gD糖蛋白基因表达质粒pcDNA3Kan-gD的构建及其在Hela细胞中的表达检测

目的利用半定量RT-PCR技术及免疫荧光技术分析构建的单纯疱疹病毒gD糖蛋白基因真核表达质粒在Hela细胞中的瞬时表达情况。方法构建并提纯重组的真核表达质粒pcDNA3Kan-gD,转染培养的Hela细胞,采用半定量RT-PCR技术及免疫荧光技术检测外来转染的gD基因在Hela细胞中的瞬时表达。结果转染了pcDNA3Kan-gD重组质粒的Hela细胞RNA中能够扩增出gD基因的特异性条带,免疫荧光技术分析结果显示,转染了pcDNA3Kan-gD重组质粒的Hela细胞中能检测到特异性绿色荧光。结论真核表达质粒pcDNA3Kan-gD能够在Hela细胞中瞬时表达,有可能成为抗单纯疱疹病毒DNA疫苗候选物之一。

板蓝根多糖对单纯疱疹病毒-2型DNA疫苗免疫效果的影响

目的探讨板蓝根多糖(isatis root polysaccharide,IRPS)对单纯疱疹病毒-2型(herpes simplex virus type-2,HSV-2)DNA疫苗(pgD)免疫效果的影响。方法水煎醇沉法提取IRPS,苯酚-硫酸法测定含量,计算产率。将BALB/c小鼠随机分为5组:PBS对照组、pgD疫苗组(100μg)、pgD+IRPS组(100μg+150μg)、pKan+IRPS组(100μg+150μg)、IRPS组(150μg),每组8只,均经小鼠后腿肌肉注射,100μL/只,初次免疫后2周,加强免疫1次。末次免疫2周后,经眼球采血,分离血清,ELISA法检测HSV-2特异性IgG水平及IgG1、IgG2a亚型抗体滴度;无菌制备小鼠脾细胞悬液,MTS法检测脾脏T细胞增殖能力,ELISA法检测IFNγ和IL-10的含量。结果IRPS含量约8.745 mg,产率为87.45%。pgD+IRPS组小鼠血清中IgG水平显著高于其他4组(P<0.001),IgG1和IgG2a的滴度、IgG2a/IgG1比值、脾脏T细胞增殖能力、IFNγ和IL-10的含量均显著高于pgD疫苗组(P<0.05)。结论IRPS作为疫苗佐剂可显著增强HSV-2 DNA疫苗的免疫水平,具有良好的应用前景。

板蓝根多糖作为疫苗佐剂的初步研究进展

板蓝根是清热解毒的常用中药,临床常用于治疗病毒及细菌感染,其多糖是重要的活性成分之一。研究表明,板蓝根多糖具有显著的佐剂作用,并且不良反应少,有望成为未来疫苗佐剂的较佳选择。本文介绍了板蓝根多糖的提取和纯化方法、结构与组成的研究进展,并对板蓝根多糖的佐剂机制和作为疫苗佐剂的动物实验研究方面进行综述,为未来新型多糖佐剂的应用提供理论基础。