鸡大肠杆菌FimH基因C端结构域克隆及特性分析

[目的]通过进一步研究禽大肠杆菌I型菌毛主要结构基因FimH的基因结构及其抗原特性,为深入探索鸡大肠杆菌致病机理及研制基因工程疫苗奠定必要的理论基础。[方法]本文以已发表的Fim H基因C端核酸序列为参考序列,设计并合成引物,扩增鸡大肠杆菌JS1、JS2、JS6三个菌株的Fim H相应基因,使用Lasergene软件对其进行序列比对、蛋白质结构预测以及进化树的绘制等。[结果]JS1、JS2、JS6三个菌株的核酸同源性分别为97.3%、97.7%和97.3%,而氨基酸序列的相似性分别为95.3%、97.6%和95.3%。此外,其抗原决定簇基本相似,但在第78和79位抗原决定簇不同,这说明本研究中的3个鸡大肠杆菌菌株的Fim H基因序列及氨基酸序列的变异可能对Fim H蛋白抗原结构产生了轻微影响。进化树分析发现,本实验室分离的3株鸡大肠杆菌菌株FimH基因与选择的国内鸡大肠杆菌菌株的Fim H基因同源性比较高,同处于一个进化分支中。[结论]本研究结果表明鸡大肠杆菌I型菌毛Fim H基因未发生明显变异,这为后续研究Fim H基因的功能及其基因工程亚单位疫苗研发提供了重要的实验基础。

法氏囊活性肽前体蛋白CBL N端片段的克隆及抗原表位分析

Casitas B-lineage lymphoma(CBL)是一种广泛存在于法氏囊组织的细胞内蛋白。为探究禽源CBL基因结构及特征,本研究以Gen Bank公布的CBL基因序列为参考,设计合成引物,扩增CBL基因N端片段420 bp。同源性分析发现,CBL-N基因未发生明显变异,且CBL蛋白具有高度的保守性。Protean软件分析发现,CBL-N蛋白的二级结构比较复杂,含有较多的α和β结构,而且含有一定比例的无规则卷曲及β转角结构,多个区段有较高比例的抗原指数、表面可及性和亲水性,并推测CBL-N中119-136区域氨基酸序列可能是B细胞优势表位。本研究为探讨CBL蛋白功能奠定了基础。

T7 cDNA噬菌体展示文库筛选法氏囊活性肽BPP-Ⅱ结合蛋白及鉴定

法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ是近期发现的具有免疫调节功能的活性多肽。为了研究法氏囊活性肽对B细胞的作用机制,采用鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体文库筛选法氏囊五肽BPP-Ⅱ与鸡B相互作用的受体蛋白。三轮筛选后,富集的噬菌体滴度达1010pfu以上。富集噬菌体克隆的序列分析结果表明,与BPP-Ⅱ相互作用的鸡B淋巴细胞cDNA文库中序列与核受体辅阻遏物2同源。结果说明,法氏囊活性肽BPP-Ⅱ可能参与多种细胞过程,从而产生多种生物学效应。

法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的基因表达谱及功能分析

试验旨在探索法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的分子基础。利用BP7刺激禽前B淋巴细胞DT40细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测IgM的mRNA水平,并采用基因芯片分析基因表达谱及其生物学功能。结果显示,BP7刺激的DT40细胞产生IgM的mRNA水平明显升高。基因芯片分析发现,BP7处理的DT40细胞中共有1345个差异表达基因。通路分析发现,BP7诱导DT40细胞的差异表达基因涉及17条通路,包括受体互作、信号通路、代谢和蛋白质分解相关通路等。通路网络分析发现,细胞因子-细胞因子受体互作是BP7刺激后DT40细胞相关途径中的关键通路。基因本体论(GO)功能分析发现,BP7刺激DT40细胞中涉及的免疫相关功能主要包括免疫应答、免疫应答信号、Th1型免疫应答、细胞因子的产生和调节及其受体活性等方面。该研究阐述了法氏囊活性肽BP7调节禽未成熟B细胞的分子基础,为进一步研究法氏囊活性肽调控B细胞分化的分子机制提供了新的数据。