miR-503靶向作用RECK调控口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和凋亡的机制研究

目的:通过研究miR-503靶向回复引导半胱氨酸丰富蛋白Kazal基元(reversion inducing cysteine rich protein with Kazal motifs,RECK)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)进展中的作用。方法:将人OSCC细胞SCC-4分为NC inhibitor组(转染miR-503 inhibitor阴性对照序列)、miR-503 inhibitor组(转染miR-503 inhibitor)、si-NC组(转染RECK siRNA阴性对照序列)、si-RECK组(转染RECK siRNA)、miR-503 inhibitor+si-NC组(共转染miR-503 inhibitor和RECK siRNA阴性对照序列)和miR-503 inhibitor+si-RECK组(共转染miR-503 inhibitor和RECK siRNA)。实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-503和RECK在各组SCC-4细胞及永生化人口腔角质形成细胞RT7中的表达;Western blotting检测RECK蛋白的表达;TargetScan预测miR-503的靶基因并通过双荧光素酶报告基因检测来验证miR-503与RECK的靶向关系;CCK-8和EdU染色检测各组细胞的增殖能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测各转染组细胞凋亡情况。结果:相比RT7细胞,miR-503在SCC-4细胞中高表达(P<0.05),RECK则呈低表达(P<0.05);与NC inhibitor组相比,miR-503 inhibitor组细胞中RECK mRNA及RECK蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05);TargetScan数据库及荧光素酶报告基因分析显示了RECK和miR-503之间的靶向关系(P<0.01),提示miR-503可靶向抑制RECK的表达;与NC inhibitor组相比,miR-503 inhibitor组SCC-4细胞的增殖能力、侵袭能力均显著下降(P<0.05),而细胞的凋亡则显著增加(P<0.01),抑制miR-503表达降低了OSCC细胞的增殖、侵袭并加速凋亡;与si-NC组相比较,si-RECK组细胞增殖、侵袭能力均显著增加(P<0.05),而细胞凋亡能力显著下降(P<0.05),敲低RECK增加了OSCC细胞的增殖、侵袭并降低凋亡;与miR-503 inhibitor+si-NC组相比较,miR-503 inhibitor+si-RECK组细胞中RECK mRNA的表达水平和细胞凋亡能力均显著下降(P<0.05),细胞增殖、侵袭能力显著增加(P<0.05),敲低RECK可削弱miR-503 inhibitor对OSCC细胞生物学行为的抑制作用。结论:miR-503在OSCC细胞中表达上调,抑制miR-503可削弱其对靶基因RECK的下调,从而降低肿瘤细胞的增殖与侵袭能力,并促进细胞的凋亡。

姜黄素调控miR-21对病毒性心肌炎细胞凋亡、炎症反应及NF-κB信号通路的影响

目的:探讨姜黄素(Cur)是否通过调控微小RNA-21(miR-21)影响病毒性心肌炎(VMC)心肌细胞的凋亡及炎症反应。方法:用柯萨奇病毒B3(CVB3)感染心肌细胞建立VMC心肌细胞模型记为CVB3组,未经任何处理的心肌细胞作为对照组。以不同浓度(0.25,0.50,1.00μmol)的Cur处理心肌细胞进行干预,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;以酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Cur对miR-21表达水平的影响;分别将anti-miR-con、anti-miR-21转染至心肌细胞后使用CVB3处理,分别将miR-con、miR-21 mimics转染至心肌细胞后使用Cur与CVB3处理,采用上述方法检测细胞凋亡率及炎性因子的含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、核因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,CVB3组心肌细胞凋亡率[(6.81±0.60)%与(21.38±1.92)%]升高(P<0.05),miR-21[(1.00±0.05)与(1.84±0.12)]、Cleaved Caspase-3表达水平[(0.31±0.01)与(1.21±0.08)]、TNF-α[(105.44±9.15)ng/mL与(623.10±41.06)ng/mL]、IL-6[(89.01±6.11)pg/mL与(453.67±31.32)pg/mL]、MCP-1[(491.16±38.02)pg/mL与(1803.11±82.01)pg/mL]水平升高(P<0.05),Cur处理后能够逆转CVB3对VMC心肌细胞凋亡、炎性因子水平及NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响;干扰miR-21表达可降低细胞凋亡率及TNF-α、IL-6、MCP-1水平(P<0.05),抑制Cleaved Caspase-3过表达,miR-21能够部分逆转Cur对VMC心肌细胞凋亡、炎症反应及NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。结论:Cur可通过下调miR-21的表达缓解VMC心肌细胞炎症反应而对心肌细胞发挥保护作用,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路活化及心肌细胞凋亡有关。