酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5相互作用的蛋白

目的应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白。方法构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生长的克隆,利用一对一酵母回复性杂交实验进行验证,然后测定阳性克隆插入片段序列,通过Blast分析确定可能与NS5相互作用的蛋白。结果构建的诱饵载体pSos-NS5对酵母宿主无毒性,且无自激活活性。经过筛选得到3个阳性克隆(10,11,4′6号克隆),经测序和Blast分析,初步确定4′6号克隆编码的TC21蛋白可能与NS5发生相互作用。结论经酵母双杂交技术筛选到一种可能与NS5蛋白具有相互作用的人类蛋白,为深入探讨乙型脑炎病毒NS5蛋白的生物学功能奠定了基础。

46例早期胃癌X线诊断的可能性

本文46例早期胃癌中有三多,即凹陷型者多(63％),位于胃角和胃窦者多(67.4％)及癌灶长径>1cm者多(68.6％)。这三点为X线显示及诊断提供了有利的条件。术前诊断正确或疑为早癌者有41例(89.1％),漏误诊5例(10.9％)。漏误诊主要为贲门区、大弯侧、幽门前区及Ⅱ_b型。

虫媒黄病毒NS5蛋白的生物学功能研究进展

虫媒黄病毒包括一大类对人类致病的病原体,基因组为单股正链RNA,依次编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。其中,非结构蛋白NS5具有RNA依赖性RNA聚合酶、甲基转移酶等多种酶活性,在病毒基因组的复制过程中发挥关键作用。最近的研究发现,NS5能够通过多种机制调控宿主的抗病毒反应。NS5的多功能特点使其成为潜在的抗病毒药物靶点并受到广泛关注。本文综述了虫媒黄病毒NS5蛋白生物学功能的主要进展。

国产1804型大功率拖拉机使用体会及问题建议

2008年1月．新疆生产建设兵团农2师30团农机户个人购买国产1804型大功率拖拉机7台．在近3年的使用过程中，拖拉机出现了一些问题，笔者将使用体会及问题建议归纳总结如下。

乙型脑炎病毒NS5蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的表达纯化乙型脑炎病毒非结构蛋白NS5,并制备其多克隆抗体。方法通过PCR法扩增编码NS5蛋白的全长基因,将其克隆到原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,并通过Ni柱亲和层析纯化重组蛋白。用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c鼠制备多克隆抗体。采用间接免疫荧光法检测抗体效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果与结论成功获得了可溶性表达的NS5蛋白,制备了多克隆抗体,效价为1∶1000,能够特异性识别乙型脑炎病毒感染细胞中表达的NS5蛋白,为进一步研究NS5蛋白的生物学功能奠定了基础。