痛泻要方拆方对腹泻型肠易激综合征大鼠脑肠肽的影响研究

背景肠易激综合征(IBS)是临床常见的肠道疾病,使用痛泻要方治疗确有疗效,但分析方剂中主要显效药物的相关研究较少。目的观察痛泻要方拆方对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠结肠、海马体组织脑源性神经营养因子(BDNF)、P物质(SP)表达的影响。方法于2020年7月选取6周龄SPF级雄性Wistar大鼠共32只,采用抽签法随机分为空白组、模型组、白芍防风组(B-F组)和陈皮白术组(C-B组),每组8只。除空白组外,其余各组均使用结直肠扩张+慢性束缚应激法建立内脏敏感型IBS-D大鼠模型。造模后B-F组采用白芍防风中药浸膏(4 ml/kg)灌胃治疗,C-B组采用陈皮白术中药浸膏(4 ml/kg)灌胃治疗,空白组和模型组采用蒸馏水灌胃,治疗周期为14 d。比较造模后、治疗后四组大鼠体质量及增长情况、布里斯托大便分类法评分、不同压力梯度下腹部撤退反射(AWR)、结肠及海马体组织中BDNF和SP表达水平的差异。结果建立IBS-D模型大鼠成功,所有大鼠存活。B-F组、C-B组大鼠造模后体质量增长量小于空白组,治疗后体质量增长量大于模型组(P<0.05)。模型组大鼠治疗后布里斯托大便分类法评分高于空白组(P<0.05);B-F组和C-B组大鼠治疗后布里斯托大便分类法评分低于模型组(P<0.05)。治疗后在气囊压力为60 mm Hg时:模型组大鼠AWR评分均高于空白组(P<0.05)。治疗后在气囊压力为60、80 mm Hg时:B-F组大鼠AWR评分低于模型组、C-B组(P<0.05)。模型组、C-B组大鼠治疗后结肠组织BDNF、SP表达水平高于空白组(P<0.05);B-F组大鼠治疗后结肠组织BDNF、SP表达水平低于模型组和C-B组(P<0.05)。模型组大鼠治疗后海马组织BDNF表达水平低于空白组(P<0.05);模型组、C-B组大鼠治疗后海马组织SP表达水平高于空白组(P<0.05);B-F组大鼠治疗后海马组织BDNF表达水平高于模型组,SP表达水平低于模型组(P<0.05)。结论痛泻要方中白芍防风药对、陈皮白术药对均能明显增加IBS-D大鼠体质量、改善腹泻情况。相较于陈皮白术药对,白芍防风药对可明显缓解IBS-D大鼠肠道高敏感,更好地下调海马组织SP和结肠组织BDNF、SP的表达,上调海马组织BDNF的表达,调节相关脑肠肽的平衡。

赖氨酸辅助合成β分子筛及其催化四氢萘加氢裂化性能

为了减少β分子筛晶格缺陷,强化其酸性和稳定性,在工业合成体系中使用少量L-赖氨酸辅助β分子筛晶化,并对所合成的样品进行X射线衍射(XRD)、X射线荧光光谱(XRF)、场发射扫描电镜(FESEM)、氨气程序升温脱附(NH3-TPD)、吡啶红外(Py-IR)和氮气吸附脱附表征。结果表明:使用L-赖氨酸辅助合成β分子筛可有效提高β分子筛产物的相对结晶度、硅铝物质的量之比和微孔比表面积,并改变晶粒形貌。NH_(3)-TPD和Py-IR表征结果显示,L-赖氨酸辅助合成的Hβ分子筛较常规Hβ分子筛具有更高的酸强度和更大的中强酸、强酸酸量。将其制备成双功能催化剂并用于催化四氢萘的加氢裂化反应,L-赖氨酸辅助合成β分子筛基催化剂表现出优异的催化活性和稳定性,这主要归因于β分子筛的中强酸、强酸性质、热和水热稳定性以及十二元环孔道体系得到改善。

P物质与肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征关系及中医药调控的研究进展

腹泻型肠易激综合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome, IBS-D)是以腹痛、腹泻为主要特征慢性非器质性肠道疾病。其主要病因及发病机制尚未充分阐明,但已明确内脏超敏反应和胃肠动力紊乱是其主要的病理生理基础。中医学认为肝郁脾虚是IBS-D主要病机,具有腹痛欲泻、泻后痛减的特征。P物质(substance P,SP)广泛分布于中枢神经系统及胃肠道,可通过脑肠交互作用促进肠平滑肌收缩,参与痛觉信息传递,诱发内脏敏化和加速胃肠蠕动,与IBS-D的发生密切相关。中医药防治该病由来已久,临床疗效显著,研究发现中药防治该病的作用机制与脑肠交互的关键因子P物质关系密切。中医药调控肝郁脾虚型IBS-D与P物质存在一定相关性。故就P物质与肝郁脾虚型IBS-D之间关系及中医药的调控作用进行综述。

曹吉勋教授治疗小儿功能性便秘的经验

功能性便秘是小儿的常见病。此病患儿的临床表现主要是排便次数减少、粪便干结、粪便量减少及排便费力等。小儿服药较为困难,其对治疗的依从性差,且其在用药后易出现不良反应,因此临床上对功能性便秘患儿进行治疗较为棘手。曹吉勋教授是第二批四川省名中医,其治疗胃肠疾病的经验丰富。他认为,小儿功能性便秘的主要病机是脾虚失运、气机郁滞,故应以健运脾胃、行气导滞、润肠通便为治疗要点。他采用自拟的中药方剂并随证加减治疗小儿功能性便秘,取得了良好的效果。本文主要是介绍曹吉勋教授治疗小儿功能性便秘的经验。

守定位 促转型 下足功夫提升风控能力

近年来,江苏昆山农商银行始终坚持底线思维,坚守市场定位,优化信贷结构,不断提升信贷资产质量和管理水平,资产质量和风险抵补能力进一步向好,收息实现稳步提升,不良资产清收处置成效显著。在商业银行稳健发展能力“陀螺”体系评价中,三年蝉联县域农商银行第二名。

猪黑皮质素受体3和4基因克隆及分析

以长白猪(Landrace)大脑cDNA为模板,克隆长白猪黑皮质素受体3和4基因(MC3R和MC4R).序列分析显示:长白猪MC3R基因cDNA编码具319个氨基酸的前体蛋白,与人、大鼠、小鼠和斑马鱼的氨基酸序列一致性分别为86.4%、83.3%、82%和69.7%;MC4R基因cDNA全长1175bp,编码具332个氨基酸的前体蛋白,与人、大鼠、小鼠的氨基酸序列一致性高达94%以上,与斑马鱼MC4R氨基酸序列享有70.7%的同源性.序列分析显示,猪MC3R和MC4R基因都具有典型的七次跨膜结构域,和短的胞内环和胞外环,且在第五个跨膜域中保守的甲硫氨酸(M)分别替换为异亮氨酸(I)和缬氨酸(V).另外,在猪MC3R和MC4R中还鉴定到保守的半胱氨酸残基,第一个胞内环中保守的PMY基序和N末端的3个N-链接糖基化位点.组织表达图谱分析表明,MC3R主要在大脑和脾中高表达,而MC4R主要在六种检测的组织中都有表达,在肾中表达较弱.

细胞和组织中两种线粒体标记方法的比较

目的比较探针和抗线粒体蛋白抗体标记细胞及组织中线粒体的效果,为相关研究选取适合的标记方法提供参考。方法在经体积分数4%多聚甲醛固定的HepG2细胞中,分别使用100 nmol/L MitoTracker Deep Red探针和抗葡萄糖调节蛋白75(Grp75)抗体标记线粒体;在经体积分数4%多聚甲醛固定的HeLa细胞中,分别使用75 nmol/L、100 nmol/L MitoTracker Deep Red探针和抗Grp75抗体标记线粒体;取人肝组织冰冻切片,经4%多聚甲醛固定后,分别使用150 nmol/L MitoTracker Deep Red和抗Grp75抗体标记线粒体。共聚焦显微镜下观察。结果MitoTracker Deep Red探针标记细胞线粒体的效果不如抗Grp75抗体标记清晰,且在HeLa细胞中有非特异性染色,抗体标记可更清楚地反映线粒体的点状和管状分布;在组织中MitoTracker Deep Red探针标记的单个细胞更均匀,标记线粒体的特异性更高,效果优于抗体染色。结论在细胞中使用抗Grp75抗体标记线粒体效果更好,能直观反映线粒体的分裂融合状态;在组织中使用MitoTracker Deep Red染色效果更佳。

免疫荧光检测p53与线粒体共定位的实验方法探索

目的探索研究p53与线粒体共定位的最佳免疫荧光条件,为检测蛋白质与线粒体共定位的研究提供参考。方法低氧处理HeLa细胞,免疫印迹检测p53表达;分别使用甲醇固定HeLa细胞、甲醇:丙酮混合液(体积比1∶1)固定HeLa细胞、4%多聚甲醛固定HeLa细胞,前二者不作通透处理,后者用0.1%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton-X 100)通透,同时染色p53和线粒体;用4%多聚甲醛固定HeLa细胞后,降低Triton-X 100浓度至0.05%、0.025%、0.01%和0.005%,同时染色p53和线粒体;用4%多聚甲醛固定HeLa细胞后,Triton-X 100浓度降至0.01%和0.005%,通透标记p53后再次使用0.1%Triton-X 100重新通透细胞器膜染色线粒体。结果低氧后p53表达上调(P<0.01),可用于后续免疫荧光实验。使用甲醇和混合液固定组均可同时在细胞核及细胞质内观察到明显的p53信号,并可观测到其与线粒体的共定位,混合液组共定位更明显。多聚甲醛固定组用0.1%Triton-X 100通透后p53信号主要在细胞核内,未能观察到共定位;使用4%多聚甲醛固定后,降低Triton-X 100浓度至0.05%和0.025%在一定程度上削弱p53核内信号,增强共定位信号,但细胞核内信号仍强于细胞质,当降低至0.01%和0.005%,细胞质内检测到p53信号,细胞核内未检测到p53信号,提示此条件下核膜未被通透,但同样也未能通透线粒体膜,导致线粒体标记失败;二次通透完全规避p53核内信号,并成功标记线粒体,检测到p53与线粒体的共定位。结论使用甲醇或混合液固定可观察到p53与线粒体共定位,其中混合液效果更佳;使用4%多聚甲醛固定结合2次通透可有效避免核内信号,检测到p53和线粒体的共定位。

胰腺星形细胞在胰腺纤维化中的研究进展

目的综述胰腺星形细胞在胰腺纤维化中的研究进展,了解胰腺星形细胞的特性、活化及对胰腺纤维化作用的机制。方法查阅近年来国内外有关胰腺星形细胞及其在胰腺纤维化研究中的相关文献,对胰腺星形细胞及其与胰腺纤维化的关系及致病机制进行综述。结果胰腺炎和终末期移植胰腺伴随的纤维化与胰腺星形细胞的活化密切相关,而胰腺星形细胞的活化对胞内外的一些信号通路分子等的影响和调节的详细机制还需要深一步探讨。结论研究胰腺星形细胞的活化机制能对胰腺纤维化的过程进一步了解,以便于下一步寻找干预的新靶点。

不同途径过继回输致耐受树突状细胞延长小鼠移植心脏存活研究的系统评价

目的系统评价采用不同途径过继回输致耐受树突状细胞(tolerogenic dendritic cells,Tol-DCs)对移植心脏存活的影响及可能机制。方法计算机检索PubMed、EMbase和ISI,查找关于过继回输Tol-DCs对移植物存活影响的动物实验,检索时限均从建库至2011年3月5日。参照循证医学系统评价的方法,以同种异体移植心脏存活时间为终点指标,分析Tol-DCs对移植心脏存活的影响;通过整合纳入文献信息,总结Tol-DCs延长移植物存活的机制。结果最终纳入44篇文献,含4种Tol-DCs诱导方式,包括过继回输基因修饰、药物干预、细胞因子诱导及其他源性(脾源、肝源)Tol-DCs。纳入研究多数采用一次性尾静脉输注2×106Tol-DCs。我们采用森林图呈现实验组和未处理组移植心脏存活时间,半定量评价4种诱导方式产生的Tol-DCs对移植心脏存活时间的影响。结果显示4种Tol-DCs均能有效延长移植心脏的存活时间,基因修饰组平均延长存活时间为22.02±21.9 d(3.2倍于对照组),药物诱导组为25.94±16.9 d(4.3倍),细胞因子诱导组为9.00±8.13 d(1.9倍),其他源性Tol-DCs组为10.69±9.94 d(2.1倍)。与英文摘要保持一致:过继回输Tol-DC延长移植物存活的机制有:(1)诱导T细胞低反应性(MLR);(2)削弱对移植物的细胞毒性杀伤效应(CTL);(3)诱导T细胞向2偏移(CK)(;4)诱生Treg。结论对MHC全错配近交系同种异体心脏移植受者小鼠,过继回输基因修饰、药物干预、细胞因子诱导及其他源性(脾源、肝源)Tol-DCs均可显著延长移植物存活或诱导免疫耐受。其中以基因修饰和药物诱导的Tol-DCs延长存活时间效果最为显著,且过继回输基因修饰的可靠性和稳定性强于药物诱导。

痛泻要方拆方对IBS-D大鼠肠道通透性影响的功能研究

目的探讨痛泻要方拆方是否能改善腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠的症状,同时探讨各个拆方组之间是否存在差异。方法采用随机抽样的方法将36只雄性Wistar大鼠分为空白组、模型组、白芍防风组和陈皮白术组,每组9只。除空白组外,对大鼠进行连续14天的结直肠扩张刺激+慢性束缚应激,构建IBS-D内脏超敏模型,以布里斯托评分及结肠病理观察判断模型的成功与否,排除造模失败大鼠。空白组和模型组仅用蒸馏水灌胃治疗,白芍防风组给予0.27g/ml的白芍防风中药浸膏,陈皮白术组给予0.405g/ml的陈皮白术中药浸膏。在治疗结束时,取末端结肠组织以及动脉血。实验结束后,观察远端结肠的组织病理学比较。用ELISA法测量各组结肠丙二醛(MDA)和血清D乳酸(D-LA)的表达水平。结果用痛泻要方拆方治疗后,1.与模型组相比,两组治疗组大鼠的布里斯托评分明显降低(P<0.05);与陈皮白术组相比,白芍防风组大鼠的布里斯托评分无明显差异(P>0.05)。2.与模型组相比,两组治疗组大鼠的结肠组织MDA、血清D-LA含量明显下降(P<0.05);与陈皮白术组相比,白芍防风组大鼠的结肠组织MDA、血清D-LA含量明显下降(P<0.05)。结论痛泻要方拆方两组均对IBS-D模型的大鼠有明显的治疗效果,这可能与改善肠道通透性有关,同时白芍防风组的疗效优于陈皮白术组。

HIF-3α在线粒体的表达及意义

目的探究低氧诱导因子-3α(HIF-3α)定位至线粒体的现象及其生理、病理意义。方法①低氧(1%O2)或脯氨酸羟化酶抑制剂——二甲基乙二酰甘氨酸(DMOG)、氯化钴(CoCl2)模拟低氧处理人宫颈癌细胞系HeLa和人肾癌细胞系ACHN后,蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫荧光(IF)检测HIF-3α在细胞中的分布及其在线粒体中的表达;②通过酶敏感实验观察HIF-3α的线粒体亚结构定位;③采用Western blot检测HIF-3α在正常小鼠不同器官组织、人肝癌组织线粒体中的表达情况。结果①在检测的2种细胞系(HeLa和ACHN细胞)中,HIF-3α在常氧及缺氧条件下均可定位至线粒体,且缺氧组HIF-3α在线粒体中的表达高于常氧组;②HIF-3α的消化模式与线粒体外膜蛋白一致;③HIF-3α在小鼠多种器官组织中均可定位线粒体,HIF-3α在人肝癌组织线粒体中的表达高于正常及癌旁组织。结论 HIF-3α在常氧及缺氧条件下均可定位至线粒体外膜,低氧可促进其线粒体定位;该现象可能与肝癌的发生发展相关。

基于脑肠轴的肠道菌群调控腹泻型肠易激综合征的研究进展

腹泻型肠易激综合征(IBS-D)是一种具有较高人群患病率的功能紊乱性疾病。内脏高敏是IBS-D最重要的生物学标志,其特征性症状是精神刺激会引发腹痛腹泻,与中医肝郁脾虚痛泻的症状情志过极诱发“腹痛欲泻,泻后痛减”极为相似。内脏高敏由中枢致敏(中枢过度伤害应答)和外周致敏(肠道痛觉增敏)两部分组成,其发生机制与脑肠轴密切相关。神经生长因子(NGF)是脑肠轴上的疼痛共情绪调控分子,可以同时从中枢和外周参与内脏高敏的发生。近期研究发现,肠道菌群是连接脑肠交互机制的中介;同时,肠道菌群的失调可以导致及加重内脏高敏。文章就肠道菌群影响脑肠轴上的NGF表达进而从中枢及外周调节内脏高敏的机制进行探讨。