反义封闭MMP-9基因表达对胶质母细胞瘤细胞系增殖的影响

目的探讨反义封闭胶质瘤细胞MMP-9基因表达对胶质瘤细胞增殖的影响。方法利用基因重组的方法构建正义和反义MMP-9重组体;经脂质体介导,分别将pcDNA3.0空载质粒、正义重组体、反义重组体转染TJ905细胞;通过RT-PCR和Western blot检测转染细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达水平;利用免疫组织化学法分析了转染细胞中MMP-9和Ki-67的表达。结果经限制性酶切鉴定和DNA测序分析,基因重组成功,且正义与反义重组体插入位点间的序列方向正好相反。与TJ905对照组、空载体组和正义对照组相比较,转染反义重组体后的TJ905细胞中MMP-9mRNA和蛋白的表达水平明显下降(P<0.001)。转染空载体和正义重组体后,TJ905细胞内MMP-9mRNA和蛋白的表达水平与未进行转染的TJ905细胞相比差异无统计学差异(P>0.05)。免疫组织化学结果显示反义封闭有效,MMP-9的表达下调,TJ905细胞增殖活性下降。结论转染反义MMP-9重组体可以有效抑制胶质母细胞瘤细胞的MMP-9基因的表达,同时可以抑制肿瘤细胞的增殖。

移动大数据应用助力实现G/T双网分流

通过移动大数据技术,可实现3G客户和业务量在3G与2G网上的分布统计分析,精确衡量3G对2G网络业务量的分流效果,指导网络分流优化、3G终端和业务的市场营销工作高效开展。

基于B/S的医院信息管理系统的设计与实现思路构建

随着信息化时代的到来,信息技术在医院信息管理系统中也获得了良好的应用效果,对于医院管理工作质量以及管理效率的提升也有着重要意义。因此医院管理层还需要积极进行现有管理模式的转变与优化,并要在 B/S 模式管理系统为典型代表基础上,进行医院信息管理系统的设计与实现。这样可以将信息化管理的应用优势充分发挥出来,满足现代医院在发展过程中的管理工作需求,本文主要就基于B/S 模式的医院信息管理系统的设计与实现进行探究分析。

多播OFDM系统中基于调控因子的资源分配

多媒体多播系统中的动态资源分配技术以其有效利用系统资源,及满足具有差异性信道条件的多用户需求而受到业内广泛研究和重视。针对MRA_LCG算法和MRA_GAT算法存在的弊端,提出了MRA_FCF算法,利用灵活可控的速率均衡因子使得高速率多媒体信息向低速率上分流。仿真结果表明,所提MRA_FCF算法获得的吞吐量明显优于MRA_LCG算法的,且同时在保证组内用户公平性方面比MRA_GAT算法具有优势。

靶向表皮生长因子受体的shRNA抑制U251胶质瘤生长的实验研究

目的 探讨靶向表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的RNA干涉（RNAi）技术抑制恶性胶质瘤体外细胞系U25l的EGFR表达后，在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法 在人EGFR开放阅读框的细胞内区酪氨酸激酶结构域选择1个siRNA靶序列、进行短发夹RNA（shRNA）表达载体psiRNA-2400的构建，并以含有随机序列的psiRNA-scr表达质粒为对照进行了脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞系表达。应用RT-PCR检测EGFR表达水平，应用MTT法、流式细胞术和Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转染前后的生物学行为。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导shRNA基因治疗对U251细胞生长抑制作用。对肿瘤组织应用免疫组化的方法进行EGFR、PCNA和GFAP表达比较。结果脂质体介导、靶向EGFR的shRNA可显著抑制U251细胞ECFR表达，Mr兀’法分析显示psiRNA-2400转染组细胞生长抑制率为68％；与对照组和psiRNA-scr转染组比较，细胞周期分析结果表明psiRNA-2400转染组G0～G1期细胞数没有明显变化，进入s期的细胞数较对照组减少了12．7％～13％，而进入G2期细胞则增加了10．5％～11、7％。Matrigel基质生长实验显示对照组和psiRNA-scr转染组细胞呈正常形态贴壁生长，而psiRNA-2400转染组细胞不能贴壁生长，呈团块状簇集生长。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示psiRNA-2400显著抑制皮下肿瘤生长，组织病理学分析显示治疗组EGFR表达下降、PCNA标记指数降低而GFAP表达上调。结论靶向EGFR的RNAi技术可以显著抑制U251细胞的EGFR表达，在体内外对U251细胞生长均产生明显抑制作用。因此，shRNA表达质粒介导的基因治疗可以成为胶质瘤靶向性EGFR治疗的新策略。

生长抑制因子1基因核定位序列绿荧光蛋白融合表达载体的构建及表达

目的构建p33ING1b核定位序列(nuclearlocatingsequence,NLS)绿荧光蛋白融合表达载体,将其转染到人胚肺纤维母细胞系MRC5,建立稳定表达该融合蛋白的细胞模型。方法应用逆转录PCR获得p33ING1b的NLS序列,然后将NLS序列插入绿荧光蛋白融合表达载体pEGFP C1的多克隆位点,构建pEGFP C1NLS绿荧光蛋白融合表达载体,再用此载体转染MRC5细胞系,观察活细胞绿荧光蛋白的亚细胞定位。结果成功构建了pEGFP C1NLS绿荧光蛋白融合表达载体,由该载体表达的绿荧光蛋白NLS肽段融合蛋白产生的绿色荧光信号全部定位于胞核部位,而空载体转染的细胞表达的绿色荧光蛋白,绿色荧光信号定位于细胞浆中。结论在活细胞内,生理情况下P33ING1b完全定位于细胞核,并且在其亚细胞定位的转运过程中,NLS肽段起着决定性作用。

GST-NLS(ING1)融合蛋白表达载体构建及表达纯化的研究

目的构建P33ING1b核定位信号肽(NLS)与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)重组的融合蛋白(GST-NLS)原核表达载体及建立GST-NLS纯化技术。方法先用RT-PCR从ING1基因中扩增编码NLS的cDNA片段,将其插入克隆质粒pbluescript-SK,再以克隆质粒NLS片段为模板,PCR扩增NLScDNA片段,并加入限制性酶切位点和终止子,进而将其插入原核表达质粒pGEX-5X-3,构建GST-NLS原核表达载体pGEX-5X-3-NLS,最后用IPTG诱导其在大肠杆菌(BL21)中表达,用谷胱甘肽-琼脂糖小珠亲和纯化表达的GST-NLS。结果酶切鉴定和测序分析显示,NLScDNA片段被成功插入pbluescript-SK多克隆位点;NLScDNA片段在pGEX-5X-3-NLS中的插入位点、碱基序列及读码框和终止子的次序完全正确,NLScDNA序列位于表达载体的GST序列下游,插入片段全长183bp。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-5-thiogalactoside,IPTG)诱导表达和亲和纯化,从负荷pGEX-5X-3-NLS质粒的BL21菌株中获得了31.57ku的GST-NLS。结论成功建立了重组GST-NLS的原核表达载体、表达菌株及诱导表达和纯化的方法学,为进一步研究p33ING1b入核运载机制提供了重要技术手段。