血管生成素1对大鼠脉络膜新生血管的治疗作用及其初步机制

目的 探究血管生成素1(Ang1)对大鼠脉络膜新生血管(CNV)的治疗作用及其可能机制。方法 选取30只6~8周龄挪威(BN)大鼠,雌雄不限,随机分为正常组、模型组、Ang1治疗组,每组10只。正常组不做处理;其余两组采用多波长氪激光对BN大鼠双眼进行CNV造模,于造模后14 d进行眼底荧光素血管造影检查。造模成功后1 d,Ang1治疗组玻璃体腔注射200μg/L的Ang1 20μl,其余两组注射等量生理盐水;注药后10 d进行眼底荧光素血管造影检查,使用FITC标记葡聚糖(FITC-dextran)心脏灌注法进行脉络膜铺片测量CNV面积,采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠视网膜-脉络膜结构变化;取大鼠视网膜-脉络膜-巩膜复合体,采用Western blotting检测Ang1、Rap1、小分子G蛋白Rap1(GAPRap1)、血管内皮-钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达情况。取对数生长期大鼠脉络膜血管内皮细胞(RCVECs),用血管内皮生长因子(VEGF)刺激培养24 h后,分为阴性对照组(siRNA-NC组)、GAPRap1小干扰RNA组(GAPRap1-siRNA组)、GAPRap1-siRNA+Ang1组。GAPRap1-siRNA组及GAPRap1-siRNA+Ang1组转染GAPRap1-siRNA试剂,siRNA-NC组细胞转染siRNA-NC试剂,转染6 h后,在GAPRap1-siRNA+Ang1组中加入200μg/L Ang1,继续培养24 h后提取细胞蛋白,采用Western blotting检测细胞中GAPRap1、Rap1、VE-cadherin的表达情况,免疫荧光染色检测转染后细胞中VE-cadherin的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠新生血管渗漏面积、脉络膜损伤程度明显升高,脉络膜中GAPRap1、VE-cadherin蛋白表达明显降低(P<0.05),Rap1蛋白表达无明显变化(P>0.05);与模型组比较,Ang1治疗组大鼠新生血管渗漏面积、脉络膜损伤程度明显降低,脉络膜与细胞中GAPRap1、VE-cadherin蛋白表达明显升高(均为P<0.01),Rap1蛋白表达无明显变化(P>0.05)。脉络膜组织中,Ang1蛋白在Ang1治疗组的表达明显高于其余两组(P<0.01)。细胞实验中,GAPRap1-siRNA组GAPRap1与VE-cadherin的表达水平较GAPRap1-siRNA+Ang1组及siRNA NC组明显降低(P<0.01),而Rap1表达无明显变化(P>0.05)。免疫荧光染色检测结果显示,GAPRap1-siRNA组VE-cadherin表达水平较GAPRap1-siRNA+Ang1组及siRNA NC组明显降低(P<0.001)。结论 Ang1可减少大鼠CNV的渗漏,对CNV生长具有一定抑制作用,其机制可能与通过GAPRap1-VEcadherin途径加强细胞黏附作用有关。

5α-羟基木香酸抑制VEGF164诱导大鼠脉络膜血管内皮细胞增殖、迁移及血管形成

目的探讨5α-羟基木香酸(5α-hydroxycostic acid,5α-HA)体外抑制脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型的作用及其机制。方法体外培养大鼠脉络膜血管内皮细胞(choroidal vascular endothelial cells,CECs)后分为(n=3):空白对照组、模型组[30 ng/mL抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)164]、干预组(30 ng/mL VEGF164+100μmol/L 5α-HA)、抑制剂组[30 ng/mL VEGF164+5μmol/L Semaxanib(VEGFR2特异性阻断剂)]。CCK-8实验检测各组CECs的增殖情况,细胞划痕实验、Transwell实验以及Matrigel基质胶管腔形成实验分别观察各组CECs的增殖、迁移以及管腔形成。RT-qPCR检测各组细胞渗漏相关因子如血管生成素2(Angiopoietin 2,Ang 2)、血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin)、紧密连接蛋白(ZO-1)的mRNA水平的表达;Western blot检测各组细胞信号通路及渗漏相关蛋白P-VEGFR2、P-Tie2、P-FAK、VE-Cadherin、ZO-1、Occudin的表达;免疫荧光检测各组细胞中Ang 2蛋白的表达,统计分析上述各组间的指标差异。结果CCK-8实验表明:与模型组比较,干预组5α-HA作用于CECs后能抑制CECs的异常增殖(P<0.01)。细胞划痕实验、Transwell实验以及Matrigel基质胶管腔形成实验表明:干预组能扭转模型组VEGF164引起的CECs迁移及管腔形成(P<0.01)。RT-qPCR结果显示:干预组能抑制模型组中Ang 2 mRNA的上调以及VE-Cadherin和ZO-1的下调(P<0.01)。Western blot结果显示:干预组能减少模型组中P-VEGFR2、P-Tie2及P-FAK蛋白的表达(P<0.01),同时上调VE-Cadherin、ZO-1以及Occudin蛋白的表达(P<0.05)。细胞免疫荧光实验结果显示,与模型组比较,干预组能减少模型组中Ang 2蛋白的表达(P<0.01)。结论5α-HA可能通过抑制VEGFR2、Tie2双途径磷酸化以及抑制VEGFR2/FAK信号通路抑制VEGF164诱导的CECs增殖、迁移以及管腔形成。

青少年近视影响因素及防控方法进展

近视是一个全球性疾病,青少年近视更是处于一个居高不下的占比。近视比例呈逐年上涨趋势,且在各个国家占比不同。近视伴随眼轴增长,在成年以后会出现各种眼部问题,由于眼轴增加、视网膜变薄,可能引起黄斑出血、新生血管、视网膜脱离等并发症。近视是由环境因素和遗传因素共同决定的,其防控手段多种多样,本文拟对青少年近视影响因素及防控方法进行讨论,以早发现,及时干预近视的发展。

血管内皮生长因子在糖尿病大鼠脉络膜视网膜的表达

目的在糖尿病的不同病程中,通过免疫组织化学方法观察血管内皮生长因子(vessel endothelial growth factor,VEGF)在糖尿病大鼠脉络膜中表达的时间、部位,比较正常大鼠及糖尿病大鼠视网膜、脉络膜组织中VEGF的表达情况。方法选取健康雄性W istar大鼠,采用随机数字表法分成糖尿病组和正常对照组,用链脲佐菌素(STZ)大剂量一次性腹腔注射诱导1型糖尿病模型。取不同组、不同时期大鼠视网膜脉络膜,利用免疫组织化学方法,检测VEGF蛋白质的表达情况。结果①糖尿病1个月组(M1)、血糖恢复组(Mh)大鼠视网膜脉络膜VEGF蛋白质的表达与正常对照组(M0)无明显区别。②糖尿病2个月组(M2)脉络膜可见VEGF蛋白质的阳性表达(33.3%),视网膜上VEGF蛋白质的阳性表达与正常对照组无明显区别。③糖尿病3个月组(M3)脉络膜VEGF蛋白表达阳性(55.6%),视网膜的内核层及节细胞层VEGF蛋白表达阳性与正常对照组(33.3%)比较有明显差异。④糖尿病4个月组(M4)脉络膜VEGF蛋白表达阳性(66.7%),视网膜的内界膜、内核层、外核层及节细胞层VEGF蛋白表达阳性(77.8%)。⑤糖尿病5个月组(M5)脉络膜VEGF蛋白表达阳性(88.9%),视网膜全层均有VEGF蛋白阳性表达(88.9%)。VEGF在脉络膜和视网膜的阳性染色密度随病程逐渐增加(P<0.05)。结论VEGF在大鼠脉络膜视网膜中的表达与病程有关,VEGF蛋白在脉络膜的表达先与视网膜。

青光眼阀植入联合视网膜冷凝治疗新生血管性青光眼的疗效观察

目的探讨青光眼阀联合视网膜冷凝治疗新生血管性青光眼的疗效。方法分析2001年3月至2004年12月在我院住院的新生血管性青光眼患者33例(18例采用青光眼阀植入联合视网膜冷凝术;15例采用青光眼阀植入术)术后视力、眼压及并发症。结果采用青光眼阀植入联合视网膜冷凝术组术后视力提高率、眼压控制率均高于青光眼阀植入组。且其术后发生前房出血、引流管阻塞明显低于后组。结论采用全视网膜冷凝术联合青光眼阀植入手术,既增加了房水外流,又改善了视网膜缺血、缺氧,使新生血管退化,减少了术后并发症的发生。对新生血管性青光眼治疗可以获得较为理想的效果。

灯盏细辛治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变的疗效观察

目的观察灯盏细辛治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变的临床疗效。方法将38例非动脉炎性前部缺血性视神经病变患者随机分为A组和B组,分别给予灯盏细辛和丹参治疗。结果2组视力都有不同程度提高,A组的视野改善优于B组。结论灯盏细辛对非动脉炎性前部缺血性视神经病变的视野具有一定的改善和保护作用。

白内障超声乳化吸出及人工晶体植入的临床评价

目的：评价白内障超声乳化吸出术（Ｐｈａｃｏ）＋人工晶体植入（ＩＯＬ）的临床疗效，并与同期白内障现代囊外摘除（ＥＣＣＥ）＋人工晶体植入术疗效对比。方法：比较 １４６只眼 Ｐｈａｃｏ＋ＩＯＬ及同期 ６０只 ＥＣＣＥ＋ＩＯＬ术后的视力、散光及并发症。结果：术后１周、１月、３个月，Ｐｈａｃｏ。组视力明显优于ＥＣＣＥ组。视力＞０．５，１个月时分别为８２％和７６．５％，３个月时分别为８４．３％和７６％。视力≥１．０，ｌ个月时分别为引．５％和２１％，３个月时分别为６３％和２８．５％，两组角膜散光均数比１月时分别为１．２３±０．４５Ｄ，２．２５±０．４７Ｄ，３月０．８７±０．４３Ｄ，１．８４±０．４４Ｄ，有显著差异性。术后反应如角膜一过性水肿，前房渗出等并无明显差别。结论：超声乳化白内障恢复快、好，术后散光少，较ＥＣＣＥ有明显优点。

改良显微镜直视下常规视网膜脱离手术疗效分析

目的 探讨改良显微镜直视下常规视网膜脱离手术的疗效。方法 视网膜脱离患者28例在显微镜直视下行常规视网膜脱离手术，观察术后疗效。结果 手术一次成功率达到92．86％。结论 同轴光高倍显微镜直视下行常规视网膜脱离手术具有简单、精确、安全等优点，但需具备一定条件。

小儿白内障后囊破裂人工晶状体植入术探讨

目的 探讨小儿白内障后囊不完整时Ⅰ期后房型人工晶状体植入术和Ⅱ期人工晶状体植入术两种术式的效果。方法 小儿白内障术前或术中后囊破裂2 7例(3 9眼)。分为两组:A组18例(2 6眼) ,行Ⅰ期后房型人工晶状体植入术,B组9例(13眼) ,未行人工晶状体植入或行Ⅱ期植入术,术后随访1年,比较两组的视力。结果 两组视力差异有显著意义(P <0. 0 5 ) ,B组的并发症多。结论 应重视小儿白内障手术的质量,以避免术中并发症的发生或尽量实行Ⅰ期人工晶状体植入。

气液交换治疗黄斑裂孔视网膜浅脱离

黄斑裂孔视网膜浅脱离是视网膜肿离中较特殊的一类。由于黄斑解剖位置特殊，手术操作过程较为复杂，如常用的颞侧巩膜缩短加冷凝、电凝裂孔、扣带术等。这些手术方法均直接处理了裂孔、术后疤痕形成，视力难以提高。八十年代以来，国际上和国内开始用注气法治疗黄斑裂孔视网膜脱离，如环扎加放液加注气等。但临床上对视网膜局限脱离、视网膜下液少的黄斑裂孔的治疗还存在一定困难。本文报导从用气液交换术治疗黄斑裂孔视网膜浅脱离9例从1989年11月～1990年8月取得较好疗效。

玻璃体切割术后眼超声乳化白内障摘出术中并发症的临床分析

背景 玻璃体切割术后白内障的发生率增加,而玻璃体切割术后眼行超声乳化白内障摘出术的难度更大,且手术并发症更多.对玻璃体切割术后眼行超声乳化白内障摘出术的并发症进行临床分析有助于减少术中和术后并发症的发生.目的 分析和比较玻璃体切割术后眼行超声乳化白内障摘出术的相关并发症的发生率.方法 纳入2011年1月至2013年11月于重庆医科大学附属第二医院眼科收治的超声乳化白内障摘出术者193例200眼,依据白内障术前是否行玻璃体切割术分为玻璃体切割组及非玻璃体切割组,前者依据患眼是否有硅油亚分为硅油眼组和无硅油眼组.对各组超声乳化白内障摘出术眼的术中并发症进行回顾性分析和比较.结果 玻璃体切割组超声乳化白内障摘出术中后囊膜破裂、悬韧带松弛、瞳孔不易扩大及虹膜弹性差的发生率分别为7.84％、3.92％、1.96％和1.96％,非玻璃体切割组分别为5.37％、0.67％、7.38％和1.34％,2个组间比较差异均无统计学意义（P=0.506、0.160、0.303、1.000）;硅油眼组上述并发症的发生率分别为0.00％、3.57％、3.57％和3.57％,无硅油眼组分别为17.39％、4.35％、0.00％和0.00％,硅油眼组后囊膜破裂的发生率高于无硅油眼组,2个组间的总发生率差异无统计学意义（P=0.442）.非玻璃体切割组、硅油眼组和无硅油眼组术中并发症的总发生率分别为14.77％、10.71％和21.74％,硅油眼组和无硅油眼组与非玻璃体切割组比较,差异均无统计学意义（P=0.770、0.392）.各组均未见虹膜损伤及脉络膜出血.结论 超声乳化白内障摘出术治疗玻璃体切割术后白内障眼的术中并发症发生率与非玻璃体切割术后白内障眼相比无明显增加,但与玻璃体切割术后硅油眼比较,术中无硅油眼的后囊膜更容易破裂,术中应仔细操作.

超声微泡造影剂介导EGFP质粒转染大鼠视网膜的实验研究

目的探讨超声破坏微泡介导EGFP质粒转染大鼠视网膜的效率及可行性,为实现外源基因高效、定向的转移目的奠定基础。方法将30只Long-evans大鼠分为6组,第1组仅以0.5W/cm2的超声波辐照大鼠眼球,第2组于尾静脉输入适当剂量的微泡造影剂,并立即以相同能量的超声波辐照大鼠眼球,第3组于尾静脉输入质粒,第4组于尾静脉输入质粒,并以超声辐照大鼠眼球,第5组于尾静脉输入质粒与微泡,第6组尾静脉输入质粒、微泡,并用超声辐照眼球。转染2周后,在激光共聚焦显微镜下观察EGFP表达情况。结果超声微泡介导的EGFP质粒对大鼠视网膜的转染效率,明显高于其他实验组。一定能量和时间的超声波辐照,及适当浓度的微泡,对大鼠视网膜脉络膜无明显损伤。结论利用低频率和一定能量的超声击碎携带EGFP质粒的超声微泡造影剂,能够有效地提高EGFP质粒在大鼠视网膜的转染效率。

年龄相关性黄斑变性流行病学研究进展

年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)是一种与年龄相关的致盲性退行性眼底病变,全球约有3 000万老年黄斑变性患者,每年约有50万人因此致盲。随着我国经济发展及人口老龄化的加剧,AMD在我国发病率呈逐年上升的趋势,现已跃居我国第三大致盲原因。目前,AMD的发病机制尚不完全明确,可能与氧化应激,炎症免疫反应,VEGF形成及遗传调控密切相关。临床上主要有光动力疗法、药物治疗、放射治疗、激光光凝、黄斑下手术、经瞳孔温热治疗、中医药治疗以及玻璃体腔注射VEGF拮抗剂如雷珠单抗、康柏西普等方法。本文主要就AMD有关的流行病学因素做一系统阐述,并重点就遗传调控方面取得的进展进行综述。

玻璃体腔注射lucentis治疗白内障术后顽固性黄斑水肿的疗效

目的通过玻璃体腔单次注射抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)药物lucentis观察治疗顽固性黄斑水肿的临床疗效和安全性。方法收集2014年7月至2015年7月在我科白内障超声乳化联合人工晶体植入术后发生顽固性黄斑水肿患者9例(10眼),病史均大于3个月。荧光素眼底血管造影(fundus fluoresceinangiography,FFA)及光学相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT)检查确诊并排除黄斑相关疾病引起的黄斑水肿。患眼玻璃体腔单次注射lucentis 0.5 mg(0.05 m L),治疗后随访12周,对比观察治疗前后患眼视力、眼压、OCT及FFA改变。结果 9例患者10只眼治疗后1周视力明显提高,4、12周后视力稳定;与治疗前比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。OCT检查黄斑中心凹视网膜厚度(central foveal thickness,CFT),从治疗前(480±121)μm,下降至治疗后1周(293±58)μm,4、12周厚度分别保持在(231±23)、(235±35)μm,治疗前后比较,差异均具有统计学意义(P<0.01),所有患者均未出现眼内或全身不良反应。结论玻璃体腔注射lucentis治疗白内障术后顽固性黄斑水肿能明显改善患者视功能,减轻黄斑水肿,无副作用。

白内障术前清洁结膜囊方法的现况研究

白内障是我国主要的致盲眼病,白内障摘除联合人工晶状体植入术是白内障患者复明的主要有效手段,细菌性眼内炎是其最严重的并发症。目前,预防眼内炎主要依赖于抗生素的使用,而结膜囊的术前准备也受到越来越多术者的重视。本文就白内障术前结膜囊的准备现况进行总结分析,主要有以下两点:(1)术前结膜囊抗生素眼液的应用;(2)术前结膜囊的消毒、冲洗;在此,结膜囊冲洗液中提出使用温热生理盐水的观点。另外,已有术者提出术前睑板腺处理的必要性。

超声微泡介导EGFP质粒对视网膜母细胞瘤细胞转染效率的实验研究

目的探讨不同浓度的超声微泡造影剂，在不同声强的超声辐照下，介导DNA质粒转染视网膜母细胞瘤（RB）细胞的效率及可行性，为实现外源基因高效、定向的转移奠定基础。方法将培养的RB细胞分别予以超声条件为0．25，0．5，0．75，1．0，1．25W／cm^2，60S的连续波辐照，微泡造影剂浓度为1％，100．4，20％，30％，以筛选出对RB细胞活性无明显抑制的最适超声声强、辐照时间和微泡浓度。根据以上筛选条件，转染EGFP基因入RB细胞，24～48h后，在荧光显微镜下观察EGFP表达情况，并用RT-PCR对EGFPmRNA进行半定量检测。结果声强〈0．75W／cm^2（60s），以及微泡浓度〈20％时，对RB细胞的活性无明显抑制。当微泡浓度10％，超声声强为0．5W／cm^2或0．75W／cm^2时，介导的DNA质粒对RB细胞转染具有较高的转染效率，明显高于其他实验组。超声声强为0．5W／cm^2或0．75W／cm^2介导的转染效率，在统计学上差异无显著性意义。结论浓度适当的微泡在优化的声强条件下，能够有效地提高DNA质粒在RB细胞中的转染效率。

小梁切除术对眼表泪膜功能的影响

目的前瞻性研究青光眼小梁切除术后眼表及泪膜功能的变化。方法选取86例施行小梁切除术的各类青光眼患者，以手术眼为手术组，以未手术眼为对照组。于术后1个月对干眼相关症状、体征、泪液分泌试验（Schirmer I试验）、泪膜破裂时f．7（break-uptime，BUT）、角膜荧光素染色、眼表虎红染色等项目进行检查评分，并比较各项结果在两组间差异。结果两组间在症状、体征、干眼诊断性试验等各项指标评分上差异均有统计学意义，手术组评分明显高于对照组，手术组干眼症发病率（34．88％）也高于对照组（2．32％），其差别同样具有统计学意义。各手术眼的干眼症表现在术后3～6个月后基本恢复，最迟于术后1年完全恢复正常。结论小梁切除术可在术后短期内对眼表和泪膜功能造成影响，使泪膜稳定性受到破坏而产生干眼症。