还要建立科学严谨的思维习惯、健康的生活习惯,并树立终身学习的学习态度。同时,在药理和生理实验中采用微课视频辅助实验教学的方法,大大提高实验成功率和学生获得感;课后以补充资料、慕课网内容补充等教学方法,使教学适应更多层次的学生需求。

重组克柔念珠菌14-3-3蛋白诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的分子机制

旨在研究重组克柔念珠菌(Candida krusei)14-3-3蛋白(rCK14-3-3)对奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎性反应的分子机制,为系统研究克柔念珠菌损伤奶牛乳腺上皮细胞的机制提供理论依据。采用原核表达的方法构建克柔念珠菌BMH 1基因重组质粒并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,经诱导表达纯化后进行Western blot鉴定;CCK-8法筛选rCK14-3-3蛋白对MAC-T的最适作用浓度和时间;Western blot检测rCK14-3-3蛋白对MAC-T的Toll样受体、MAPK信号通路、NF-κB信号通路主要蛋白相对表达量的影响;ELISA检测rCK14-3-3蛋白对MAC-T中相关炎性因子IL-1β、IFN-γ、IL-18、TNF-α、IL-6、IL-12相对表达量的影响。结果显示:成功构建了pET-21a-BMH1重组表达载体,经诱导表达纯化后获得有生物学活性的rCK14-3-3蛋白,纯度达90%以上,浓度为0.2 mg·mL^(-1)。与空白对照组相比,采用50μg·mL^(-1)的rCK14-3-3作用MAC-T,TLR2、TLR4、MyD88在1、3 h时表达量极显著升高(P<0.01),6 h时,TLR4表达量显著降低(P<0.05),TLR2、MyD88表达量无显著变化;p-JNK在1 h时的表达量无显著变化,3、6 h时极显著降低(P<0.01);p-ERK在1、3、6 h时的表达量显著或极显著升高(P<0.05,P<0.01);p-p38在1 h时的表达水平极显著降低(P<0.01),3、6 h时极显著升高(P<0.01);p-IκB-α、p-p65在1、3、6 h时的表达量均极显著升高(P<0.01)。IL-1β、IFN-γ、IL-18、TNF-α在作用1、3、6 h后均呈现出显著或极显著的上调趋势(P<0.05,P<0.01);IL-6在作用1、3 h后极显著上升(P<0.01),6 h后显著降低(P<0.05);IL-12在作用1 h后极显著上升(P<0.01),3、6 h后极显著降低(P<0.01)。本研究成功表达具有生物学活性的rCK14-3-3蛋白,该蛋白可通过TLR2/4-MAPK/NF-κB信号通路诱导MAC-T发生炎性反应,rCK14-3-3蛋白可作为引起MAC-T炎症的重要因子之一。

重金属介导的抗生素抗性基因接合转移研究进展

抗生素抗性基因(ARGs)在人类-动物-环境之间的跨界面传播和聚集已成为公共卫生和环境生态系统的主要问题,ARGs和携带这些基因的可移动遗传元件(MGEs)已被视为新出现的环境污染物。环境重金属介导的ARGs水平转移增加了ARGs在本土微生物中富集的潜在风险。目前,研究重金属及其它新污染物诱导的ARGs水平转移已成为环境及其相关学科领域的研究热点。该文综述了重金属作为共选择剂对环境中ARGs接合转移的影响,重点从分子生物学角度分析了重金属引起ARGs接合转移增加的相关机制。重金属介导的ARGs接合转移是ARGs丰度增加的主要原因,重金属引起的接合频率的变化主要与其浓度相关,与毒物兴奋效应一致。相关调控机制包括调节活性氧(ROS)的产生、启动SOS反应、增强细胞膜通透性以及影响接合转移相关基因的表达和ATP合成。阐明在污染环境中(复合)重金属以及重金属与抗生素协同,在不同环境条件下增强ARGs水平转移的机制是今后研究的关键方向,可为重金属介导的ARGs环境行为研究提供一定的参考。

反相高效液相色谱法测定克林霉素含量

本实验建立了一种快速检测克林霉素HPL C,用反相 C18柱分离克林霉素 ,用乙酰苯胺做内标 ,在 UV2 0 5mm条件下 ,用乙腈 -磷酸盐缓冲液 -四氢呋喃 ( V∶ V∶ V=2 9∶ 70∶ 1 )作流动相测定克林霉素含量。结果表明 :标准曲线范围在 0 .0 5～ 40 mg/m L 回归方程为 Y=0 .6547X-0 .0 0 3 4( R2 =0 .9992 )。

苦豆子碱对产β-内酰胺酶动物源性菌株的药敏分析

目的:了解40株动物源性大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌对β-内酰胺类抗菌药物的敏感性,在此基础上探讨苦豆子总碱对产β-内酰胺酶动物源性阴性菌株的抗菌活性,目的筛选出能够逆转耐药菌株的中药。方法:以肉汤稀释法和纸片扩散法筛选产超光谱β-内酰胺酶耐药菌株。以琼脂稀释培养法、试管稀释法、活菌计数法检测苦豆子总碱对大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌的体外最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果:40株大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌共有16株为产超光谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药菌株,苦豆子总碱在体外对抗生素敏感株、产β-内酰胺酶(ESBLs)耐药菌株和产超光谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药菌株均有较好的抑菌作用。

水泡性口炎病毒抗原决定簇单克隆抗体研究

用RT-PCR的方法扩增水泡性口炎病毒G蛋白抗原决定簇部分基因片段,构建克隆质粒pMD18-T-G_(660)和表达质粒pET-28a-G_(660),转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后得到高效表达,表达蛋白质的分子量为30 Ku,占总蛋白的20.745%。切胶回收蛋白测定蛋白含量,作为免疫BALB/c小鼠的免疫原,免疫BALB/c小鼠4次,按单克隆抗体制备技术,获得3株稳定分泌抗表达的G蛋白的单克隆抗体L细胞株,抗体类型鉴定属于IgG亚类。

宁夏牛源克雷伯菌和大肠埃希菌分离株产超广谱β-内酰胺酶基因型检测

为了解宁夏牛源产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia)和大肠埃希菌(Esche-richia coli)的耐药性和基因型分布,采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)2008年推荐的双纸片确证试验,对宁夏地区100株克雷伯菌和大肠埃希菌进行产ESBLs确定,并采用PCR扩增法和克隆测序法对产ESBLs菌株进行基因分型.结果显示,宁夏地区有42株产ESBLs菌株,阳性率为42%;其中31株菌扩增呈阳性,产TEM型菌17株,产SHV型菌14株,产CTX型菌15株;同时产3种基因型菌1株,同时产2种基因型菌13株,产单一基因型菌17株,分别占产ESBLs菌株的2.38%,30.95%,40.48%;多表现为多重耐药.

水泡性口炎病毒保护性抗原基因核酸疫苗质粒的构建及其免疫原性

目的构建水泡性口炎病毒(VSV)保护性抗原基因的重组核酸疫苗质粒,并检测其免疫原性。方法利用RT-PCR从VSV中扩增G蛋白基因,构建重组表达质粒pIRES-G1500,转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光、PCR、SDS-PAGE、ELISA和Westernblot检测质粒的表达,用核酸疫苗质粒免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的细胞免疫和体液免疫水平。结果构建的重组核酸疫苗质粒在BHK-21细胞中获得正确表达,质粒免疫小鼠后,可刺激脾细胞、T淋巴细胞亚类数量及CTL杀伤活性显著升高,并可产生高滴度的抗VSV特异性抗体。结论该重组核酸疫苗质粒可作为VSV的候选疫苗。

金葡菌多重耐药基因norA的原核表达及其抗体制备

按金葡菌多重耐药转运蛋白N orA的编码序列设计引物,以金葡菌基因组DNA为模板,扩增出基因norA中约1155bp的cDNA片段,将所得片段与pM D 18-T载体连接,转化到感受态大肠埃希菌JM 109中,成功地筛选到阳性克隆,其质粒测序结果与文献报道一致。从阳性克隆中提取质粒,经N d eⅠ和X hoⅠ酶切,回收1155bp的目的片段,定向克隆到pET-28a(+)表达载体中,转化至感受态大肠埃希菌DH 5α中,提取质粒,再次转化到BL 21(DE 3)中,成功筛选到阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出norA部分基因的表达。利用得到的纯化蛋白免疫家兔,并通过间接EL ISA法检测抗体效价,证明得到相应抗体。

鹿源链球菌的分离鉴定与疾病治疗

从具有典型败血症症状的死亡梅花鹿组织中分离到 3株鹿源链球菌 ,革兰氏染色阳性 ,β溶血 ,有荚膜 ,大多呈短链状 ;能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、山梨醇、水杨苷 ;淀粉和精氨酸水解阳性 ;马尿酸钠水解、胆汁溶菌和美蓝还原试验阴性。腹腔接种小鼠全部致死。分离菌株对青霉素、磺胺类药物耐药 ;对氨苄西林、环丙沙星、庆大霉素中度敏感 ;对克林霉素、头孢噻肟钠高度敏感。发病鹿群用 3种来源不同的药物治疗 ,在临床都取得了显著疗效。

水泡性口炎病毒G蛋白抗原决定区片段基因在大肠杆菌中的表达

用RT-PCR的方法扩增水泡性口炎病毒G蛋白抗原决定基部分基因片段,构建克隆质粒pMD18-T-G660和表达质粒pET-28a-G660,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,得到高效表达,表达蛋白质的相对分子质量为30 000,占总蛋白的20.745%。

动物水泡性口炎病毒的抗原性

动物水泡性口炎病毒(VSV)引起动物水泡性疾病。VSV有两个主要抗原群是核酸蛋白和G蛋白抗原。G蛋白因为能产生中和性抗体被认为是在发动抑制病毒感染方面起主要作用。已经证实VSV 的New Jersey 株中产生独立的中和性单克隆抗体的抗原决定蔟分布在G 蛋白的193～289氨基酸之间。

滩羊β-防御素基因的克隆和表达

选取滩羊β-防御素分布较多的气管、食道和口腔等部位的黏膜组织,提取组织总RNA,RT-PCR获得滩羊β-防御素基因全序列。构建逆转录病毒表达载体,实现滩羊β-防御素基因的表达。经测序后得到滩羊β-防御素编码区的核苷酸序列(64个氨基酸)。成功构建了带有滩羊β-防御素基因的逆转录病毒载体pLEGFP-SBD,在蓝光激发光下能观察到绿色荧光蛋白,并用SDS-PAGE方法检测到分子量约为8kD的目的蛋白。该蛋白具有抗细菌和抑制VSV病毒增殖的活性。

雏鸡绿脓杆菌病病原菌的分离和鉴定

通过对某种鸡场雏鸡病原的流行病学调查研究 ,分离培养并鉴定为绿脓杆菌感染。用动物回归试验、药敏试验、药物治疗和卵黄抗体治疗为临床治疗和防治该疾病提供了一个新的思路。

重组奶牛干扰素-α基因的原核表达

从健康奶牛的血液中分离白细胞,用刺激物诱导白细胞产生干扰素,采用RT-PCR扩增干扰素-α基因,构建原核表达载体pQE30-IFNα,用IPTG诱导表达。得到重组的奶牛成熟干扰素-α基因全长498bp,构建的原核表达载体诱导6h后表达量较高,表达产物的分子量约为20kD,从而获得了表达奶牛干扰素-α的基因工程菌株。

水泡性口炎病毒核酸疫苗对BALB/c小鼠免疫原性研究

成功构建了pIRES-G1500基因的重组核酸疫苗质粒,用核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,测定注射质粒的小鼠细胞免疫和体液免疫指标相关参数的变化,评价核酸疫苗在体内表达效果。

狗酱的制作工艺及卫生评价

大家都知道狗肉好吃,却很少人知道狗肉好吃主要是狗酱起决定性作用,对于狗酱的制作还从来未见报道。朝鲜族喜食狗肉,近来,有许多肉狗场相继建成,为市场提供了源源不断地食物来源,但目前市场对狗肉的屠宰和检验不象对其它肉品检验规范,随着市场扩大和不断完善,这项工作将会受到重视。