生物安全三级实验室人员管理相关问题的探讨

在生物安全三级(BSL-3)实验室日常管理工作中,实验人员的管理是实验室安全运转的关键,可保证生物安全管理体系文件的准确执行,减少安全隐患。我们总结了数年来管理BSL-3实验室的经验和教训,对人员管理有关问题提出想法和建议,以供参考。

医学实验室的几个生物安全问题及应对策略

实验室生物安全的重要性逐渐被人们认识,但仍有一些生物安全问题被医学实验室忽视,如常规标本和细胞培养系中可能存在病原,用于检测样本的实验室设备可能被病原污染。对这些被忽视的生物安全问题,应在具体工作中加以关注,并提高必要的个人防护水平。

SARS病人特异性抗体的检测及其与T细胞亚群计数和激素治疗的相关性

目的：了解SARS病人抗SARS—CoV的检出与病程、T淋巴细胞亚群数值变化及激素治疗间的关系。方法：用ELISA和流式细胞术分别检测SARS病人系列血清标本的抗SARS—CoV和血液T淋巴细胞亚群的绝对值，并进行动态观察。结果：大多数SARS病人的抗SARS—CoV，需在发病10d后的系列血清可检出，其不随T淋巴细胞亚群计数的减少，和激素治疗而转为阴性或明显降低。结论：SARS病人抗SARS—CoV的检出与病程有关，但与T淋巴细胞亚群数值的变化和激素治疗均无显著相关。

自制捕获法ELISA抗麻疹病毒-IgM诊断试剂盒的初步评价

目的初步评价应用自制抗麻疹病毒（抗MV）单克隆抗体（McAB；单抗）及其酶结合物研制的捕获法ELISA抗MV-IgM诊断试剂盒。方法考核本试剂盒的特异性和稳定性；比较其与同类商品试剂盒的临床检测结果，以评估检测血清抗MV-IgM的敏感性。结果①本试剂盒仅与抗MV-IgM阳性血清发生反应，而与抗甲型肝炎病毒-IgM（抗HAV-IgM）、抗乙型脑炎病毒-IgM（抗JEV-IgM）、抗乙型肝炎病毒核心-IgM（抗HBc-IgM）、抗巨细胞病毒-IgM（抗CMV-IgM）、抗EB病毒-IgM（抗EBV-IgM）及类风湿因子（RF）阳性血清均无反应；试剂盒放置37℃ 3d，检测血清抗MV-IgM的活性，无明显降低。②在39例临床疑似麻疹的56份血清中，两种试剂盒仅对8例的8份血清抗MV-IgM检测结果不一致，其中6例的首份血清，本试剂盒阳性，商品试剂盒阴性（第2份血清两种试剂盒均阳性），1例的首份血清（未采到第2份血清），本试剂盒为临界值，商品试剂盒阴性。另1例的第2份血清本室试剂盒阳性，商品试剂盒阴性（两种试剂盒首份血清均阴性，第3份血清均阳性）。结论本实验室研制的捕获法ELISA抗MV-IgM诊断试剂盒具有良好的特异性、稳定性和敏感性，适于麻疹病毒感染的临床诊断和流行病学监测。

临床微生物实验室如何应对新发和再发传染病

为使临床微生物实验室能较好地应对包括生物恐怖在内的各种新发和再发传染病,文中列出了发达国家主要担忧的各种相关病原,并回顾了快速、准确鉴定病原微生物的技术发展状况.

HBeAg在乙型肝炎病毒感染中的生物学作用

乙型肝炎病毒的复制、装配或感染毋须e抗原(HBeAg)参与,故对其功能了解不多.临床和实验研究提示:乙型肝炎病毒自然感染中,血清HBeAg具有免疫调节作用,而胞质HBeAg可作为炎性免疫应答的靶标.HBeAg的这种双重作用和使T细胞耐受或激活的能力显示了其与宿主相互作用的复杂性.

胶体金免疫层析试剂盒对甲型H1N1流感病毒(2009)抗原快速检测的敏感性分析

目的了解胶体金免疫层析试剂盒对甲型H1N1流感病毒(2009)抗原快速检测的敏感性。方法分别用甲型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)和甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)对171例疑似甲型H1N1流感(2009)患者鼻咽拭子标本进行检测,以实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)核酸检测结果为参考,比较胶体金免疫层析试剂盒对不同病程以及不同病毒核酸载量标本检测的敏感性。结果 2种试剂盒的检测敏感性与标本的病毒核酸载量呈正相关(P<0.01),病毒载量≥108拷贝/mL时均可达73.3%。同时,2种试剂盒的阳性检出率与标本的病程呈负相关(P<0.01),发病1～2 d时分别为66.7%和62.5%,推测其在实际应用中的理论敏感性分别可达77.3%和74.6%。结论胶体金免疫层析试剂盒检测甲型H1N1流感病毒(2009)在发病初期及病毒载量较高时有较好的检测效果,可帮助临床早期诊断和海关口岸等机构的现场筛查。但鉴于胶体金免疫层析法自身的局限性,其结果只能作为初步参考,最终的确认结果应以PCR结果为准。

新型甲型H1N1流感68例临床分析

目的:探讨上海地区甲型H1N1流感确诊病例的临床特点。方法:分析2009年5月24日至7月1日上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心收治的甲型H1N1流感68例确诊病例的流行病学及临床资料。结果:68例甲型H1N1流感确诊病例的临床特点:(1)不同性别和各年龄段均可感染和发病,但主要见于青少年,女性患者偏多。(2)首发症状多为发热,大多数为中低热,发热持续时间为1～4d;主要症状包括发热(98.5%)、咳嗽(83.8%)、咽痛(52.9%);主要体征为咽部充血(95.6%)、扁桃体肿大(54.4%);少数患者可出现病毒性肺炎。(3)血清C反应蛋白升高和前白蛋白下降比较常见。(4)在奥司他韦治疗的前提下,患者病毒转阴时间1～7d,中位时间4d。结论:此次甲型H1N1流感病毒具有很强的传染性,能在人与人之间传播,并在不同国家扩散。该次流行期间的感染者大多表现出轻微的症状,患者很快痊愈。

2009～2010年上海地区急性呼吸道感染病毒病原谱分析

调查2009-2010年上海地区人群急性呼吸道感染（ARTI）的病毒性病原,探讨2009甲型H1N1流感暴发背景下呼吸道感染病毒病原谱的构成。采用套式多重反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和实时荧光定量RT-PCR方法,对来自2 044例患者的2 044份标本（包括2 005份鼻咽拭子和39份肺泡灌洗液）,同时检测腺病毒（ADV）、副流感病毒（PIV）、甲型流感病毒（FluA）、乙型流感病毒（FluB）、微小核糖核酸病毒、呼吸道合胞病毒（RSV）、人偏肺病毒（hMPV）、冠状病毒（CoV）和人博卡病毒（HBoV）。其中,656（32.09%）份标本经呼吸道病毒检测为阳性,52份标本为双重感染。FluA检出率最高（13.36%）,其后依次为微小核糖核酸病毒（10.23%）、FluB（4.84%）、ADV（1.96%）、PIV（1.76%）、RSV（1.32%）、CoV（0.59%）、hMPV（0.39%）和HBoV（0.20%）。但各月病毒检出率分布不均,2009和2010年呼吸道病毒检出率高峰出现在当年11月（53.07%和65.59%）,低谷都出现在当年5月,且2009年5-9月的病毒检出率高于2010年同期（32.02%vs15.38%,P〈0.05）。其中,2009甲型H1N1流感暴发导致2009年10月-2010年1月2009甲型H1N1流感病毒占当月检出FluA的100%,2009年6-9月也占当月检出FluA的较高比率,依次为90.91%（20/22）、75.00%（15/20）、48.00%（12/25）和56.25%（18/32）。比较甲型H3N2流感病毒和2009甲型H1N1流感病毒分别在上呼吸道感染（URTI）和下呼吸道感染（LRTI）中的检出率,无统计学差异（URTI,85.29%vs76.61%;LRTI,14.71%vs23.39%;P〉0.05）。呼吸道病毒检出率还与年龄相关,0-4岁组和5-14岁组病毒检出率高于其他年龄组。在0-4岁及≥65岁组中,微小核糖核酸病毒检出率最高,FluA次之;其余年龄组中FluA检出率最高。混合感染中15岁以下儿童占50%（26/52）,微小核糖核酸病毒与其他病毒混合感染占84.62%（44/52）。本研究表明,上海地区2009-2010年FluA是最常见的急性呼吸道感染病原,2009甲型H1N1流感病毒成为2009年FluA的优势亚型。微小核糖核酸病毒是混合感染中最常见的病原。结果提示,应长期监测主要呼吸道病毒的活动水平,并加强对微小核糖核酸病毒流行病学和致病性的研究。

标本质量对麻疹病毒感染患者实验室诊断的影响

麻疹是最具传染性疾病之一，至今仍是发展中国家儿童发病和死亡的重要原因，成为突出的公共卫生问题，随着麻疹疫苗的普遍接种，使不典型麻疹增多，增加了诊断的难度，因此本文就麻疹病毒的实验室确认、检测方法、麻疹病毒的血清学、分子生物学检测等方面进行扼要阐述。

标本质量对麻疹病毒感染患者实验室诊断的影响

麻疹是最具传染性疾病之一，至今仍是发展中国家儿童发病和死亡的重要原因，成为突出的公共卫生问题，随着麻疹疫苗的普遍接种，使不典型麻疹增多，增加了诊断的难度，因此本文就麻疹病毒的实验室确认、检测方法、麻疹病毒的血清学、分子生物学检测等方面进行扼要阐述。

SARS患者淋巴细胞亚群和Th1/Th2细胞因子的检测与意义

为了解SARS患者糖皮质激素治疗后细胞免疫状况 ,系列观察我院 7例SARS确诊者 (5男 2女 ,2 8～ 6 8岁 )淋巴细胞亚群及细胞因子变化 ,病程 0～ 6 1d。另选 31例HIV感染者作疾病对照 ,2 4例健康献血员作正常对照。用流式细胞术检测外周血CD3、CD4和CD8细胞 ,以ELISA法检测血清Th1/Th2类细胞因子 (IFN γ/IL 4 )含量。结果是SARS组CD3、CD4、CD8均值 (5 2 9 80、 313 0 9、 195 94 /μl)都低于正常组均值 (14 2 0 95、 80 9 80、 5 30 95 /μl) ,P均 <0 0 0 1;与HIV组均值(813 2 3、 176 81、 6 0 3 10 /μl)比较 ,CD4、CD8偏低 (P <0 0 0 6、P <0 0 0 1)。SARS组CD4 /CD8比值与正常组相比 ,差异不显著。淋巴细胞亚群数目与病程密切相关。SARS组Th1/Th2类细胞因子水平 (A均值 0 0 5 8/0 0 31)均低于HIV组 (A均值0 0 79/0 0 33)和正常组 (A均值 0 111/0 0 35 ) ,细胞因子含量与病程无关。提示我们所观察的SARS患者细胞免疫功能低下。

三级生物安全防护实验室职业紧张分析

目的三级生物安全实验室(Biosafety level 3 laboratory,BSL-3实验室)工作人员因面对高致病性病原微生物操作和特殊工作环境而存在的工作压力可能不利于风险控制而增加意外事故,本研究分析BSL-3实验室工作人员的职业紧张度及紧张源,为控制实验室风险提供依据。方法以JDC模式和ERI模式为理论基础,对"中文版简明职业紧张问卷"改编成适用于BSL-3实验室工作人员的职业紧张评估问卷,调查了上海、浙江、江苏、福建、武汉五个省市的六家BSL-3实验室的87位工作人员职业紧张状况。结果研究得出年龄、工作年限、工作身份、BSL-3实验室所操作微生物的种类、传播途径及在BSL-3实验室内进行动物实验是显著影响BSL-3实验室工作人员职业紧张水平的因素。结论 20-39岁、低工作年限、固定工作人员、进行呼吸道传播病原微生物操作、动物实验以及多种病原微生物操作的工作人员职业紧张程度较高。

人肠道病毒分型方法和鉴定技术的研究进展

近年来,随着分子生物学和生物信息学的进步,人肠道病毒基因序列分析应用广泛,基因测序自动化发展迅速,促进了人肠道病毒分型方法和鉴定技术的发展。鉴于新型人肠道病毒不断被报道,人肠道病毒的范围目前明显扩大,本文就人肠道病毒分型方法和鉴定技术研究进展作一综述。

抗肠道病毒71型药物研究进展

肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的主要病原体,并且EV71引起的神经系统并发症所造成的危害也越来越引起人们的重视。但是迄今尚无有效的EV71疫苗和特效抗EV71药物。目前,国内外针对EV71复制周期不同靶点的抗病毒药物研究取得了一定的突破。现将受体阻断剂、病毒衣壳结合剂、蛋白酶抑制剂、3DRNA多聚酶抑制剂、利巴韦林、RNA干扰技术以及中药等抗EV71的研究进展进行综述。

生物安全三级实验室的工作满意度现状及其与职业紧张程度的关联

因生物安全三级（BSL‐3）实验室工作人员需在特殊工作环境中对高致病性病原微生物进行操作，其心理健康状态可影响实验室生物安全。本研究以工作满意度作为早期心理健康状况的评估指标，对江苏、浙江、上海、福建、湖北5个省市6家BSL‐3实验室工作人员进行调查，分析工作满意度与职业紧张程度的关联。调查结果显示，BSL‐3实验室人员的工作满意率为32．2％。职业紧张程度与工作满意度呈负相关。工作要求‐自主（JDC）模式中“社会支持”是提高工作满意度的因素，高社会支持组比数比（ OR ）值为4．60（95％ CI为1．25～16．97）。付出‐回报失衡（ERI）模式中“内在投入”是降低工作满意度的因素，高内在投入组 OR值为0．03（95％ CI为0．00～0．28）。分析结果提示，可通过加强“社会支持”和解除过度“内在投入”等措施，降低BSL‐3实验室人员的职业紧张程度，从而提高工作满意度。

乙型肝炎患者IL-6、IL-8、IL-10的变化

研究表明,乙肝病毒无直接的细胞毒作用,病毒所激发的机体免疫应答对乙型肝炎的病情进展、转归及预后,具有重要意义,而细胞因子在免疫应答中起着重要的介导作用。为研究乙型肝炎患者血清IL-6、IL-8、IL-10的变化,我们检测了部分患者血清中这3种细胞因子的含量,并对其临床意义进行了探讨。 1 材料和方法 1.1 检测对象 按全国第6次病毒性肝炎学术会议制定的标准,确诊为乙型肝炎患者115例,其中慢性轻度36例,中度33例,重度14例,肝炎肝硬变32例。35例健康人作对照组,均为自愿者。全部患者HBsAg阴性,丙氨酸转氨酶正常。

上海2009甲型H1N1流行性感冒病毒全基因组分析

2009年全球暴发2009甲型H1N1流行性感冒(简称流感)疫情,上海于2009年5月出现第1例输入型病例。为了解上海地区输入型2009甲型H1N1流感病毒的生物学特征,以上海较早发现的2例输入型甲型H1N1流感患者作为研究对象,分离出A/Shanghai/37T/2009和A/Shanghai/71T/2009病毒,利用实时定量荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定病毒,通过扫描透射电子显微镜观察、免疫荧光检测、全基因组测序和生物信息软件分析,对这2株流感病毒形态、结构、耐药性、基因特点和病毒型别等进行研究。结果显示,病毒呈现正黏病毒颗粒形态特征;犬肾(MDCK)细胞内的病毒能与患者恢复期血清反应。此2株病毒的全基因核酸序列和氨基酸序列与美国参考株A/California/04/2009(H1N1)有较高同源性,其中第31位氨基酸残基发生改变。对金刚烷胺耐药,而对奥司他韦敏感。基于全基因组的系统发育分析,确认此2株病毒属2009甲型H1N1流感病毒。