晶体蛋白非酶促糖基化的抑制与中药预防Wistar大鼠老年性白内障的研究

本文报道晶体蛋白非酶促糖基化的抑制与中药预防大鼠老年性白内障的实验研究结果。在体外研究系统中,以阿斯匹林(Aspirin)作为抑制剂,实验结果表明Aspirin可明显抑制糖基化作用,抑制率与Aspirin浓度和保温时间成正相关,20mMAspirin在保温第15天的最大抑制率为40％。糖基化水平降低,可防止硫氢基氧化并减少高分子蛋白聚合物的生成。体内实验,用抗衰老中药喂饲16月龄大鼠,连续6个月,比较药物组与对照组晶体蛋白糖基化水平与白内障发生率的关系。结果表明,药物组晶体蛋白糖基化水平较同龄对照组明显降低,肝脏超氧化物歧化酶活性较同龄对照组升高,上述二指标均与4月龄年轻大鼠相似。药物组白内障发生率较同龄对照组降低约50％,P<0.005。上述结果预示,用抗衰老中药预防与延缓大鼠老年性白内障的可能性。

Ⅰ型糖尿病患者的HLA-DR-DQ基因单体型分析

应用ＨＬＡ－ＤＲＢ，ＤＱＢ１序列特异性引物ＰＣＲ扩增方法，鉴定８１例ＩＤＤＭ患者，７个家系和８４例正常对照汉族人群的ＤＲＢ基因多态性及ＩＤＤＭ的ＨＬＡ－ＤＲ－ＤＱ基因单体型。结果表明：（１）ＩＤＤＭ患者ＤＲＢ１＊０３，ＤＲＢ１＊０９等位基因频率明显高于对照组，其频率分别为８．６４％ｖ．ｓ３．０％和２８．４％ｖ．ｓ１６．１（Ｐ＜０．０５）。（２）患者中ＤＲＢ１－ＤＲＢ３／ＤＲＢ１－ＤＲＢ４基因型频率明显高于对照组，即１９．８％ｖ．ｓ６．７％（Ｐ＜０．０５）。（３）首次证明ＤＲＢ１＊１２等位基因与中国人ＩＤＤＭ正相关。上述结果提示不同种族ＨＬＡ－ＤＲ型别分布的差异，可能是不同种族人群ＩＤＤＭ发病率变化的分子基础。

非酶促蛋白糖基化及其与糖尿病并发症

蛋白质的非酶促糖基化是蛋白质翻译后的主要修饰方式之一,是糖的醛基或酮基与蛋白质分子中赖氨酸或羟赖氨酸的ε-氨基结合形成糖基化蛋白质的反应过程。由法国化学家H·M.Maillard于1912年首次发现,故又称麦拉德(Maillard)反应。非酶促糖基化蛋白在临床诊断及糖尿病合并症的发生发展中起重要作用,是糖尿病领域的重要研究课题。本文简述蛋白质非酶促糖基化的过程、影响因素、特性及生物学意义。

NINJ2基因多态性与房山地区汉族脑卒中易感强相关

目的:探讨NINJ2基因旁侧的rs11833579位点多态性与房山汉族人群脑卒中的关系。方法:采取横断面病例-对照相关分析。分别采用多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析及直接测序技术检测NINJ2的基因型。脑卒中患者790人(其中脑梗塞679人),为北京房山第一医院2003～2008年住院患者;正常对照者811例,为房山区农村查体无脑卒中家族史的无血缘关系汉族正常人群。结果:NINJ2基因rs11833579位点的GG基因型和G等位基因频率在脑梗塞组较对照组明显升高,P均<0.001;脑出血组与对照组比较,G等位基因频率差异有统计学意义(P=0.005)。基因型对血糖、总胆固醇和甘油三酯的影响不大(P>0.05)。结论:NINJ2基因rs11833579位点多态性与房山汉族人群中脑卒中易感强相关。

北方汉族人群醛固酮合成酶基因多态性与高血压的关系

目的探讨北方汉族人群醛固酮合成酶基因(CYP11B2)启动子区C-344T和第三外显子K173R多态性位点与原发性高血压的关系。方法在哈尔滨报社人群中分别选取182例原发性高血压患者和189例正常对照者进行病例-对照研究,采用多聚酶链式反应/限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及直接测序技术检测C-344T和K173R的基因型。结果各位点基因型分布在男性和女性组中均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。C-344T位点的基因型和等位基因频率以及K173R的等位基因频率在整个群体和按性别分组后亚群体的分布在高血压组和对照组间差异均没有显著性(P≥0.05)。而K173R位点的基因型频率在整个群体中具有边缘统计学意义(P=0.0500),且在女性组中更为明显(P=0.0038),并以显性方式遗传,这种遗传方式在对混杂因素进行校正后更加明显。同时K173R与女性的收缩压显著相关。结论在北方汉族人群中,CYP11B2 K173R多态性位点与女性高血压的易感相关联。

血管紧张素转换酶基因缺失多态性与汉族原发性高血压的相关性

目的了解血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与汉族原发性高血压的易惑相关性。方法应用聚合酶链反应(PCR)鉴定高血压患者与正常血压对照者ACE基因第16内含子插入/缺失多态性。结果原发性高血压患者中ACE基因缺失纯合基因型(D/D)和缺失(D)等位基因频率均明显高于正常血压对照者(51.9%vs15.7%,0.69 vs 0.31,P<0.05)。结论 ACE基因缺失纯合型可能是汉族原发性高血压遗传易感性的基因标志。

中国汉族人血管紧张素转换酶基因I/D多态性与原发性高血压的关系

目的探讨ＡＣＥ基因Ｉ／Ｄ多态性在中国汉族人群分布规律及与原发性高血压（ＥＨ）的关系。方法取汉族ＥＨ病人１２１例，对照组９５人外周血，提取ＤＮＡ，应用ＰＣＲ技术进行ＡＣＥ基因Ｉ／Ｄ分型。结果在汉族血压正常群体中，ＡＣＥ基因Ｉ／Ｄ多态ＤＤ、ＤＩ、Ｉ基因型频率分别为２２％，４８％和３０％，其Ｄ和Ｉ等位基因频率分别为４６％和５４％。Ｉ／Ｄ多态分布符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ定律，达到遗传平衡，具有群体代表性。ＥＨ组与正常组相比，基因型和等位基因分布均具有显著统计学差异（Ｐ＜０．０５），ＥＨ组ＤＤ基因型和Ｄ等位基因频率增加。结论汉族ＥＨ发病与ＡＣＥ基因Ｉ／Ｄ多态性相关联。

Ⅰ型糖尿病HLA－DRB1等位基因分析

应用ＰＣＲ／ＳＳＰ基因分型方法鉴定ＨＬＡ－ＤＲＢ１与北京地区胰岛素依赖型糖尿病的关系。证明ＩＤＤＭ的ＤＲ９频率较对照人群明显升高（３０．３％ｖｓ１７．９２％，ｘ２＝６．９７，Ｐ＜０．０１）；而ＤＲ３在ＩＤＤＭ中虽有升高，但无统计学意义（７．０％ｖｓ２．３６％ ｘ２＝３．１９，Ｐ＞０．０５）；糖尿病患者ＤＲ２频率明显降低（７．４％ｖｓ１９．８％，ｘ２＝９．６７，Ｐ＜０．０１）。上述结果表明ＤＲ９、ＤＲ３与ＩＤＤＭ易感呈正相关，而ＤＲ２与ＩＤＤＭ抗性相关。

高血压患者血管紧张素转换酶基因多态性分析

目的探讨血管紧张素转换酶基因多态性与北京房山地区高血压遗传易感相关性。方法应用聚合酶链反应（PCR）技术，检测287例高血压患者和316例正常血压对照者的ACE基因多态性。结果群体相关分析结果表明，高血压组（包括原发性高血压和合并空腹血糖升高的高血压患者）ACE基因的D等位基因及其纯合基因型（D／D）频率较正常血压对照组明显升高（x2＝4．14，P＜0．05）。原发性高血压患者组ACE基因缺失纯合基因型频率较高血压伴有空腹血糖升高组显著增加，其频率分别为30.8％和19．2％（x2＝4．45，P＜0．05），而高血压伴空腹血糖升高者与对照者间D／D纯合基因型频率无显著差异。结论ACE基因插入／缺失多态性可能与房山地区汉族原发性高血压相关联。

解偶联蛋白2基因多态性与维吾尔族自然长寿的关联研究

目的探讨解偶联蛋白2(UCP2)基因-866 G/A、A55V和3′非翻译区(UTR)插入/缺失(I/D)多态性与维吾尔族自然长寿的关联。方法以新疆和田地区191名维吾尔族自然长寿个体为研究对象,以53名75岁前自然死亡的同地区、同民族个体作为对照。采用PCR-限制长度片段多态性(PCR-RFLP)和PCR-直接测序法对UCP2基因-866 G/A、A55V和3′-UTR I/D多态性进行分型。结果启动子-866G/A变异AA基因型与长寿相关,A55V多态性和3′-UTR I/D多态性基因型、等位基因分布在长寿组和对照组之间无差异。结论 UCP2基因启动子-866G/A多态性与长寿相关。

脑卒中患者ACE基因插入/缺失多态性研究

应用聚合酶链反应（PCR）法鉴定54例Ⅱ型糖尿病／高血压合并脑卒中患者和85例正常对照者血管紧张素转换酶（ACE）基因第16内含于中287bP片段的插入／缺失多态性。结果表明：（1）糖尿病／高血压合并脑卒中患者ACE插入纯合型基因（I／I）频率较对照组明显增加（46％vs29％，P＜0．05）；而插入／缺失杂合型基因频率较对照组降低（8％vs48％，P＜0．05）。（2）6％携带ACE插入纯合基因型的脑卒中患者，脑CT显示为多发性脑腔陈梗塞。结果提示，ACE插入纯合基因型可能与Ⅱ型糖尿病／高血压合并脑卒中的易感性相关联。

HLA-DR4与IDDM易感相关性研究

应用PCR／SSP、PCR／SSOP和PCR／RFLP方法，鉴定81例汉族IDDM患者和106例正常对照群体RR4及其亚型频率。结果显示IDDM与对照组DR4频率无显著差异（21.0％vs17.9％），但IDDM患者DRB10405（Dw15）等位基因频率较对照组明显升高（58.8％vs21.1％，RR＝2.67，P＜0.05），提示DRB10405等位基因与IDDM易感呈正相关。糖尿病家系DR4单倍型分析结果表明，DRB10405-DQB10302与IDDM共分离，提示DRB10405及其与DQB10302（DQw8）连锁不平衡是中国人IDDM易感的主要危险因素之一。该研究结果进一步证明不同种族IDDM易感基因不同。

CETP基因多态性及单倍型与蒙古族人群原发性高血压的关系

目的分析胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因TaqIB、D442G、I405V多态性及其单倍型与中国蒙古族人群原发性高血压(EH)的相关性。方法从内蒙古自治区随机选取高血压患者883例、健康对照1 044例进行病例对照研究。应用聚合酶链反应(PCR)和PCR产物直接测序法鉴定多态性位点的基因型,采用Haploview进行Hardy-Weinberg平衡和单倍型分析。结果 TaqIB、D442G2、I405V基因型及等位基因的分布在EH组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);但B2-G、B2-G-I单倍型在EH组中的分布频率低于对照组[B2-G:O~^R=0.359(95%CI:0.188,0.689)P=0.001;B2-G-I:O~^R=0.329(95%CI:0.157,0.691)P=0.002]。结论在中国内蒙古自治区蒙古族人群中,CETP基因TaqIB、D442G、I405V 3个位点的突变不能独立影响EH发病风险,但单倍型B2-G、B2-G-I携带者的EH发病风险显著降低,可能是降低该人群EH易感性的保护性因素。

蒙古族X连锁先天缺失牙/头发卷曲家系EDA基因新错义突变的发现

为鉴定蒙古族X连锁先天缺失牙 /头发卷曲家系外胚层发育不全无汗综合征致病基因 (EDA)突变类型及其与表型的关系 ,本文以七代患有先天缺失牙的蒙古族大家系为研究对象 ,应用聚合酶链反应产物直接测序 (PCR/Sequencing)分析每个成员EDA基因第一外显子碱基突变及其部位。测序结果显示 ,先证者及其他男性患者EDA基因第一外显子 193位的胞嘧啶被鸟嘌呤取代 ,均为 193G/G纯合基因型 ,193C→G颠换是一种新的错义突变 ,导致胞外区 6 5精氨酸转变为甘氨酸 (R6 5G)。先症者母亲Ⅳ 8为 193C/G杂合基因型 ,牙齿正常。携带 193G/C杂合基因型女性临床表型为Ⅴ 3表现 11、2 1、31、4 1缺如 ,Ⅴ 31表现 12、2 2缺如 ,两者均伴有头发卷曲 ,而Ⅴ 1、Ⅴ 6、Ⅴ 8、Ⅴ 11、Ⅴ2 0、Ⅴ 4 6及Ⅳ 10、Ⅵ 3等牙齿数目及形态均无明显异常 ,头发无卷曲。综上所述 ,该蒙古族大家系中EDA基因第一外显子 193位C→G颠换引起的错义突变 ,是导致其发病的主要分子机制之一。但携带

糖尿病家系 HLA-DRB_1、DQA_1、DQB_1 单倍型及 HLA-DQA_1 启动子(QAP)的序列分析

对一糖尿病家系成员ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＡ１、ＤＱＢ１单倍型及ＤＱＡ１启动子区核苷酸序列进行分析，结果表明：ＩＤＤＭ患者Ｆ、Ｓ５为ＤＲ３－ＤＱＡ＊１０５０１ＤＱＢ＊１０２０１－／ＤＲ９－ＤＱＡ＊１０３０１－ＤＱＢ＊１０３０３杂合子；其它表型正常者均为ＤＲ９－ＤＱＡ＊１０３０１－ＤＱＢ＊１０３０３／ＤＲ５（１２）－ＤＱＡ＊１０５０１－ＤＱＢ＊１０３０１杂合子。ＨＬＡ－ＤＱＡ１启动子序列分析显示，患者Ｆ、Ｓ５在－１７６，－６６和－９２位分别发生Ａ→Ｇ，Ａ→Ｇ和Ｃ→Ｔ单个碱基取代突变。

棉酚对大鼠精子细胞碱性核蛋白合成与更新的影响

大鼠喂服棉酚(30毫克/公斤体重/日)3周、4周和6周后,用特异显示精氨酸的坂口反应及显示富于赖氨酸碱性蛋白的肝素-阿尔新蓝(HAB)染色法,结合并合H-精氮酸液闪测定,对棉酚影响精子细胞核蛋白在合成与代谢上的改变,进行分析。结果表明:1.正常大鼠14期以后的晚期精子细胞核坂口反应阳性,HAB染色阴性。相反,精原细胞、精母细胞及14期以前的精子细胞坂口反应为阴性,而HAB染色较深,表明14期前后精子细胞核蛋白有精蛋白合成的转换过程。2.服棉酚后,部分曲细精管中14期以后的精子细胞及游离精子坂口反应变弱,并能为HAB染色。这是甲绿-焦宁染色异常的原因。也提示棉酚对晚期精子细胞核蛋白转变可能有干扰作用。3.睾内注射H-精氨酸的活体实验和分离后的精子细胞与同位素温育的体外实验,均未见对照组和实验组之间有明显差异。对精子细胞变态过程中核蛋白合成上的转换的细胞化学显示方法,棉酚对这一转换过程的干扰作用的可能性及其意义予以讨论。

人白细胞抗原DQB_1 5'-调控区序列与I型糖尿病的关联

应用聚合酶链反应（PCR）、PCR/SSCP 和克隆测序等方法比较分析汉族1-型糖尿病患者与正常对照者HLA-DQB 1 5'-调控区多态性。结果显示携带不同等位基因的患者与对照者DQB 1 5'-调控区y s box 核苷酸序列相同，且与白种人基因结构一致；y box 核苷酸序列存在二种结构，CCTAGAGACAGATT 序列常常与DQB 1 *0302 等位基因在同一单倍型；转录起始位点至y box 间-44 至-61 位存在多态性，-59 至-61 位AAG等位基因可能与1-型糖尿病易感相关联，在2 例携带DQB 1 *0601 等位基因患者的-131 至-128 位间发现CACCACA A 单个碱基取代突变。表明HLA-DQB 1 基因5'-调控区主要作用元件旁侧核苷酸变异可能参与1-型糖尿病的病因学。

PCR／SSCP技术在检测HLA基因点突变中的应用

聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ）是根据核苷酸序列不同的单链ＤＮＡ，可形成不同构象，从而在不含变性剂的聚丙烯酰胺凝胶中泳动速度不同的原理，分离鉴定等长ＤＮＡ单链的方法。本文应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ方法检测了６０例无亲属关系个体白细胞抗原Ⅱ类基因（ＨＬＡ－ＤＯＡ１）５－上游调控区的等位基因多态性，并以ＰＣＲ直接测序证明每种ＳＳＣＰ带型都与不同位置单个碱基取代相关联。

胰岛素依赖型糖尿病患者的HLA－DQA_1等位基因分析

应用聚合酶链反应与序列特异寡核苷酸探针杂交技术（ＰＣＲ／ＳＳＯＰ），分析了北京地区６１例汉族胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）患者和５０例非糖尿病对照者的ＨＬＡ－ＤＱα链第５２位氨基酸的编码基因。结果表明：１．８９％的患者ＨＬＡ－ＤＱα链５２位是精氨酸，其编码基因为ＨＬＡ－ＤＱＡ１０３０１和（或）０５０１，其中１０８％为０３０１纯合子，７０．３％为０３０１杂合子，１８．９％为０５０１纯合子，２．患者中的ＨＬＡ－ＤＱＡ１０３０１和０５０１等位基因频率较对照组明显升高，相对危险度分别为ＲＲ＝１２．５４９，ｐ＜０．００１和ＲＲ＝１．５１０，ｐ＞０．０５；３．患者中ＨＬＡ－ＤＱＡ０２０１等位基因频率较对照组无明显降低。上述结果提示，ＨＬＡ－ＤＱＡ１０３０１和０５０１等位基因与中国汉族人群的ＩＤＤＭ遗传易感性正相关，而０２０１等位基因与ＩＤＤＭ抗性无关。

原发性高血压的易感基因

原发性高血压(EH)是遗传因素和环境因素相互作用引发的复杂疾病,明显的家族聚集现象、同卵双生子发病一致性等研究结果,揭示了EH的多基因遗传性质。鉴定EH易感基因不仅有助于阐明其病因学,也有助于探索预防途径和研制新的治疗药物。本文主要介绍EH易感基因研究策略和已发现的基因变异;分析EH易感基因研究存在的问题和理想样本选择对成功鉴定EH易感基因的作用。