目的检测微小RNA-335在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清中的表达,并探讨其对钙调蛋白(Ca M)调控的作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定106例AIS患者及98例健康对照组血清中miR-335表达情况;用生物信息学数据库查...目的检测微小RNA-335在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清中的表达,并探讨其对钙调蛋白(Ca M)调控的作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定106例AIS患者及98例健康对照组血清中miR-335表达情况;用生物信息学数据库查询分析miR-335对钙调蛋白编码基因CALM1的靶向结合关系;脂质体转染法将miR-335模拟物、抑制物以及相应阴性对照物分别转染至人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中并进行细胞培养,采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blot分别检测干预后HUVECs中钙调蛋白mRNA和蛋白的表达水平。结果与健康对照组相比较,AIS组患者血清miR-335表达明显下调(P<0.01);生物信息学软件的查询分析显示CALM1存在miR-335潜在靶向结合位点;RT-PCR和Western blot检测结果显示miR-335模拟物组Ca M mRNA和蛋白的表达水平较对照组显著下降(P<0.01),而miR-335抑制物组Ca M mRNA和蛋白的表达水平较对照组显著增高(均P<0.05)。结论急性缺血性脑卒中患者血清miR-335表达明显下降,表达下调的miR-335可能通过上调钙调蛋白的表达从而发挥重要作用。展开更多
文摘目的检测微小RNA-335在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清中的表达,并探讨其对钙调蛋白(Ca M)调控的作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定106例AIS患者及98例健康对照组血清中miR-335表达情况;用生物信息学数据库查询分析miR-335对钙调蛋白编码基因CALM1的靶向结合关系;脂质体转染法将miR-335模拟物、抑制物以及相应阴性对照物分别转染至人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中并进行细胞培养,采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blot分别检测干预后HUVECs中钙调蛋白mRNA和蛋白的表达水平。结果与健康对照组相比较,AIS组患者血清miR-335表达明显下调(P<0.01);生物信息学软件的查询分析显示CALM1存在miR-335潜在靶向结合位点;RT-PCR和Western blot检测结果显示miR-335模拟物组Ca M mRNA和蛋白的表达水平较对照组显著下降(P<0.01),而miR-335抑制物组Ca M mRNA和蛋白的表达水平较对照组显著增高(均P<0.05)。结论急性缺血性脑卒中患者血清miR-335表达明显下降,表达下调的miR-335可能通过上调钙调蛋白的表达从而发挥重要作用。