巨噬细胞M1/M2极化分型的研究进展

巨噬细胞按照其表型和分泌的细胞因子可以分为两种极化类型,即经典活化（Classically activated）的M1型和选择性活化（Alternatively activated）的M2型巨噬细胞。巨噬细胞的极化分型在肿瘤、脂肪等多数组织中广泛存在,并对某些肿瘤的预后有指导意义[1]。多种因素能调节巨噬细胞失衡的极化状态,

右归丸对糖皮质激素诱导小鼠胸腺树突状细胞表型变化的作用

目的探讨糖皮质激素对小鼠胸腺树突状细胞表型的影响以及中药右归丸的保护作用。方法BALB/c小鼠经肌肉注射氢化可的松(10mg/kg)或联合灌胃右归丸(20.81g/kg)处理,肌肉注射或灌胃等量生理盐水处理的小鼠作为对照组,采用流式细胞术检测处理小鼠胸腺树突状细胞(CD11c+CD45+)抗原递呈分子(H-2Kd、I-Ad)的变化;同时采用RT-PCR法检测胸腺细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及淋巴细胞功能相关抗原-1 LFA-1 mRNA的表达。结果与对照组〔CD11c+I-Ad+树突状细胞比例(65.81±7.69)%,CD11c+H-2Kd+细胞比例(31.88±5.01)%〕比较,氢化可的松组小鼠胸腺CD11c+I-Ad+树突状细胞比例〔(46.77±4.32)%〕显著降低(P<0.01),CD11c+H-2Kd+细胞比例〔(64.34±7.69)%〕升高(P<0.01);同时,氢化可的松组胸腺细胞中ICAM-1及LFA-1 mRNA表达〔(30.11±2.51)%,(30.40±3.77)%〕下降,与对照组〔(46.35±3.34)%,(47.28±2.91)%〕比较,差异有统计学意义(P<0.01);氢化可的松+右归丸能显著逆转糖皮质激素诱导的I-Ad+树突状细胞比例〔(54.19±5.08)%〕下降,上调胸腺细胞ICAM-1及LFA-1 mRNA表达〔(33.97±2.04)%,(34.80±2.92)%〕,与氢化可的松组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖皮质激素可抑制小鼠胸腺CD11c+CD45+树突状细胞MHC-Ⅱ类分子I-Ad表达,上调该群细胞MHC-Ⅰ类分子H-2Kd的表达,同时下调相关黏附分子ICAM-1及LFA-1的转录,而补阳方剂右归丸对激素诱导的MHC-Ⅱ分子下调和黏附分子转录水平下降有显著的抑制作用。

三七皂苷R1调节炎性T细胞亚群保护血管内皮的实验研究

目的探讨炎性T细胞亚群在胶原酶诱导的血管内皮损伤早期的变化状态及三七皂苷R1的保护作用机制。方法采用扫描电镜观察ApoE-/-小鼠动脉内皮损伤程度;流式细胞术检测小鼠外周血中CD62Phi、CD62P+CD62E+脱落内皮细胞的比例;胞内外因子染色法检测炎性T细胞亚群分泌TNF-α、IL-17的水平。结果扫描电镜下,内皮损伤模型组小鼠血管内膜受损明显,内皮脱落面积明显增加,实验组经三七皂苷R1处理后血管内皮偶有脱落(P均<0.05);另外,模型组脱落内皮细胞CD62Phi、CD62P+CD62E+比例明显高于正常对照组,同时,T细胞分泌TNF-α、IL-17的能力明显升高,而实验组脱落内皮细胞比例明显低于模型组,T细胞分泌IL-17的比例下降(P均<0.05)。结论 Th17细胞亚群比例升高与血管内皮早期损伤密切相关,三七皂苷R1在保护血管内皮的同时,可选择性地下调Th17细胞亚群比例。

阴虚阳亢小鼠Th1/Th2类细胞因子的漂移现象及中药左归丸的干预研究

目的:观察阴虚阳亢模型小鼠Th1/Th2两类细胞因子的漂移现象及中药左归丸的逆转作用?方法:采用甲状腺素合并番泻叶建立阴虚阳亢小鼠模型,并用中药左归丸对模型的建立进行干预(生理盐水做对照),RT-PCR法分别检测小鼠脾脏单个核细胞Th1类细胞因子(IFN-γ?IL-2)?Th2类细胞因子(IL-4?IL-10)的表达及中药左归丸的逆转作用?结果:正常小鼠可以同时表达IFN-γ?IL-2?IL-4?IL-10,处于Th1/Th2平衡状态;模型小鼠在表现明显的阴虚阳亢体征的同时,其Th1/Th2两类细胞因子mRNA的表达显著降低(P<0.01),但IFNγ/IL-10的比值明显升高(P<0.01),Th1类细胞因子处于相对优势状态,中药左归丸可显著提高IL-10的转录水平,使IFNγ/IL-10比值回落(P<0.05)?结论:中医阴虚阳亢小鼠处于Th1相对优势状态,中药左归丸可重建Th1/Th2的平衡状态?

右归丸对糖皮质激素诱导的胸腺细胞凋亡的保护作用

目的:探讨右归丸对激素诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用及机制。方法:采用Annexin V/PI双染法检测糖皮质激素及右归丸干预后小鼠胸腺细胞凋亡比例变化;同时采用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达状态。结果:激素处理小鼠的胸腺细胞凋亡比例较正常对照小鼠明显上升(P<0.01),右归丸干预后小鼠胸腺细胞凋亡率则明显下降(P<0.01);同时,激素处理小鼠胸腺细胞Bcl-2的表达下调,Bcl-2/Bax mRNA比值随之下降;而右归丸干预后Bcl-2 mRNA转录水平明显高于激素处理小鼠(P<0.01),Bax的表达虽无明显改变,Bcl-2/Bax比值较激素处理小鼠明显增高(P<0.05)。结论:右归丸可明显抑制激素诱导的胸腺细胞凋亡,其机制与逆转激素诱导的Bcl-2/Bax表达失衡密切相关。

脂多糖诱导小鼠内皮损伤早期T细胞亚群的变化

目的:探讨脂多糖(LPS)诱导内皮损伤早期T细胞亚群的变化。方法:采用扫描电镜观察LPS刺激后内膜的形态学变化,流式细胞术检测外周血中内皮细胞表型CD62P+、CD62P+CD62E+改变,采用胞内外因子染色法检测T细胞亚群的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)及白细胞介素10(IL-10)的分泌状态。结果:LPS可导致小鼠血管内皮完整性受损,脱落内皮细胞CD62P+、CD62P+CD62E+比例明显高于对照组(P<0.05);内皮损伤的同时,小鼠CD3+CD4+T细胞中,TNF-α、IFN-γ、IL-17分泌细胞比例显著增加(P<0.05),而IL-10的分泌在LPS刺激1小时、4小时时升高较为明显(P<0.05)。结论:炎性CD4+T细胞亚群与脱落内皮细胞CD62P、CD62E的高表达状态是血管内膜损伤早期的重要特征性标志。

花刺参粘多糖对大鼠血管平滑肌细胞粘附分子表达的影响

目的 观察花刺参粘多糖对肿瘤坏死因子α诱导的大鼠血管平滑肌细胞血管细胞粘附分子1和细胞间粘附分子1表达的影响,以探讨花刺参粘多糖抗动脉粥样硬化的可能机制.方法组织贴块法体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞,采用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应和细胞粘附实验方法,观察花刺参粘多糖对肿瘤坏死因子α诱导的平滑肌细胞血管细胞粘附分子1、细胞间粘附分子1蛋白及mRNA水平表达及单核细胞与平滑肌细胞粘附的影响.结果 肿瘤坏死因子α刺激后平滑肌细胞血管细胞粘附分子1和细胞间粘附分子1表达增强,花刺参粘多糖（1.5～6.0 g/L）可从蛋白和mRNA水平浓度依赖性地抑制其表达,流式细胞分析示血管细胞粘附分子1的荧光强度由176.4±3.5减少到80.7±1.9（P＜0.01）,细胞间粘附分子1的荧光强度由92.2±2.9减少到58.3±2.1（P＜0.01）;逆转录聚合酶链反应结果发现血管细胞粘附分子1的相对光密度值由0.61±0.03减少到0.41±0.04（P＜0.01）,细胞间粘附分子1的相对光密度值由0.41±0.01减少到0.30±0.03（P＜0.05）;粘附实验发现花刺参粘多糖可减少单核细胞与平滑肌细胞粘附,光密度值由0.467±0.062减少到0.256±0.029（P＜0.05）.结论 花刺参粘多糖可抑制肿瘤坏死因子α诱导的平滑肌细胞血管细胞粘附分子1和细胞间粘附分子1的表达,减少单核细胞与平滑肌细胞的粘附和聚集,这可能对减轻血管壁的炎症反应、延缓动脉粥样硬化发生发展起一定作用.

阴虚与阳虚动物模型中Th1/Th2类细胞因子表达的差异性

目的 :探讨阴阳失调模型小鼠 Th1/ Th2两类细胞因子的表达模式。方法 :分别采用甲状腺素灌胃和氢化可的松肌肉注射法建立阴虚、阳虚 BAL B/ c小鼠模型 (生理盐水作对照 ) ;利用 RT- PCR方法检测模型动物脾脏单个核细胞中 Th1类细胞因子 (IFN- γ,IL- 2 )、Th2类细胞因子 (IL- 4 ,IL- 10 )的基因转录状态。结果 :阴阳调和的正常小鼠可以同时表达 IFN- γ、IL- 2、IL- 4、IL- 10 ,处于 Th1/ Th2平衡状态 ;阴阳失调模型小鼠在表现明显的阴虚、阳虚体征的同时 ,其 Th1/ Th2两类细胞因子 m RNA的表达显著降低 (P<0 .0 1) ,Th1/ Th2平衡模式发生漂移 ,阴虚小鼠 IFN- γ表达与阳虚模型对比有显著性差异 (P<0 .0 1)。结论 :阴阳失调模型小鼠的 Th1/ Th2类细胞因子表达呈抑制状态 ,阴虚与阳虚的差别在于 Th1类细胞因子 IFN- γ表达的抑制程度不同 ,其中阴虚模型小鼠 IFN-

绝经妇女外周血单个核细胞骨代谢调控因子表达变化

目的：探讨绝经妇女雌激素水平下降所致免疫细胞骨代谢调控因子变化。方法：纳入绝经妇女、未绝经妇女各30例,电化学发光法检测血清雌二醇（E2）水平;RT-PCR法检测外周血单个核细胞（PBMC）中雌激素受体（ERα、ERβ）、白细胞IL-6、TNFα-。核因子κB受体活化因子配基（RANKL）、核因子κB受体活化因子（RANK）mRNA表达;ELISA检测血清IL-6、TNFα-蛋白含量;双能X线骨密度仪检测腰椎2~4（L2-4）前后位骨密度（BMD）。结果：与未绝经组比较,绝经妇女E2水平明显下降,腰椎BMD显著降低（P〈0.05）,外周血单个核细胞ERα、ERβmRNA表达明显降低（P〈0.05）,IL-6、TNFα-、RANKL、RANKmRNA表达明显升高（P〈0.05）,IL-6及TNFα-血清蛋白含量明显升高（P〈0.05）。相关性分析显示PBMC中ERα、ERβmRNA表达与血清E2水平、腰椎BMD呈显著正相关性（P〈0.05）,PBMC中IL-6、TNFα-、RANKL、RANKmRNA表达与血清E2水平、腰椎BMD呈显著负相关性（P〈0.05）。结论：绝经后妇女雌激素水平下降伴随着外周血免疫细胞雌激素受体转录水平下降,同时,炎性骨吸收调控因子和溶骨性细胞因子表达升高,这种变化可能在绝经后骨丢失中发挥重要作用。

桂皮醛对激素诱导的破骨细胞分化过程的保护作用及分子机制

目的研究桂皮醛对激素诱导的体外破骨细胞增殖分化及骨吸收功能增强的保护作用及分子机制。方法RANKL联合M-CSF体外诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞,分为对照组、地塞米松处理组和不同浓度(11.6、23.2、46.4μg·L-1)桂皮醛(cinnamic alde byde,CA)干预组;TRAP染色试剂盒鉴定成熟破骨细胞;MTT法观察地塞米松和桂皮醛在不同时间点对破骨细胞增殖的抑制作用;ELISA法检测细胞培养液上清中TRACP5b的表达水平;RT-PCR分析破骨细胞相关转录因子(RANK、NFATc1)mRNA的表达状态。结果地塞米松处理后,破骨细胞的增殖分化及骨吸收功能明显增强(P<0.05);而经不同浓度桂皮醛干预后,与地塞米松组相比,细胞增殖活性、上清液中TRACP-5b的含量以及RANK、NFATc1mRNA的表达水平随药物浓度的增加呈剂量依赖性降低(P<0.05)。结论桂皮醛可有效抑制激素诱导的破骨细胞的增殖及骨吸收功能,其作用机制可能是通过下调RANK以及下游NFATc1基因的表达。

生化汤逆转甲氨蝶呤诱导的干扰素-γ免疫抑制作用

目的观察生化汤对甲氨蝶呤(MTX)诱导的干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)免疫抑制的逆转作用。方法 Balb/C孕鼠40只,随机分为对照组、生化汤组、MTX组、联合组,自妊娠第10天起分别给予生理盐水、生化汤、MTX、MTX联合生化汤处理,连续用药7天,末次给药后1h处死小鼠。计数各组孕鼠活胎数与死胎数,借以评价母胎排斥状态;采用流式细胞术胞内外因子双染色法检测孕鼠脾脏淋巴细胞中的IFN-γ+及CD3+CD4+IFN-γ+细胞比例,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测脾脏单个核细胞中IFN-γ信使核糖核酸(mRNA)表达水平。结果 与对照组比较,生化汤组死胎数略有增加(P>0.05),脾脏中IFN-γ+及CD3+CD4+IFN-γ+细胞阳性率分别升高了28.81%和35.61%(P<0.05),IFN-γmRNA表达升高(P<0.05);MTX处理后,死胎数明显增加,脾脏中IFN-γ+、CD3+CD4+IFN-γ+细胞比例较对照组分别降低了24.23%和26.77%,IFN-γmRNA表达明显降低(P<0.05)。MTX联合生化汤处理后,死胎数进一步增加,IFN-γ+、CD3+CD4+IFN-γ+细胞比例明显升高,较MTX组分别增加了64.96%、71.38%,IFN-γmRNA表达明显上调(P<0.05)。结论 生化汤通过促进IFN-γ+Th1亚群分化,上调IFN-γ表达,逆转MTX对IFN-γ的抑制作用,进而促进母胎免疫排斥。

宫清颗粒对人早孕绒毛、蜕膜组织细胞凋亡及信号转导的影响

目的:探讨宫清颗粒对人早孕绒毛、蜕膜组织细胞凋亡及信号转导的影响,为临床防治药物流产后异常子宫出血(简称药流后出血)提供生物学依据。方法:将120例受试者随机分为宫清药流组、茜芷药流组、单纯药流组及负压吸宫组,各30例,收集各组绒毛及蜕膜组织,观察细胞超微结构变化;TUNEL法检测细胞凋亡率(AR)、荧光分光光度计检测细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)、免疫组化法检测蛋白激酶C(PKC)蛋白表达。结果:宫清药流组绒毛、蜕膜组织细胞超微结构出现典型凋亡改变,AR、[Ca2+]i升高,PKC蛋白表达降低,与其它3组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:宫清颗粒能影响细胞内Ca2+及PKC介导的细胞信号转导,诱导人早孕绒毛、蜕膜组织细胞凋亡,促进绒毛与蜕膜组织完全排出,进而防治药物流产后出血。

复方花刺参粘多糖对大鼠心肌缺血的保护作用

目的观察复方花刺参粘多糖对大鼠急性缺血心肌的保护作用。方法将大鼠随机分为正常对照组、复方花刺参粘多糖组。灌胃3 d后均静脉注射垂体后叶素造成心肌缺血损伤模型,观察两组大鼠心电图ST段偏移及心率失常的发生情况。结果复方花刺参粘多糖能明显缓解垂体后叶素所引起的心电图ST段变化(P<0.05),并能使大鼠心律失常的发生率显著下降(P<0.05)。结论复方花刺参粘多糖对垂体后叶素所致急性缺血心肌具有保护作用。

川芎嗪对PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和骨桥蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨川芎嗪对血小板源生长因子(PDGF BB)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及骨桥蛋白mRNA表达的影响。方法:大鼠胸主动脉平滑肌细胞体外培养,PDGF BB刺激VSMC ,采用MTT法和流式细胞仪测定川芎嗪对VSMC增殖的影响,逆转录聚合酶联反应(RT PCR)测定VSMC骨桥蛋白mRNA的表达水平。结果:川芎嗪可显著地抑制VSMC增殖(P <0 .0 1) ,使细胞生长停滞于G0 /G1期;PDGF BB诱导骨桥蛋白mRNA呈高表达,川芎嗪下调了这种表达。结论:川芎嗪能抑制体外的VSMC增殖,提示川芎嗪可能作为防治血管成形术后再狭窄的一种药物。

宫清方诱导Th1/Th2亚群漂移减轻药物流产后子宫出血动物研究

目的:探讨药物流产中Th1/Th2亚群漂移与子宫出血量的相关性以及宫清方减轻药物流产后子宫出血的作用机制。方法:将孕鼠20只随机分为米非司酮大(1.5mg/kg·d)、小(0.88mg/kg·d)剂量组各10只,改良碱性正铁血红素法检测子宫出血量,流式细胞术双染色法检测母胎界面Th1、Th2亚群比例;孕鼠40只随机分为米非司酮组(1.5mg/kgod)、宫清方大、中、小剂量组各10只,检测子宫出血量及母胎界面Th1、Th2亚群比例;逆转录-聚合酶链式反应检测母胎界面干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)mRNA转录水平。结果:米非司酮大剂量组小鼠子宫出血量<米非司酮小剂量组(P<0.05),药物流产小鼠子宫出血量与Th1亚群比例、Th1/Th2比值呈负相关(P<0.05),与Th2亚群比例呈正相关(P<0.05)。宫清方能明显减少米非司酮药物流产小鼠子宫出血量(P<0.05),升高IFN-γmRNA表达及Th1亚群比例(P<0.05),降低IL-4mRNA表达及Th2亚群比例(P<0.05),升高Th1/Th2比值(P<0.05)。结论:米非司酮药物流产中Th1/Th2亚群漂移与子宫出血量密切相关,宫清方通过优势诱导药物流产小鼠母胎界面Th1/Th2平衡向Th1漂移,减轻子宫出血。

左归丸对小鼠CD4^+CD25^+调节性T细胞的影响

目的:观察左归丸制剂对小鼠脾细胞中Treg亚群及其相关细胞因子表达的影响。方法:BALB/c小鼠给予不同剂量左归丸处理后,利用流式细胞术检测小鼠脾细胞中Treg亚群(CD4+/CD25+)的变化;采用RT-PCR法检测小鼠脾细胞中IL-10、TGF-β、IFN-γ及Foxp3的表达水平;采用ELISA法检测小鼠外周血中IFN-γ的分泌水平。结果:小剂量左归丸对小鼠脾脏Treg亚群及相关细胞因子的表达没有显著影响;中剂量左归丸可明显上调小鼠脾脏Treg亚群比例(P<0.05),提高Treg特异性胞内信号Foxp3及相关细胞因子IL-10、TGF-β的转录水平,同时抑制IFN-γ的表达;大剂量左归丸可显著降低Treg细胞亚群比例,对Foxp3I、L-10、TGF-β、IFN-γ的表达均有明显的抑制作用(P<0.05)。随着中、大剂量左归丸处理小鼠IFN-γ的转录下调,血清中IFN-γ的水平也明显下降(P<0.05)。结论:左归丸可上调Treg细胞及相关细胞因子的表达水平,抑制IFN-γ的表达,但这种免疫效应有剂量限制性,大剂量应用时显示抑制作用,提示左归丸对Treg亚群有剂量依赖性的双向调节作用。

花刺参黏多糖对胎牛血清诱导的血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察花刺参黏多糖对10％胎牛血清（FBS）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响，以探讨花刺参黏多糖抗动脉粥样硬化、预防经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的可能机制。方法组织块贴片法体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞，细胞增殖采用MTT、流式细胞周期分析；流式细胞术、TUNEL实验方法观察细胞凋亡。结果10％FBS刺激可促进血管平滑肌细胞增殖、抑制其凋亡，而花刺参黏多糖（5～20g·L^-1）有浓度依赖性地逆转作用，MTT吸光度（A值）由0．484±0．034减少到0．369±0．019（P〈0．01），流式细胞分析示G0／G1期细胞比例由54．7±2．7％增加到75．8±1．8％（P〈0．01）；流式细胞分析示细胞凋亡率由2．84±1．44％增加到13．51±2．75％（P〈0．01）；TUNEL结果显示凋亡细胞比例由2．90±1．05％增加为8．60±1．13％（P〈0．01）。结论花刺参黏多糖可抑制10％FBS诱导的血管平滑肌细胞增殖，促进其细胞凋亡，这可能对延缓动脉粥样硬化发生发展以及预防经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄发生起到一定作用。

花刺参粘多糖对血小板源生长因子BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察花刺参粘多糖对血小板源生长因子BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响,以探讨花刺参粘多糖抗动脉粥样硬化、预防经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的可能机制。方法组织块贴片法体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞,细胞增殖采用四甲基偶氮唑盐、流式细胞细胞周期分析;流式细胞术、TUNEL法观察细胞凋亡。结果血小板源生长因子BB刺激后可促进血管平滑肌细胞增殖,抑制其凋亡;花刺参粘多糖则呈浓度依赖性地逆转此作用,光密度值由0.406±0.003减少到0.187±0.017(P<0.01),G0/G1期细胞比例由77.4%±5.7%增加到88.1%±5.3%(P<0.05),细胞凋亡率由8.6%±2.3%增加到22.6%±2.3%(P<0.05),凋亡细胞比例由2.7%±0.4%增加到10.1%±0.9%(P<0.01)。结论花刺参粘多糖可抑制血小板源生长因子BB诱导的血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡,这可能对延缓动脉粥样硬化的发生发展、防止经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的发生起到一定作用。

加味保安方对C57小鼠移植肿瘤生长及肺转移灶的影响

目的 :观察加味保安方对C5 7小鼠移植肿瘤生长及肺转移灶的影响。方法 :建立Lewis肺癌带瘤小鼠模型 ,检测移植瘤生长状况及肺重量、肺部转移灶数量。结果 :加味保安方组与模型组比较有明显的抑制肿瘤生长作用 (P <0 .0 1) ;肺部转移灶数目少于模型组 ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ,肺重量轻于模型组 ,有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :加味保安方可抑制C5 7小鼠移植肿瘤生长 ,减少肺转移灶数量 ,有明显的抑制肿瘤生长及转移作用。

宫清颗粒防治药物流产后出血现代文献依据

目的:通过分析现代中医文献,探讨药物流产后出血的病机特点及辨证论治规律,为宫清颗粒防治本病提供文献学依据。方法:收集现代中医药有关防治药物流产后出血的文献报道,采用频数分析方法研究,分析其病机特点及治疗规律。结果:文献研究显示",瘀、虚、热"是本病的主要病机",补虚、化瘀、清热"是防治本病的基本思路。结论:宫清颗粒的组方立法原则符合本研究统计结果。